加味乌梅散提取物对肉兔生长性能、免疫功能和抗氧化能力的影响

■尹 皑 王 亮 杜 红 易 鑫 舒 刚，*

（1.眉山职业技术学院，四川眉山 620010；2.红河学院应用技术研究院，云南红河 661199；3.四川农业大学，四川成都 611130）

仔兔断奶腹泻，是肉兔养殖中的常见多发病，发病率和死亡率高，还会引起仔兔生长受阻，给养兔场造成重大的经济损失[1]。饲料中添加抗生素是防治该病的有效手段，但从2020年7月开始，我国饲料行业进入“无抗”时代，仔兔断奶腹泻发生率与日俱增。为解决仔兔断奶腹泻和寻找新型抗生素替代品成为养兔业研究的热点。

乌梅散是收载于2015 版兽药典，是由乌梅、柿饼、黄连、姜黄、诃子组成的复方制剂，主要应用在治疗猪、牛、羊出现冷汗、腹胀以及下痢不止等方面。在临床实践中发现在乌梅散原有组成的基础上减去其中的柿饼，添加党参、白术、茯苓，可达到固肠收涩、止泻、清热祛湿、健脾渗湿的功效。同时，采用传统煎煮方法煎煮后进行喷雾干燥，得到加味乌梅散提取物，更有利于加入畜禽饲粮中，方便使用。目前，加味乌梅散提取物还没有在断奶兔生产中的应用研究，本试验旨在探讨断奶仔兔饲粮中加入加味乌梅散提取物，对断奶仔兔生长性能和免疫功能、抗氧化能力的影响，考察该提取物作为替抗产品的潜力，为其在肉兔无抗饲养中应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

健康、体重相当和遗传背景一致的240只38日龄断奶伊拉肉兔[（732.48±10.26）g]，购自四川满润隆生态农业开发有限公司。

1.2 试验药物与试剂

加味乌梅散（由乌梅、黄连、姜黄、诃子、党参、白术、茯苓组成）提取物自制（采用传统煎煮法，水煎3次后合并煎液经喷雾干燥而成，1.0 g提取物相当于生药10 g）。免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）用ELISA检测试剂盒及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化物（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化指标检测试剂盒，均购自南京建成生物科技有限公司。

酶标仪（型号为Multiskan FC），购自赛默飞世尔仪器有限公司；台式离心机（型号为JIDI-4D-WS），购自广州吉迪仪器有限公司；紫外可见分光光度计（型号为UV-1200），购自上海美谱达仪器有限公司。

1.3 试验设计

试验采用单因子试验设计，将240只38日龄断奶伊拉肉兔按照公母各半、均重相近的原则分为4 组，每组3个重复，每个重复20只兔（公母各半）。对照组饲喂基础饲粮；试验组分别在基础饲粮中添加0.5、1.0 g/kg和2.0 g/kg的加味乌梅散提取物。

1.4 基础饲粮组成与营养水平

基础饲粮配方设计参照NRC（1977）肉兔营养需要并结合伊拉肉兔生长发育特点设计，然后加工成直径4 mm、长10 mm 的颗粒料。基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平（风干基础）

1.5 饲养管理

试验开始前彻底清理和消毒兔舍、兔笼和饮水管道。所有分组在同一兔舍进行，采用双排阶梯式双层笼中进行饲养，每笼饲养1 只，由试验人员管理。每天早上8：00喂食1次，可自由进食和饮水。兔舍每日打扫并消毒，自然光照，并及时清除粪便。分组后进行免疫巴氏杆菌灭活苗和兔瘟疫苗，并记录每天采食量，观察腹泻等情况。

1.6 测定项目

1.6.1 生长性能测定

在试验开始和结束时（在早上8：00）对各个重复兔进行空腹称重，记录试验期各重复耗料量，以单只兔为单位计算平均日增重、平均日采食量和料重比。

平均日增重（g/d）=（试验结束时体重-试验开始时体重）/试验天数

平均日采食量（g/d）=（投料量-剩料量）/（试验天数×每个重复兔只数）

料重比=日采食量/日增重

记录腹泻个体和死亡个体数量，最后以组为单位计算腹泻率与病死率。

腹泻率（%）=腹泻只数/总只数×100

死亡率（%）=死亡只数/总只数×100

1.6.2 免疫器官指数测定

饲养试验结束时，每个重复选择4只（2公2母）接近平均体重的试验兔，通过断颈的方法进行屠宰。屠宰前禁食12 h，不禁水。称量宰前重、各免疫器官重量，并计算免疫器官指数。

免疫器官指数（g/kg）＝免疫器官重量（g）/宰前活体重（kg）

1.6.3 血清免疫指标和抗氧化指标测定

屠宰前对兔子进行耳静脉采血，采集的血液静置3 h，待血液凝固后，5 000 r/min 离心5 min，收集血清，装入EP管中于-80 ℃保存，用于测定血清免疫指标和抗氧化指标（1 周内完成测定）。免疫指标IgA、IgG、IgM 和抗氧化指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量均严格按照说明书进行测定。

