蜡梅花配方颗粒质量标准研究*

张 强，曾令连，李 磊

（1.仲景宛西制药股份有限公司，河南 南阳 474550； 2.河南省中药固体制剂技术创新中心，河南 南阳 474550）

蜡梅花为蜡梅科植物蜡梅Chimonanthuspraecox（L.）Link 的花蕾，有解暑清热、理气开郁功效［1］，常用于治疗暑热烦渴、头晕、胸闷脘痞、梅核气［2］、咽喉肿痛、百日咳、小儿麻疹［3］、烫火伤。蜡梅花中主要含有氨基酸、多肽、蛋白质、还原糖、多糖、苷类、皂苷、有机酸、酚类、鞣质、蒽醌、甾体、三萜、挥发油［4-9］、黄酮、香豆素［10］、油脂等物质［11-15］。蜡梅花配方颗粒现行标准依2018 年版《湖北省中药材质量标准》采用蜡梅花药材为原料，按常规颗粒剂的方法制备。为此，本研究中采用薄层色谱（TLC）法对蜡梅花进行定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法对其进行含量测定，以建立该制剂可行的专属质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695 - 2489 型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；FK224型电子分析天平（南京伯尼塔科学仪器有限公司）；EX2252H/AD 型电子分析天平（美国Ohaus公司）；KQ-500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100080-201811，含量为91.7%）；蜡梅花对照药材（成都普菲德生物技术有限公司，批号为181010）；蜡梅花配方颗粒［仲景宛西制药股份有限公司，批号分别为181101，181102，181103，规格为每袋1.5 g（相当于饮片6 g）］；薄层板（青岛海洋化工有限公司，规格为100 mm×100 mm）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

取样品粉末约1 g，精密称定，加乙醇30 mL，加热回流30 min，放冷，滤过，蒸干，残渣加水10 mL 使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液；取蜡梅花对照药材1 g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；按蜡梅花配方颗粒处方及工艺，制备缺蜡梅花的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。取上述溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸（5.5∶3.5∶0.1，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色荧光斑点，且阴性对照无干扰。详见图1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇- 1%冰醋酸溶液（32∶68，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：257 nm；柱温：30 ℃；进样量：5 μL。

2.2.2 溶液制备

1-3.供试品溶液 4.对照药材溶液 5.阴性对照品溶液图1 薄层色谱图1-3.Test solution 4.Reference medicinal materials solution 5.Negative reference solutionFig.1 TLC chromatograms

取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1.271 0 mg的对照品贮备液，取适量，稀释为质量浓度为0.127 1 mg/mL的对照品溶液；取样品约0.5 g，加甲醇100 mL，超声（功率250 W，频率40 kHz，下同）处理30 min，放冷，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；按蜡梅花配方颗粒处方及工艺制备缺芦丁的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2.2 项下3 种溶液适量，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置有吸收峰，理论板数按芦丁峰计应不低于3 000，分离度>1.5，基线分离良好，且阴性对照无干扰。详见图2。

线性关系考察：精密吸取2.2.2 项下对照品溶液1，2，5，8，10，15 μL，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=2 131 900X-39 295（r=0.999 9，n=6）。结果表明，芦丁进样量在0.127 1～1.906 5 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2.2 项下对照品溶液适量，按2.2.1项下色谱条件进样测定6次，记录峰面积。结果的RSD为0.29%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品（批号为181101）溶液适量，室温下放置0，2，4，6，8，12 h，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果的RSD为0.45%（n=6），表明供试品溶液室温下放置12 h内稳定。

重复性试验：取同一批（批号为181101）样品，按2.2.2项下方法平行制备供试品溶液6份，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算芦丁含量。结果的RSD为0.59%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取样品（批号为181101）粉末0.25 g，共6 份，置100 mL 容量瓶中，加对照品贮备液5 mL，再加甲醇适量，超声处理30 min，放冷，用甲醇定容，摇匀，滤过，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）Tab.1 Results of the recovery test（n=6）

1.芦丁A.对照品溶液 B.供试品溶液 C.阴性对照品溶液图2 高效液相色谱图1.RutinA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

2.2.4 样品含量测定

取3 批样品各适量，分别按2.2.2 项下方法制备供试品溶液，再按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果3批样品中芦丁含量分别为21.44，21.83，22.56 mg/g，平均21.94 mg/g。

3 讨论

为提高检测效率，预试验中对多项试验条件进行了考察，最终得出相对较好的试验条件。溶剂方面，分别考察了采用甲醇、70%甲醇、50%甲醇为溶剂的检测效果，发现以甲醇为溶剂时提取效率最高，故本研究中选择甲醇为溶剂。色谱柱方面，分别选择Xtimate XB-C18柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）、Agilent Zorbax SB - C18柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）及Agilent Zorbax SB - C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）对样品有效成分进行检测，结果目标成分均可有效分离且峰形良好，最终选择的Agilent Zorbax SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）出峰速度更快，有效节省了检测时间及试剂。流动相方面，分别采用甲醇- 1%乙酸溶液、甲醇- 0.1%乙酸溶液、甲醇- 0.5%乙酸溶液为流动相进行检测，结果采用甲醇-1%乙酸溶液为流动相时分离效果最佳，故选择。

综上所述，本研究中所建立的方法简便易行，结果准确可靠，可用于蜡梅花配方颗粒的质量控制。随着配方颗粒国家标准的执行，相应标准不断提高，考虑到中药材不同基源产生的影响，为完善蜡梅花配方颗粒的质量标准，下一步将建立其特征图谱以进一步研究。