ALIFAX TEST1血沉仪性能评价及桂北地区健康人群血沉参考区间的探索

容桂红，秦韬，陈国栋，秦辛玲，金贺

桂林医学院附属医院 检验科，广西 桂林 541001

引言

红 细 胞 沉 降 率（Erythrocyte Sedimentation Rate，ESR），简称血沉，是指红细胞在离体抗凝全血中自然沉降的速率[1]。尽管ESR相对缺乏特异性，但其是风湿免疫系统疾病（风湿性关节炎、颞叶关节炎、风湿性多肌痛等）以及一些非炎性疾病如恶性肿瘤、自身免疫疾病、高球蛋白血症、高胆固醇血症、脑卒中、冠状动脉疾病等的诊断和随访检查的一项常规指标[2-6]。1921年国际血液学标准化委员会（International Committee for Standardization in Hematology，ICSH）首次提出将魏氏法确立为血沉检测的参考方法[7]。魏氏法是指在长度300 mm、口径2.5 mm的玻璃管内充入经生理盐水稀释后的抗凝全血，并保持沉降管垂直固定于支架上1 h，观察红细胞沉降后血清段高度，即血沉值（mm/h）。但该方法因检测过程为纯手工操作，费时、用血量大、不易大规模操作、存在生物安全暴露隐患，难以满足临床实际需求[8]。因此近年来各种自动化血沉仪不断涌现，为微量、快速、标准化检测ESR提供了基础，但同时也暴露出了各仪器参考区间不一致且各地区缺乏各自的实验室数据验证[9]等主要问题。

ALIFAX TEST1是将定量毛细管光度技术用于ESR检测的全自动分析仪，与魏氏法具有良好的相关性，并已在很多地区临床应用[10-11]。关于TEST1系列血沉仪的健康人群参考区间，目前大多数实验室仍参照意大利和我国上海地区建立的人群数据（表1）[12-14]。但血沉影响因素复杂，在地域、性别、年龄等流行病学因素之间存在分布差异，加之各实验室检测条件不等，因此ICSH建议各地建立相应的参考区间。鉴于桂林地区有其独特的气候环境，并且饮食习惯、社会经济状况、生活节奏等与上海地区差异显著，本研究旨在对TEST1血沉仪进行性能评估，并拟建立桂北地区健康人群血沉参考区间，为临床诊断提供参考。

表1 目前各实验室常用ALIFAX TEST1血沉仪的参考区间

1 材料与方法

1.1 材料

ALIFAX TEST1 血沉仪及配套血沉架、标准品（意大利Alifax公司），EDTA-K2真空采血管（广州阳普医疗科技股份有限公司）。

1.2 TEST1血沉仪的准确性

分别采用Alifax Latex同一批次高值、中值、低值三个水平的标准品，对TEST1血沉仪的准确性进行检测，并严格按照用户操作手册对血沉仪进行日常维护。分别计算30 d内不同水平标准品的平均值（）和标准差（s）。TEST1血沉仪准确性变异系数（Coefficient of Variation，CV）的计算公式如式(1)所示。

1.3 TEST1血沉仪的重复性

采用TEST1血沉仪分别对不同浓度的3例样本（高值、中值、低值）重复测量10次，分别计算3例样本10次重复测量的和s，TEST1血沉仪重复性变异系数计算公式同式(1)。

1.4 样本放置不同时间时TEST1血沉仪检测结果的稳定性

将30例样本分别于采集后室温下放置0、2、4、6 h，以及4 ℃保存24 h后进行检测，所有结果均与立即检测（0 h）的基线结果进行比较，评价标本放置不同时间对TEST1血沉仪检测结果稳定性的影响。

