锌转运蛋白8抗体和酪氨酸磷酸酶抗体检测在不同分型糖尿病诊断中的临床价值

巫翠云，魏小斌，杜梅英，范维丽，赵庆珠，翁雪燕

（1.中南大学湘雅医学院附属海口医院检验科；2.中南大学湘雅医学院附属海口医院内分泌科，海南海口 570208）

糖尿病是由遗传、环境、行为等多种因素诱发的代谢性疾病，临床以胰岛素分泌不足或胰岛作用障碍为特征，导致血糖水平异常升高。糖尿病呈进行性发展，最终可累及微血管和周围神经，导致不良预后的发生[1]。而糖尿病的分型诊断是开展精准治疗的前提，我国糖尿病以2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）最为常见，该病起病缓慢，临床具有较大异质性[2]。但临床偶见1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）和成人隐匿性自身免疫性糖尿病（latent autoimmune diabetes in adults，LADA）。不同分型糖尿病临床症状相似[3]，既往报道显示，抗体检测有助于不同糖尿病分型的鉴别诊断[4]。锌转运蛋白8抗体（ZnT8A）自2007年被发现以来，有关其在糖尿病发病机制中的认识不断深入[5]，酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）属Ⅰ型跨膜黏蛋白，有报道显示，其在LADA患者中呈异常高表达[6]。推测ZnT8A、IA-2A可能有助于糖尿病分型的鉴别诊断。为验证这一结果，本研究探讨两者在糖尿病分型鉴别诊断中的临床应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年3月至2022年1月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的314例糖尿病患者，根据不同分型将患者分为T1DM组（23例，1型糖尿病）、T2DM组（279例，2型糖尿病）和LADA组（12例，成人隐匿性自身免疫性糖尿病），另选取同期院内30例健康体检者作为对照组进行回顾性分析。T1DM组患者中男性9例，女性14例；年龄12～81岁，平均年龄（53.92±17.64）岁；体质量指数（BMI）20.80～26.50 kg/m2，平均BMI（22.96±1.79）kg/m2；糖尿 病 家族 史7例。T2DM组患者中男性161例，女性118例；年龄15～83岁，平均年龄（52.08±15.72）岁；BMI 21.00～26.20 kg/m2，平均BMI（23.02±1.84）kg/m2；糖尿病家族史72例。LADA组患者中男性8例，女性4例；年龄24～75岁，平均年龄（52.20±15.23）岁；BMI 21.10～26.45 kg/m2,平均BMI（23.34±1.80）kg/m2；糖尿病家族史4例。对照组研究对象中男性17例，女性13例；年龄21～75岁，平均年龄（53.16± 14.84）岁；BMI 20.50～26.00 kg/m2，平均BMI（23.12±1.77）kg/m2；空腹血糖在参考范围内，无自身免疫性疾病。4组研究对象性别、年龄、BMI及糖尿病家族史等一般资料比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），组间具有可比性。本研究经中南大学湘雅医学院医学附属海口医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①患者均符合《中国2型糖尿病防治指南(2017年版)》[7]中糖尿病的诊断标准；②临床病例资料完整。排除标准：①继发性糖尿病者；②合并恶性肿瘤者；③妊娠或哺乳期患者；④肝、肾功能严重不全或有严重心、肺基础疾病者。

1.2 检测方法 ①标本采集：抽取研究对象清晨空腹肘静脉血3 mL，采用离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司，型号：KDC-40型）对血液标本以2 500 r/min离心5 min，取上清液，冷冻保存备用。②免疫印迹检测：取出试剂盒，将抗原膜条置于孵育槽内，每槽加1.5 mL样本缓冲液，均匀摇晃5 min后弃孵育槽内的液体；在每槽内加1.5 mL解冻稀释后的血清样品，将膜条置于摇摆床，轻微摇晃孵育30 min；弃孵育槽内液体，在每槽内加1.5 mL清洗缓冲液，将膜条置于摇摆床上，轻微摇晃5 min，去孵育槽内液体，重复洗涤2次；弃孵育槽内液体，每槽加1.5 mL稀释后的酶结合物，将膜条置于摇摆床上轻微摇晃，孵育30 min；弃孵育槽内液体，每槽加1.5mL底物液，在室温下将膜条置于摇摆床上孵育10 min；弃孵育槽内液体，每槽加1.5 mL蒸馏水，室温下将膜条置于摇摆床上轻微摇晃1 min，弃孵育槽内液体，重复洗涤2次。待膜条干燥后将膜条检测带与标准带结果进行对照，记录检测结果。

