饮料中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定能力验证

康 婕，李 媛，石 菲，梁喜玲，刘娟娟，樊 成

（陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安 710048）

安赛蜜又称为乙酰磺胺酸钾，是一种白色结晶物质（单斜结晶形），是一种可作为甜味剂的食品添加剂，对光、热、酸、碱及微生物具有很高的稳定性，在空气中不吸潮，适用范围较广泛，是当前世界上第4代合成甜味剂，24 h可以排出体外，因此没有卡路里[1-6]。安赛蜜在国际甜味剂市场备受青睐[7]。安赛蜜为人工合成甜味剂，在饮料类中安赛蜜最大允许使用量为0.3 g/kg。食品中超标使用会给人们的身体健康带来威胁，因此加强食品中安赛蜜等食品添加剂的监管及检测工作任重道远。

本能力验证项目旨在了解目前省内实验室在饮料中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）等食品添加剂检测领域的整体水平，提高全省乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的检测能力结果作为为政府遴选承担监抽任务的依据。本次能力验证计划的方案计划遵循GB/T 27043—2012[8]、GB/T 28043—2019、CNAS—GL002：2014[9]、CNAS—GL003：2018[10]等相关规定。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

YP5002型电子天平（上海佑科仪器仪表有限公司）；TG16-WS型台式高速离心机（湖南湘仪实验室仪器公司）；Breeye1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；超声清洗仪；抽滤瓶；G3耐酸漏斗；0.45 μm微孔滤膜；层析柱。

甲醇、乙腈、硫酸铵、硫酸、中性氧化铝、乙酰磺胺酸钾标准品，Bepure公司；实验室用水均为一级水。

1.2 实施方案

制定科学合理的方案→组织专家对方案进行研讨及提出建设性意见→样品制备及均匀性稳定性检验→发放“能力验证报名表”，告知试验室参加并返回报名表并审核→作业指导书编制→样品登记、编号、贴标→样品发放→回收结果→数据统计、处理及中期报告编写→补测及数据报送→最终数据统计处理、技术分析→报告编制。

1.3 保密措施

为确保本次能力验证工作严格的公平公正，结果真实可靠，协调组织单位分组（督察组和统计组）实施编号和统计工作。由督察组对参加本次能力验证的单位进行编号，并对样品进行编号、发放，编号原则由督察组统一管理。待能力验证结果汇总至统计组后，从督察组拿到编号原则，统计组按照预定的统计方法进行计算。

1.4 能力验证样品设计及制备

安赛蜜在饮料生产企业广泛应用，是国家和省级食品安全监督抽检的检验项目，样品制备是能力验证的关键环节。本次能力验证活动的检测样品基质采用市售的同一批次饮料，检测筛选不含安赛蜜的饮料作为空白样品基质，添加目标物食品添加剂安赛蜜，并加入干扰物质阿斯巴甜和纽甜，添加一定量的防腐剂，采用逐级放大的方式经振摇、搅拌混匀并均质制备成安赛蜜浓度为0.12～0.20 g/L的A、B、C 3组样品（其中C为备用样），每组样品制备2 L，分装后高温高压灭菌，防止微生物滋生；测试样品采用双样发样，每个实验室获得A+B样品。

1.5 能力验证样品的包装、标识、发放

量取制备好的样品约30 mL分装于玻璃瓶中，高温高压灭菌（115 ℃，30 min），对样品进行唯一性标识，随机编号SP-XXX，置于冷藏条件下保存，向报名的实验室分发2个不同浓度的样品，即A+B样品组合。每家参加实验室独立编号，收到两份各带有唯一编号的供测试样品。发放样品时同时发放作业指导书、样品接收状态确认表和测试结果报告单。运输过程按照样品的保存条件储存，对于个别因素引起的样品丢失或损坏，尽快通知实施机构，重新领取样品。