1.7 数据处理和统计

采用Excel 2016软件对试验数据进行初步统计，然后使用SPSS 21.0 统计软件进行单因素方差分析，并采用LSD 法进行多重比较。数据使用“平均值±标准差”表示，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 加味乌梅散提取物对肉兔生长性能的影响（见表2）

表2 加味乌梅散提取物对肉兔生长性能的影响

由表2 可知，各组平均日增重比较，1.0 g/kg 组与2.0 g/kg 组比对照组显著提高了13.65%、12.52%（P＜0.05）；与0.5 g/kg 组差异不显著（P＞0.05）。各组平均日采食量比较，各组差异不显著（P＞0.05），对照组平均日采食量最高。各组料重比比较，1.0 g/kg 组与2.0 g/kg组比对照组显著降低16.06%、18.31%（P＜0.05）；与0.5 g/kg 组差异不显著（P＞0.05）。各组腹泻率比较，各试验组显著低于对照组，其中0.5 g/kg组比对照组显著降低24.86%（P＜0.05），1.0 g/kg组与2.0 g/kg 组比对照组显著降低57.86%、59.92%（P＜0.05），1.0 g/kg组与2.0 g/kg 组比0.5 g/kg 组分别显著降低43.92%、46.66%（P＜0.05）。存活率比较，各试验组都高于对照组，1.0 g/kg组最高。

2.2 加味乌梅散提取物对肉兔免疫器官指数的影响（见表3）

由表3 可知，肉兔圆小囊重量比较，1.0 g/kg 组与2.0 g/kg 组分别显著高于对照组10.32%、9.52%（P＜0.05）。圆小囊指数比较，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于对照组8.93%、8.04%（P＜0.05）。脾脏重量比较，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于对照组10.24%、9.45%（P＜0.05）。脾脏指数比较，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于对照组22.22%、25.93%（P＜0.05）。

表3 加味乌梅散提取物对肉兔免疫器官指数的影响

2.3 加味乌梅散提取物对肉兔血清免疫指标的影响（见表4）

表4 加味乌梅散提取物对肉兔血清免疫指标的影响(mg/mL)

由表4可知，IgA含量比较，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于对照组14.75%、16.39%（P＜0.05）。IgG含量比较，各组差异不显著（P＞0.05），但各试验组平均值高于对照组。IgM含量比较，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于对照组13.24%、12.76%（P＜0.05）。

2.4 加味乌梅散提取物对肉兔血清抗氧化指标的影响（见表5）

表5 加味乌梅散提取物对肉兔血清抗氧化指标的影响

由表5可知，MDA含量比较，2.0 g/kg组显著低于对照组12.21%，其他各组间差异不显著（P＞0.05）。SOD含量比较，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于对照组15.21%、22.80%（P＜0.05）。GSH-Px 含量比较，各试验组分别显著高于对照组9.20%、32.78%、37.39%（P＜0.05），且1.0 g/kg组与2.0 g/kg组分别显著高于0.5 g/kg组21.59%、25.81%（P＜0.05）。

3 讨论

3.1 加味乌梅散提取物对肉兔生长性能的影响

中兽药作为饲料添加剂对肉兔生长性能有显著提高作用。曹礼静等[2]将党参、黄芪等组成中药复方后添加到饲料中，显著提高断奶兔生长性能。崔晓娜[3]以黄芪、山楂、陈皮等多味中药饲喂新西兰断奶仔兔显著提高生长性能并减少了腹泻率。而乌梅散出自《元亨疗马集》，收载于2015 版兽药典。原方中的主药乌梅涩肠止泻，臣药诃子、柿饼收敛固涩大肠，佐药黄连清热燥湿止痢，姜黄祛瘀止痛。诸药合用，涩肠止泻，清热燥湿。已有报道证实乌梅散及其加味可以治疗猪[4]、犊牛[5]、鸭的腹泻，同时还促进了鸭的生长[6]。现代药理也证实乌梅水提液均能够有效抑制产气荚膜梭菌和金黄色葡萄球菌的生长[7]，降低肠道pH，可改善肠道菌群[8]。崔念臻等[9]研究发现诃子不同提取组分对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌均具有抗菌活性；诃子粗提物发挥止泻作用在于能抑制肠道平滑肌收缩[10]。黄连提取物不仅抑制有害菌，还能显著促进乳酸菌、双歧杆菌的生长[11]。党参和茯苓对肠道菌群都有较好的调节作用[12]。同样，白术能改善肠动力、调节肠功能紊乱、修复肠道黏膜损伤、抑制肠道炎症、促进溃疡修复等达到有效治疗肠道疾病的作用[13]。本试验也证实了1.0 g/kg 组与2.0 g/kg 组的平均日增重显著高于对照组；料重比显著低于对照组。各组腹泻率比较，添加加味乌梅散提取物能显著降低肉兔的腹泻率，同时显著提高存活率，并呈现剂量依赖性。

