乳腺癌组织MAL2和 IGF-1R蛋白表达与病理特征及预后的相关性研究

刘晓鑫，白春峡，伏 玉（营口市中心医院 ，辽宁营口 115000）

乳腺癌（breast cancer）是较为多见的恶性肿瘤之一，据流行病学提示，乳腺癌的发病率正日渐升高，每年约新增30万乳腺癌病例，死亡人数高达4万人左右[1]。随着医学技术的提高，对于乳腺癌的治疗方式也逐渐增加，包括内分泌治疗、抗HER-2靶向治疗、乳腺癌根治术等，治疗效果已取得了较大的进步，但患者后期复发率仍较高[2-3]。T细胞分化蛋白（mal T-cell differentiation protein 2，MAL2）是一种与胞内囊泡蛋白运输功能有关的分子，已被证实在源自上皮的肿瘤中发挥着重要的作用[4]。胰岛素样生长因子1受体（insulin like growth factor 1 receptor，IGF-1R）是一种跨膜蛋白，已被证实其介导的信号和肿瘤的转移和分化有关[5]。近年来，肿瘤分子标志物已逐渐成为乳腺癌的研究重点，在乳腺癌的诊断以及预后中发挥着重要的作用，但对于MAL2和IGF-1R的研究比较少。本研究拟研究乳腺癌组织中MAL2，IGF-1R蛋白表达与乳腺癌患者病理特点及不良预后的关系，以期为临床诊治乳腺癌提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取营口市中心医院2015年3月～2016年3月收治的131例乳腺癌患者作为研究对象，年龄41～62（53.32±5.43）岁；TMN分期：I～II期57例，III～IV期74例；病理类型：浸润性导管癌66例，非浸润性导管癌65例；分化程度：高分化45例，中低分化86例。纳入标准：①患者符合《中华妇产科学》[6]中乳腺癌诊断标准；②患者经病理学证实为乳腺癌；③患者精神意志正常可配合治疗。排除标准：①患者并发严重免疫系统障碍；②患者并发严重心力衰竭或者肝肾功能衰竭；③患者预期生存时间＜3个月；④患者为妊娠期孕妇；⑤患者资料不完整；⑥随访失访。

1.2 仪器与试剂 兔抗MAL2单克隆抗体（深圳晶美生物工程有限公司，批号：YS-K64163），兔抗IGF-1R单克隆抗体（上海泸震实业有限公司，批号：HZbscience），枸橼酸钠缓冲溶液（上海士锋生物科技有限公司，批号：sf2415），苏木精（北京伊塔生物科技有限公司，批号：YT1086），二甲苯（上海吉至生化科技有限公司，批号：D33950-5g），梯度酒精（上海一研生物科技有限公司，批号：EY-elisa4218），通用型二抗（北京百奥莱博科技有限公司，批号：SY0708-EWM），组织切片机（上海玉研科学仪器有限公司，型号5000smz），显微镜（南京贝登医疗股份有限公司，型号V116291）。

1.3 方法

1.3.1 免疫组织化学染色法：术中收集乳腺癌患者癌旁正常组织和癌组织，用10g/dl中性甲醛固定，以石蜡包埋，制作为4μm的厚片，使用免疫组织化学SP法进行检测。由两名专业医师采用双盲法进行阅片。免疫组织化学判定标准：胞浆以及胞核可观察到棕黄色颗粒，按染色程度进行计分，0分为未成功染色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。阳性细胞率：0分为＜5%，1分为6%～25%，2分为26%～50%，3分为51%～75%，4分为76%～100%。染色程度分数乘以阳性细胞率分数即为蛋白表达结果，阴性表达为0～4分，阳性表达为＞5分。

1.3.2 随访情况：采用电话及门诊检查相结合的方式进行随访，行体格检查、影像学检查等。纳入本研究后第1年每3个月随访1次，第2年每6个月随访一次，其后1年随访1次，纳入本研究60个月止。记录随访期间复发、转移和死亡等情况，将随访期间复发、转移和死亡的患者列入预后较差组，反之则列入预后良好组。

1.4 统计学分析 采用SPSS20.0进行统计分析。计数资料以n表示，组间比较采用χ2检验；乳腺癌患者预后因素分析采用COX比例风险回归模型。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织MAL2和IGF-1R对比 见图1，图2。乳腺癌患者癌组织MAL2[77.86%（102/131)]蛋白阳性率显著高于癌旁正常组织 [17.56%（23/131）]，乳腺癌患者癌组织IGF-1R[80.15%（105/131）]蛋白阳性率显著高于癌旁正常组织[21.37%(28/131)]，差异均有统计学意义(χ2=95.482，P=0.002；χ2=90.540，P=0.003)。

图1 MAL2蛋白在乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织表达（×400）

图2 IGF-1R蛋白在乳腺癌患者癌组织和癌旁正常组织表达（×400）

2.2 不同病理特点患者MAL2和IGF-1R蛋白表达分析 见表1。在不同病理类型乳腺癌中MAL2和IGF-1R蛋白阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05）；在不同乳腺癌TMN分期以及分化程度上MAL2和IGF-1R蛋白阳性表达率差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