1.6 能力验证检测方法

本次能力验证推荐参加的实验室采用《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》（GB/T 5009.140—2003）进行测定。如果参加实验室采用推荐方法以外的方法（如实验室常用方法、非标方法或者其他标准方法），需在结果报告单中标明。

1.7 结果回收

检测机构在作业指导书规定的时间内完成检测工作后填写测试结果报告单，并在报送电子版的同时将测试结果报告单和原始记录一同寄送项目实施单位，以便后续的技术分析。

1.8 能力验证统计方法

将参加能力验证实验室的结果进行汇总，校对无误后，按稳健统计方法计算实验室内的Z值和实验室间的Z值。Z比分数判定原则是|Z|≤2为满意结果，2＜|Z|＜3为可疑结果（有问题），|Z|≥3为不满意结果（离群值）。

2 结果与分析

2.1 均匀性测定

采用本次能力验证推荐的方法GB/T 5009.140—2003中高效液相色谱法对样品中安赛蜜含量进行测定，并采用单因素方差分析进行均匀性检验。从制备好的A、B、C 3个浓度水平样品中随机抽取10份样品用于均匀性检验，每个样品重复测定2次。在短时间内由同一测试人员，使用《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》（GB/T 5009.140—2003）测试方法、相同测试条件对样品进行安赛蜜的检测。均匀性采用单因子方差统计分析，采用F检验查询F检验临界值表，只有当样品中安赛蜜含量的F值小于F临界值（F0.05(9,10)=3.02）时，表明制备样品均匀。

由表1～表3可知，均匀性检验计算的F值＜F临界值，表明在0.05显著性水平时，样品间不存在显著性差异，样品A、B、C中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）含量是均匀的。

表1 样品A中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）均匀性检验数据分析结果

表3 样品C中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）均匀性检验数据分析结果

2.2 稳定性测定

本次能力验证计划在7～10月完成检测，参加实验室均在省内。在此过程中，不同地方气温差异不大，本次能力验证样品采用领样形式，1 d内可到达各参加实验室，样品在传递过程中加冰袋运输保存，稳定性采用t检验对数据进行统计分析，模拟样品传递过程中的条件，在试验期间抽取10个样本，每个样本重复测定2次，人机料法环与均匀性检验保持一致。稳定性试验持续时间为37 d，测定时间间隔按先密后疏的原则设计，共分为4个间隔。样品分别于制样后第1 d（9月4日）、第5 d（9月8日）、第10 d（9月13日）、第37 d（10月10日，补测发样日）进行检测。以均匀性试验所得结果为参比数据，采用t检验方法进行稳定性检验。当t值小于tα(n1+n2-2)时，表明两个相邻时间抽取的样品中安赛蜜的含量无显著性差异，即制备样品稳定。

表2 样品B中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）均匀性检验数据分析结果

由表4可知，计算所得的t值均＜t临界值（t0.05(18)=2.101），表明在0.05显著性水平时，样品A、B、C中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）含量是稳定的。

表4 样品中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）稳定性检验数据分析结果

3 能力验证结果统计

3.1 初测结果统计

本次能力验证全省共有31家实验室报名参加，其中质监系统实验室9家，食品药品检验所实验室9家，社会和企业实验室13家。收到有效测试报告30份（1家逾期上报结果，不计入统计），对30家实验室上报的结果依据《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》（CNAS—GL002：2018）进行统计分析，详见表5。由表6可知，其中结果为满意的实验室有22家，占73.3%；结果为可疑的实验室有1家；结果为离群的实验室有7家。

