猪口蹄疫病毒合成肽疫苗免疫抗体水平检测的试剂盒选择及评估

杨 颖，孙玉霜，袁雪涛，王芳蕊，李 洁，朱向东★

（1. 天津市动物疫病预防控制中心，天津 300402；2. 天津市农业发展服务中心，天津 300061）

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染引起偶蹄动物的一种急性、热性、接触性传染病。猪的发病临床特征为患猪蹄部、鼻镜等出现水泡。口蹄疫为我国规定的一类动物疫病，可对生猪养殖业造成巨大经济损失和社会影响。

为了评价并筛选合成肽疫苗免疫后口蹄疫抗体检测试剂盒，在猪免疫32d 后，分三批采集不同猪场血清样品并采用不同试剂盒和相应检测方法进行疫苗免疫后O 型、A 型抗体水平检测的比对试验，为口蹄疫合成肽疫苗免疫后抗体水平准确监测提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验样品从蓟州区不同猪场随机采集集中免疫口蹄疫O 型、A 型二价合成肽疫苗后第32d后，分三批采集的血清样品42 份。

1.2 检测试剂（见表1）

表1 猪O 型口蹄疫抗体检测试剂统计表

1.3 试验方法按照各类试剂盒说明书操作。

2 试验结果

2.1 结果判定按照各试剂盒说明操作，抗体检测结果按照农业农村部监测计划确定。液相阻断ELISA 抗体效价≥26 判定为免疫合格；VP1 结构蛋白ELISA 抗体效价≥25 判定为免疫合格；进口阻断ELISA(VDP)抗体阳性即判定为免疫合格。

表2 猪A 型口蹄疫抗体检测试剂统计表

2.2 检测结果使用7种口蹄疫抗体检测试剂盒，其中5种O 型试剂盒和3种A 型试剂盒，分别对42 份血清进行抗体检测。

猪O 型口蹄疫抗体检测结果如表3所示，使用2种VP1 结构蛋白ELISA 试剂盒检测，阳性率均为100%，离散系数分别为12.18%和25.13%。使用3种阻断ELISA 试剂盒检测，阳性率分别为50%、83%和57%，离散系数较高，在100.7%以上，且三批血清中阳性率最低的仅为27%。

表3 猪O 型口蹄疫抗体检测结果

猪A 型口蹄疫抗体检测结果如表4所示，使用A 型VP1 结构蛋白ELISA 试剂盒的阳性率为100%，离散系数为42.01%。使用A 型抗体液相阻断ELISA 试剂盒的总阳性率为31%，三批样品阳性率分别为75%、27%和0%；使用A 型抗体固相阻断ELISA 试剂盒的总阳性率为62%，第二批样品的阳性率仅33%，总离散系数为66.56%，离散系数较高。

表4 猪A 型口蹄疫抗体检测结果

3 分析与讨论

3.1 本次检测结果显示，蓟州猪场在免疫猪口蹄疫O 型、A 型二价合成肽疫苗后，猪口蹄疫O 型抗体水平其中两种试剂盒检测结果一致达到100%。A型抗体采用猪口蹄疫A 型病毒VP1 结构蛋白ELISA 诊断试剂盒整体合格率达到100%。表明合成肽疫苗免疫后对口蹄疫能达到有效免疫保护效果。

3.2 从O 型口蹄疫抗体不同试剂盒检测合格率结果看，O 型VP1 结构蛋白ELISA 诊断试剂盒离散系数较低，另后三种试剂盒合格率与前两种差异显著，建议口蹄疫合成肽疫苗免疫后采用VP1 结构蛋白ELISA 试剂盒进行检测。

3.3 从A 型口蹄疫抗体的三种试剂盒结果分析，A型VP1 结构蛋白ELISA 是合成肽疫苗免疫后A 型抗体检测的最佳选择。

在动物疫病防控工作中，疫苗免疫是最有效的手段，而选择合适的试剂盒开展科学监测是客观评价疫苗免疫效价和免疫质量的关键环节。本文通过比对试验为实验室开展猪口蹄疫合成肽疫苗免疫后精准监测抗体水平提供试剂盒选择的参考，为养殖场户制定科学免疫程序提供了依据。