表1 不同病理特点患者MAL2和IGF-1R蛋白表达分析

2.3 预后不同的乳腺癌患者MAL2，IGF-1R蛋白水平对比 131例乳腺癌患者随访期间，预后较差患者59例，预后良好患者72例。预后较差组患者MAL2蛋白[94.92%（56/59）]阳性表达率显著高于预后良好组[36.11%（26/72）]，预后较差组患者IGF-1R蛋白[91.53%（54/59)]阳性表达率显著高于预后良好组[41.67%（30/72)]，差异均有统计学意义(χ2=18.110，8.727，均P=0.000)。

2.4 影响乳腺癌患者预后因素的COX比例风险回归分析 见表2。将TMN分期、分化程度、MAL2蛋白表达、IGF-1R蛋白表达作为自变量，将预后作为因变量，进行COX比例风险回归模型分析得出，中低分化、III-IV期、MAL2蛋白阳性表达、IGF-1R蛋白阳性表达是乳腺癌患者不良预后的危险因素（P＜0.05）。

表2 乳腺癌预后COX比例风险回归模型的单因素和多因素分析

3 讨论

乳腺癌是临床上较为常见的恶性肿瘤之一，是妇科内发病率和致死率最高的癌症[7-8]。随着医学技术的发展，对于乳腺癌的认识逐渐深入，人们发现肿瘤分子标志对于乳腺癌的诊断以及预后预测具有较高的意义[9-10]。因此本次研究检测所选患者MAL2和IGF-1R蛋白，并与患者病理特点及预后情况进行分析，希望为临床的诊治提供参考。

MAL2属于四跨整合膜蛋白，定位在染色体8q 24上，与大部分恶性肿瘤如肾癌、肺癌、胆管癌等有关[11]。有研究发现，MAL2在胰腺癌和直肠癌中具有较高的表达，同时与患者的预后具有明显的相关性[12]。MAL2的异常表达虽然无法直接促进癌症的发生和发展，但其水平能够间接地促进蛋白质靶向性异常，引发蛋白质的分布出现问题，进而引起肿瘤的异常增生和分化。本研究发现，MAL2在乳腺癌中呈高表达，且该蛋白在不同乳腺癌TMN分期以及分化程度上的阳性表达率差异具有统计学意义，提示MAL2在乳腺癌发生及发展中发挥着重要的作用。同时，TMN分期和低分化程度是MAL2蛋白异常表达的危险因素，说明当TMN分期III～IV以及低分化程度乳腺癌患者体内，MAL2蛋白的表达水平已出现明显的升高。有研究认为[13]，MAL2在原发性肝癌患者癌组织中存在过表达，同时与患者肝癌细胞的转移相关。MAL2的多次跨膜，多通过细胞内的协同转运完成，这会使细胞蛋白表达以及肿瘤细胞功能出现明显改变。本研究显示，预后较差组患者MAL2蛋白阳性表达率显著高于预后良好组患者，且MAL2蛋白阳性表达是患者预后不良的独立危险因素，这说明MAL2在患者乳腺癌预后转归过程中发挥着重要的作用，临床在后期应当密切观察患者体内MAL2表达水平，以及时干预。IGF-1R蛋白是一种多功能生长因子，在细胞的增生、分化以及凋亡中发挥着较高的作用[14-15]。有研究发现，在宫颈癌中，IGF-1的表达明显提高，且预后较差患者明显高于预后良好患者[16]。同时研究发现，IGF-1在乳腺癌患者血清中同样有较高的表达。以上研究均能够说明，IGF-2在癌症中发挥着重要意义，但目前对于IGF-1与癌症预后的相关性并无明确的结论，可能与内分泌、自分泌/旁分泌的方式进行影响。本研究数据显示，乳腺癌组织IGF-1R蛋白阳性率显著高于癌旁正常组织，提示该蛋白在乳腺癌中亦呈高表达。在机体葡萄糖转运中，IGF-1R通路效果下，能够使人源葡萄糖转运蛋白内活性明显升高，这会促进葡萄糖的转运能力，使肿瘤组织生长和增殖速度更快[17-18]。本研究结果提示，在不同乳腺癌TMN分期以及分化程度上IGF-1R蛋白阳性表达率差异具有统计学意义，说明在肿瘤的形成和发展过程中，IGF-1R发挥着重要的作用，不仅可以作为IGF-1的受体还能够在细胞生长代谢中起到重要的效果。本研究结果提示，预后较差组IGF-1R蛋白阳性率显著高于预后良好组，IGF-1R蛋白阳性表达是患者不良预后的独立危险因素，这可能是因为，IGF-1R能够介导自身所生成的IGF-1s的信号传递，不仅对于肿瘤的生成、发展以及转移能够起到促进作用，而且严重影响患者的预后情况。同时IGF-1R还是细胞内重要的第二信号系统，在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用，促进PI3K的水平，增强癌细胞的增殖和抑制[19-20]。本次研究发现，MAL2和IGF-1R蛋白在乳腺癌发生及进展过程中扮演着重要的角色，对两者进行检测的意义价值较高。但本次研究因为随访时间较短以及病例纳入较少的因素，导致实验存在一定的偏差，因此以后应弥补此不足。

综上所述，MAL2和IGF-1R蛋白在乳腺癌中具有较高的表达水平，且与乳腺癌患者TMN分期和分化程度具有明显的相关性，同时可能是患者不良预后的危险因素之一。