3.2 加味乌梅散提取物对肉兔免疫器官指数的影响

脾脏和圆小囊是兔类的重要免疫器官。脾脏是机体最大的外周免疫器官，含有多种免疫细胞。圆小囊位于盲肠与回肠相接处，是一个厚壁圆囊，是兔特有的结构，可以作为屏障来抵抗烈性抗原对淋巴组织的入侵；也可以作为通道来传递抗原，重量及指数的增加能反映动物免疫能力提高[14]。朱琪[15]使用乌梅配成复方，对肉鸡免疫器官指数和新城疫抗体取得良好效果。尹莉莉[16]证实党参多糖可显著提高仔猪的胸腺、脾脏指数。陈丽玲等[17]证实白术茯苓多糖复方能促进断奶仔猪生长性能和免疫功能。范磊等[18]证实茯苓多糖可以提高肉鸡的生长性能、免疫器官指数水平。本研究结果表明1.0 g/kg组与2.0 g/kg组显著提高圆小囊的重量和圆小囊指数；还显著提高了脾脏重量和脾脏指数，与上述报道一致。

3.3 加味乌梅散提取物对肉兔血清免疫指标的影响

血清免疫球蛋白主要存在于动物血清中，对动物的免疫功能具有主要意义。IgA是黏膜免疫中的主要分泌型抗体，可以提高机体呼吸道、消化道黏膜组织的抗病毒能力；IgG主要介导体液免疫的主要抗体；IgM是机体初次接触抗原物质时最早出现的免疫球蛋白，在抗感染中起着关键作用[18]。石轶男等[19]发现党参多糖显著提高肉鸡血清中IgG含量和分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的含量。赵小霞等[20]证实诃子可增强小鼠非特异性免疫应答水平，调节细胞因子分泌，可以有效地增强机体非特异性免疫功能。张志军等[21]证实茯苓多糖显著提高小鼠IgA、IgG 和IgM 含量。本试验结果表明，1.0 g/kg 组与2.0 g/kg组可显著提高肉兔血清中IgA、IgM的含量，这说明在饲粮中添加一定水平的加味乌梅散提取物有改善肉兔体液免疫的作用，可能主要与方中诃子、党参、茯苓、白术等成分有关。

3.4 加味乌梅散提取物对肉兔血清抗氧化指标的影响

MDA是脂质过氧化产物，也是细胞氧化损伤的一个重要检测指标。测定MDA含量可以反映机体细胞受自由基攻击和脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤程度的严重性[22]。SOD是机体细胞内清除自由基的内源抗氧化酶，广泛存在生物体的组织中，能够清除超氧阴离子自由基[23]。GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，可保护细胞膜的结构及功能不受过氧化物的干扰及损害[24]。因此，血清中MDA 含量以及SOD、GSH-Px活性是衡量机体氧化和抗氧化的重要指标。刘文生[25]发现党参多糖能减缓过氧化氢造成的损伤，有效清除体内自由基，增强SOD、GSH-Px活性和过氧化氢酶（CAT）的活性，降低血浆MDA含量。谢金炎等[26]研究发现诃子及其炮制品可以提高小鼠血清中总抗氧化能力（T-AOC）、SOD 含量，降低血清单胺氧化酶（MAO）、MDA含量，证明诃子及其炮制品对小鼠有明显的抗氧化作用。杜娜[27]在日粮中添加黄连素可以有效缓解脂多糖诱导的生长性能抑制、氧化应激和炎症反应。张宝龙等[28]证实党参可以提升黄颡鱼血清中SOD、GSHPx活性，降低MDA含量。曹艳霞等[29]证实白术多糖可以显著提高溃疡大鼠的胃组织SOD活性，MDA含量显著下降。茯苓多糖较强的抗氧化能力能够减少机体内自由基对细胞的破损，也能够激活动物机体的抗氧化系统，从而达到保护动物本身的效果[30]。本试验结果表明，2.0 g/kg组显著降低MDA含量；1.0 g/kg组与2.0 g/kg组还显著提高SOD、GSH-Px含量。综合来看，这应该是提取物中的有机酸、多糖、黄酮类等物质发挥了提高抗氧化能力、清除机体内自由基、保护机体正常细胞代谢的作用。

4 结论

①在肉兔日粮中添加加味乌梅散提取物可提高肉兔的生长性能，提高机体免疫力，提高血清抗氧化功能。

②本试验中，1.0 g/kg组与2.0 g/kg组效果较好，综合考虑肉兔日粮中加味乌梅散适宜添加量为1.0 g/kg。