枳实参与雄性训练神经痛大鼠疼痛敏感性变化

汪燕 刘宏超 (中国民用航空飞行学院体育部，四川 广汉 68307；山西师范大学)

枳实为芸香科小乔木柑橘属植物，其果实晾干或低温干燥之后，是我国较为常见的中药，气味清新香甜，味道较苦、含有微量的酸度，同时枳实外表是黑色与褐色相见的，表面较光滑，有细小的微粒状突起〔1〕。其功效最开始记录在我国早期中医药理学专著《神农本草经》中，具有破除体内积聚废气，大便不通顺，气管痰的阻碍，胸部麻痹，肝脏器官下垂等一些症状〔2,3〕。同时枳实，薤白和桂枝及人参配伍可治疗心绞痛，枳实薤白桂枝汤可有效干预氧化应激损伤，其对冠状动脉痉挛引起的心肌缺血具有一定的保护作用，可有效改善家兔心脏损伤〔4,5〕，而枳实栀子豉汤还具有潜在的抗抑郁作用〔6〕，枳实的黄酮提取物可以有效抑制6-羟基多巴胺(OHDA)诱导的PC12细胞的损伤〔7〕，枳实的挥发油还具有镇咳喘消除肿胀等多种功能。枳实作为一种中药功能广泛。但至今尚未见对慢性痛，尤其是神经性痛模型大鼠疼痛作用变化的研究。本实验观察枳实水煮液对雄性训练神经痛模型大鼠进行行为学测痛，观察其疼痛敏感性变化。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 本研究选用6只成年雄性大鼠，体重180～200 g。在实验期间单独分笼饲养，并且提供12 h的光照、让其自由进食和饮水，饲养室内的温度保持在20～24℃。

1.1.2药品与实验器材 枳实，购买于北京同仁堂大药房，将枳实制成水煮液母液，并用母液配制成15.20、30.40、60.80 mg/ml的枳实水煮液，每只大鼠采用不同浓度灌胃，灌胃的量为3 ml枳实水煮液，生理灌胃针由深圳瑞沃德公司提供；热板仪(型号：YLS-6B，济南市益延科技发展有限公司)，电子压痛仪(型号：YLS-3E，山东省医学科学院设备站)，微量进样器(上海曼普生物科技有限公司)，电子天平(上海精科实业有限公司)等。

1.2方法

1.2.1训练大鼠 为了减小实验误差并让大鼠适应实验步骤及环境，在正式实验开始之前需要对大鼠进行行为痛觉测试训练，包括热板和压板测试训练及灌胃的训练。根据王帅康等〔8〕给出的实验原理和方法，对大鼠进行连续5 d、每天5轮、每轮3次的训练。经过训练后的大鼠，其后爪缩爪潜伏期会维持在一个相对较稳定的范围。

1.2.2神经痛模型的建立 神经性痛敏模型建立，参照Bennett等〔9〕的方法进行坐骨神经结扎的方法建立神经性痛敏模型。将大鼠用水合氯醛麻醉，暴露一侧坐骨神经后，以4号医用手术线自中枢端向外周端将坐骨神经每隔约1 mm做一个结扎，共4个。结扎之后将神经复位，分层缝合肌肉层与皮肤层，连续注射3 d以上消炎药物预防感染。向雄性训练神经痛敏模型大鼠灌胃于枳实水煮液及生理盐水等，观察其对神经痛大鼠的镇痛作用。

1.2.3行为学痛觉测试 压力测试：用压力测痛仪对大鼠进行压力测试。首先需控制开关，将有机玻璃压在大鼠后爪的跗趾关节处，大鼠感觉到疼痛时后爪便会发生缩回现象，此时必须立即停止计时。分别记录灌胃枳实水煮液和灌胃生理盐水对照组神经痛大鼠的后爪缩爪反应潜伏期(HWL)。热板测试：根据实验要求需要将热板的温度稳定在52℃左右。待大鼠的后爪紧贴在热板上后便开始计时，直到大鼠后爪感到疼痛主动缩回并且离开热板时立即停止计时。分别记录灌胃枳实水煮液和灌胃生理盐水对照组神经痛大鼠的HWL。

1.3统计学方法 采用SPSS18.0软件进行t检验。

2 结 果

与灌胃生理盐水相比，灌胃15.20 mg/ml的枳实水煮液左、右侧热板和压板HWL均无明显差异(均P>0.05)；而灌胃30.40 mg/ml的枳实水煮液后，左侧后爪热板和左、右侧压板HWL均有明显差异(均P<0.05)，而右侧热板差异显著(P<0.01)；同时灌胃60.80 mg/ml枳实水煮液时，左、右侧热板和压板HWL差异均显著(均P<0.01)，见表1。结果显示，枳实水煮液明显延长了雄性训练神经痛大鼠的HWL，表明其具有镇痛的功效，参与了雄性训练神经痛大鼠疼痛敏感性变化的调节。

表1 灌胃正常大鼠15.20、30.40、60.80 mg/ml枳实水煮液的与对照组(生理盐水)大鼠的

3 讨 论

目前临床上镇痛药物多采用吗啡、哌替啶等阿片类药物，虽然患者不再感觉疼痛，但是能引发抗药和药瘾效果〔10〕。为了避免成瘾性等不良反应，我们把目光聚焦在中药上，本实验浓度为30.40与60.80 mg/ml枳实水煮液具有明显的镇痛作用，参与了雄性训练神经痛模型大鼠疼痛敏感性变化的调节。但当浓度逐渐升高时，其镇痛效果也越加明显，在灌胃时间为15 min时HWL达到最大值即镇痛效果最明显，且具有剂量依赖性。以往研究发现，枳实拥有消除身体胸部和肺部膨肿，疼痛感，痰聚集在肋骨之间，食物积累不顺等作用〔11〕。枳实的有效成分主要有挥发油、黄酮苷、生物碱等几类〔12〕，有实验证明枳实的挥发油具有一定程度的镇痛和抗炎症作用，枳实通降颗粒能显著促进术后肠梗阻大鼠模型小肠功能的恢复，并具有较好的抗炎作用〔13〕。枳实有效成分包括黄酮苷，挥发油及生物碱等，到底是哪种物质起到了作用，需在以后的实验加以验证，此研究结果为临床中药镇痛的研究与开发提供理论依据。