1.5 参与对象

参与对象来自桂林医学院附属医院体检中心（2021年1至4月），共1719例，其中男性936例、女性783例，年龄21～93岁。排除已知患有糖尿病、慢性肾功能不全、高血压、局部缺血性心脏病、贫血、甲状腺疾病、乳腺疾病、体重减轻、发烧、胸痛、多关节痛、生化和血液学异常的肝脏疾病等。服用药理活性物质、口服避孕药、吸烟、每周饮白酒多于两杯（60 mL），月经期、妊娠期、哺乳期妇女，以及6个月内有住院或手术史者。本研究通过桂林医学院附属医院伦理委员会批准（QTLL202104），所有参与者均知情同意。

1.6 样本采集和实验室检查

采集参与者静脉血2 mL于EDTA-K2真空采血管中待检，并按照TEST1血沉仪操作流程在上述标本采集后各时间点内完成检测。

1.7 统计学分析

采用SPSS 21.0软件进行统计分析。健康人群血沉值呈偏态分布，数据以中位数（Median，M）和四分位数间距（Inter-Quartile Range，IQR）表示，P＜0.05认为差异有统计学意义。TEST1血沉仪稳定性评价结果采用配对t检验；ESR多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，两相邻组间比较采用Mann-Whitney U检验，参考区间的建立采用单边百分位数（P0～P95）。

2 结果

2.1 TEST1血沉仪的准确性

30 d内不同水平（低值、中值、高值）质控品的准确性CV值均小于10%（表2）。

表2 TEST1血沉仪的准确性

2.2 TEST1血沉仪的重复性

将三个不同水平（低值、中值、高值）的样本连续检测10次，得到的重复性CV值分别为7.06%、4.23%和3.05%（图1），均小于10%。

图1 TEST1血沉仪的重复性

2.3 样本放置不同时间TEST1血沉仪检测的稳定性

与采集后立即检测（0 h）的样本相比，室温放置2 h和4 h的ESR检测结果稳定（P=0.147，P=0.454），室温放置6 h 的ESR检测结果明显降低，差异有统计学意义（P=0.016），而4 ℃放置24 h ESR检测结果又明显增高，差异有统计学意义（P=0.022），见图2。

图2 样本放置不同时间TEST1血沉仪检测的稳定性

2.4 ESR的性别和年龄分布

男性各年龄组ESR参考区间上限，21～30岁组（24.25 mm/h） 低 于 31～40岁 组（28.00 mm/h）， 差异有统计学意义（P＜0.001）；31～40岁组与 41～50岁组（31.00 mm/h）之间差异无统计学意义（P=0.115）；而51～60岁组（33.55 mm/h）和＞60岁组（37.00 mm/h）均分别高于其相邻低龄组，差异有统计学意义（P=0.008、0.011）。女性各年龄组ESR参考区间上限，21～30岁组（33.00 mm/h）低于31～40岁组（34.00 mm/h），差异有统计学意义（P＜0.001）；31～40岁组、41～50岁组（35.85 mm/h）和51～60岁组（37.35 mm/h）之间无统计学差异（P=0.164、0.110），而＞60岁组（41.20 mm/h）高于51～60岁组，差异有统计学意义（P=0.035），见表3。

表3 ESR在1719名参与对象中的性别和年龄分布（mm/h）

2.5 建立ESR参考区间

根据ESR分别在男性和女性不同年龄区间的分布，将没有统计学差异的年龄组合并，建立参考区间。男性ESR参考区间划分如下：≤30岁组为0～24.25 mm/h，31～50岁组为 0～31.00 mm/h，51～60 岁组为 0～33.55 mm/h，＞60 岁组为0～37.00 mm/h；女性ESR参考区间划分如下：≤30岁组为 0～33.00 mm/h，31～60 岁组为 0～37.35 mm/h，＞60 岁组为 0～41.20 mm/h，见表 4。