1.3 观察指标 ①比较4组研究对象ZnT8A和IA-2A阳性率。②分析ZnT8A和IA-2A在鉴别诊断不同糖尿病分型中的价值。

1.4 统计学分析 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理。计量资料以（x）表示，多组间比较行方差分析，两两比较采用LSD-t检验；计数资料以[例(%)]表示，组间比较行χ2检验。ZnT8A和IA-2A的诊断价值采用受试者工作曲线（ROC）分析，结果以曲线下面积（AUC）表示，以AUC＞0.75为准确性高。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组研究对象ZnT8A和IA-2A阳性率比较 T1DM组研究对象ZnT8A阳性率显著高于其他3组，IA-2A阳性率显著高于T2DM组和对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。T1DM组与LADA组研究对象IA-2A阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 4组研究对象ZnT8A和IA-2A阳性率比较[例(%)]

2.2 ZnT8A和IA-2A判断T1DM价值分析 分别以ZnT8A、IA-2A及二者联合预测概率为检验变量，以是否为T1DM为状态变量，绘制ROC曲线，见图1。ROC分析结果显示，ZnT8A与IA-2A单项指标对判断T1DM具有一定价值（P＜0.05），二者联合预测概率对诊断T1DM具有较高准确性（AUC＞0.75，P＜0.05），ZnT8A与IA-2A联合预测概率判断T1DM的AUC值显著高于ZnT8A、IA-2A单一指标（z=-2.291，1.978；P=0.008，0.014），见表2。

表2 ZnT8A和IA-2A判断T1DM价值分析

图1 ZnT8A和IA-2A判断T1DM的ROC曲线

3 讨论

近年来，随着人们物质生活水平的不断提高和生活方式的日益多样化，糖尿病发病率呈上升趋势，糖尿病已成为威胁人们生命健康的严重公共卫生问题[8]。本研究共选取314例糖尿病患者为研究对象，其中T2DM患者例数最多，有279例，占88.85%，与既往报道一致[9]。随着人们对糖尿病认知的不断深入，糖尿病分型也不断地更新。既往糖尿病分型主要基于患者临床症状和血清胰岛素含量，而LADA像是从T2DM向T1DM的过渡[10]。随着临床经验的积累和检测技术进步，糖尿病自身抗体谱试剂盒出现和推广，临床分型倾向于检测血清免疫标记物表达情况。患者血清存在糖尿病自身抗体是T1DM和LADA的特点之一。自身抗体免疫学检测被认为具有自身免疫性疾病预测作用。因而，及时、准确地发现体内糖尿病自身抗体将有助于糖尿病分型诊断，以最大程度地保护胰岛细胞功能，延缓病情进展。

ZnT8A主要分布在胰岛β细胞内含有胰岛素颗粒的囊泡膜上，胰岛素颗粒中的Zn2+累积会影响胰岛素的正常分泌、储存。研究显示，Zn2+与糖尿病早期发病的关系密切，而锌的转运需要大量高效的锌转运蛋白抗体来完成[11]。ZnT8A通过影响胰岛素中Zn2+聚集，调节胰高血糖素和胰岛素旁分泌。低锌血症在糖尿病患者中较为常见，而锌转运蛋白抗体高表达多提示锌含量及颗粒细胞储存能力增强。在胰岛β细胞自身免疫反应中，ZnT8A属典型自身抗原，ZnT8A作为异常体液免疫应答对胰岛β细胞进行攻击的重要标志[12]，可作为其诊断的预警信息，在T1DM患者出现临床症状之前，可以早期预测并指导临床治疗。

IA -2A代表胰岛β细胞的特异性免疫。这种抗体是自身反应性T淋巴细胞的靶分子，主要在脑和胰腺中发挥作用，能以较高敏感度和特异度反映β细胞损伤引起的早期发病[13-14]。LADA早期临床特点与T2DM类似，成为误诊、漏诊的原因[15]。因LADA病程长、临床症状出现晚，多数患者在检测糖尿病自身抗体时才发现体内存在自身抗体，此时患者胰岛细胞已被破坏[16]。

本研究结果也显示，T1DM组研究对象ZnT8A阳性率显著高于其他3组，IA-2A阳性率显著高于T2DM组和对照组，提示检测ZnT8A与IA-2A可能有助于糖尿病的分型诊断；而进一步ROC分析显示，ZnT8A与IA-2A联合预测判断T1DM的敏感度达0.867，提示两者联合检测可弥补IA-2A单项检测难以鉴别LADA与T1DM的不足，这对于糖尿病分型诊断具有重要价值。

综上，ZnT8A与IA-2A与糖尿病发生、发展密切相关，两者联合检测有助于糖尿病分型的诊断和鉴别诊断，具有较高的临床应用价值。