表5 检测结果稳健统计值汇总表

表6 各实验室能力验证初测结果

3.2 统计图表

为使参加者更直观地了解本次能力验证活动的结果，采用直方图来表示有关的统计量。Z比分数序列直方图按照Z比分数的大小顺序显示出每个实验室的Z比分数，并标有实验室唯一代码，安赛蜜Z比分数序列直方图参见图1～图2。由图1可以看出，实验室间结果可疑和不满意的实验室有SP-007、SP-009、SP-011和SP-017，主要反应这4家实验室的结果存在系统误差。由图2可以看出，实验室内结果可疑和不满意的实验室有SP-003、SP-007、SP-009、SP-013、SP-017、SP-024和SP-030，说明这7家实验室安赛蜜的分割样品对结果间差值太大。

图1 样品A+B安赛蜜测定值ZB比分数序列直方图

图2 样品A+B安赛蜜测定值ZW比分数序列直方图

3.3 补测结果统计

对第一次检验结果不满意或可疑的检测机构在进行实验室整改后给予一次补测机会。本次能力验证共有9家实验室参加了补测，收到补测测试报告9份，其中7家实验室结果满意，还有2家结果不满意。

4 分析和建议

4.1 检测方法的差异

参加本次能力验证的31家实验室均采用《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》的国标方法进行测定，标准中只有高效液相色谱法一种检测方法，故实验室间检测方法不存在差异。

4.2 检测过程的质量控制

影响检测结果准确性的因素有人员、设备、使用的试剂、环境条件和所采用的方法等。检测过程中要严格控制实验条件，保证使用的仪器处于良好的工作状态，使用的标准溶液按照标准要求配制，特别是测试人员要具备相应的能力。对于饮料中的安赛蜜的测定过程，尤其应注意以下几个问题。

（1）样品提取。样品若未完全溶解于提取溶剂，会导致结果偏低。

（2）样品净化。①固相萃取柱。不同批次中性氧化铝固相萃取柱回收率存在差异。②样液淋洗速度。样液淋洗速度未控制恰当和保持一致，其中速度过快的，目标物没有被完全吸附；洗脱速度太慢，则不能把目标物完全洗脱下来。③样品收集。用流动相洗脱时，要准确收集洗脱液25 mL并混匀。

（3）样品测定。①标准物质纯度。在配制标准溶液时，应按照标准物质纯度折算出标准溶液实际浓度。②标准曲线浓度。标准曲线浓度范围要覆盖试样。③液相色谱仪仪器状态不稳定。紫外检测器状态不稳定，或仪器流动相管路堵塞，导致流动相系统不稳定，干扰了进样。

（4）检测人员。在谱图处理过程中，若检测人员对检测结果计算有误，则会直接导致最后结果产生偏差。

4.3 检测报告原始记录分析

通过对31家实验室的原始记录进行审核，发现存在以下问题：计算错误导致检测结果错误；图谱与原始记录不相符；原始记录和检测报告单位不相符；未按标准要求取样、检测。

5 建议

陕西省产品质量监督检验研究院开展的饮料中乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定能力验证制备了满足均匀性和稳定性要求的饮料样品，制定了详细的实施方案，编制了作业指导书，考核单位覆盖食药系统、质检系统、出入境以及第三方检验检测实验室，对全省31家通过取得计量认证合格证书的食品检测机构的乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）检测能力进行考核，识别各实验室间存在的差异，在一定程度上反应了陕西省检验检测整体能力和水平。

考核结果不仅对验检测机构内控的有效性进行了确认，同时对提升质量控制的能力和检验人员的检测水平有所帮助，也可作为政府机构遴选监督抽检项目实施单位的依据。本次能力验证满意率为93.5%，这说明大部分实验室对分析方法的掌握应用较好，少数实验室出现离群或可疑结果，需要其自行整改。建议参加实验室参照本报告给出的信息，根据相关标准和规范，结合自身实际，重点从仪器状态（如仪器的使用、调试、维护和方法是否优化符合要求等）、标准品（如标准品是否过期、标准品纯度是否折算等）、人员操作（样品的提取、数据处理等操作过程加强培训）及结果计算等环节上查找原因，找出差距和问题所在，制定纠正措施，有效整改，使参加此次能力验证达到真正目的。