表4 ESR 95%百分位数参考区间范围

3 讨论

基于1719例人群数据，本研究首次报道了采用ALIFAX TEST1血沉仪建立的桂北地区健康人群ESR参考区间。自1921年ICSH将魏氏法确立为参考方法以来，ESR的临床应用已有100余年的历史，尽管相对缺乏特异性，但其在疾病病程监测、疗效评估中的作用仍不可取代[7]。魏氏法、温氏法等传统方法，因检测过程耗时、血液标本用量大、干扰因素多且易给实验室技术人员带来生物安全隐患，难以大规模应用于临床[7,15]。ALIFAX TEST1血沉仪是一种封闭的自动化操作系统，无须开盖即可自动混匀并吸入微量（约150 μL）EDTA-K2抗凝血于毛细管内，运用红外线光度计（950 nm）可在20 s内检测1000次红细胞沉降的动态变化，并将光密度信号转换为电信号，经换算后得出相应血沉值，该方法实现了血沉检测的快速化、自动化，目前已被多家医疗机构采用。

本研究首先采用高、中、低值三个水平的Latex质控品验证了TEST1血沉仪的准确性（CV＜8%），同时通过对不同水平临床样本的重复检测验证了其重复性（CV＜8%）。通过评价标本保存时间和温度对结果的影响，建立操作规范，即所有血液样本均应在采样后4 h内完成检测，以保证检测结果的稳定性。TEST1血沉仪性能评估是建立准确可靠参考区间的基本前提。

TEST1血沉仪对EDTA-K2抗凝血的检测结果显示，ESR值在性别之间存在统计学差异，所有年龄组中女性ESR值均高于男性，这与文献报道的结果基本一致[12-14,16]。与既往研究不同的是，目前ESR的大多数参考区间划分界限是50岁或60岁，本研究分析发现以30岁为分界点，男性和女性血沉参考区间均存在统计学差异，这一划分可能对早期提示30岁以下人群患有ESR值异常增高相关疾病的风险具有重要意义。此外，与上海地区（表1）相比，桂北地区男性31～50岁年龄组和51～60岁年龄组ESR参考区间值增高，而＞60岁年龄组参考区间值降低，提示桂北地区男性健康人群血沉值增高程度随年龄的变化相对缓慢。在30岁以上年龄段，女性ESR参考区间组别的划分与文献报道基本一致，均以60岁为分界，而本地区31～60岁年龄组和＞60岁年龄组，女性的ESR参考区间上限值均略高于意大利和上海地区。

数据显示桂北地区与上海地区的ESR参考区间的年龄划分和随年龄的变化趋势存在差异，可能与两地的气候环境、民族分布、饮食习惯、经济状况、生活节奏不同等多种因素相关。但关于桂北地区人群健康数据指标的报道和研究目前仍较少。侯姝芳等[17]在一项纳入8757例参与对象的研究中报道，桂林地区人群地中海贫血的发病率显著增高（20.3%），并且基因型与邻近地区（贵阳和重庆）存在明显差异。胡仁统等[18]研究发现IL-27基因rs181206C/T位点基因型和等位基因频率在广西壮族人群中的分布与其他种族和地区人群相比有显著差异。研究的主要局限性表现在纳入的健康人群样本量仍不充足，特别是60岁以上人群；此外，若同时使用其他仪器（如Ves-Matic Cube 200、Sedisystem 15或SRS 100等）建立参考区间并进行相关性验证，将进一步提高ESR参考区间的普适性。

4 结论

本研究初步建立了桂北地区ESR值健康人群参考区间，男性ESR参考区间划分如下：≤30岁组为0～24.25 mm/h，31～50 岁组为 0～31.00 mm/h，51～60 岁组为0～33.55 mm/h，＞60岁组为 0～37.00 mm/h；女性 ESR 参考区间划分如下：≤30岁组为0～33.00 mm/h，31～60岁组为 0～37.35 mm/h，＞60岁组为 0～41.20 mm/h。该参考区间可为桂北地区TEST1血沉仪的临床应用提供参考，并补充该地区人群健康指标相关数据。