山楂黄酮对肥胖小鼠慢性炎症的影响

文│张海明（晋中信息学院）

文章主要研究山楂黄酮对高脂饲料诱导小鼠慢性炎症的影响，试验将1月龄的昆明鼠分成两组，一组饲喂正常饲料，另一组用高脂饲料建立小鼠肥胖模型。模型构建成功后从正常饲喂组随机抽取10只作为空白对照组，在肥胖模型小鼠中随机抽取40只，随机分为4组，模型组、高剂量（300毫克/千克）中剂量（200毫克/千克）和低剂量组（150毫克/千克）。每天给小鼠灌服不同浓度山楂黄酮提取物溶液后测定各模型小鼠血液中炎症因子水平、抑炎症因子水平、游离脂肪酸浓度等。结果表明，山楂黄酮提取物对高脂饲料诱导的慢性炎症小鼠有很好地降低血清中白介素-6（IL-6），提高白介素-10（IL-10）的作用，同时增加小鼠的饲料利用率，减少白色脂肪含量，且对正常小鼠血液中炎症因子有一定影响。由此可见，山楂黄酮提取物对高脂饲料诱导的慢性炎症小鼠具有一定的保健作用。

一、材料与试剂

山楂黄酮提取物（hawthorn flavonoid extract，HFE）购自山西省晋城中晋药业有限公司，为山楂果实黄酮提取物（黄酮含量为97.8%）。小鼠白介素-6（IL-6）ELISA试剂盒、小鼠白介素-10（IL-10）ELISA试剂盒、小鼠游离脂肪酸（FFA）ELISA试剂盒［齐一生物科技（上海）有限公司］，昆明种K M小鼠，体重20～25克，雄鼠50只，广州市赛博诺生物科技有限公司提供。高脂饲料（脂肪含量60%）、普通饲料（脂肪含量4%）由南京盛民科研动物养殖场提供，自由饮水，保持自然光照，温度25℃，湿度60%～70%。准备蒸馏水、吸水纸、一次性试管。

表2 山楂黄酮提取物对各组小鼠血清中IL-6含量的影响

1.主要仪器与设备。ELX800型酶标仪（BIO-TEC），JY6002电子天平（上海精其仪器有限公司）。TDZ4-WS离心机（上海悦丰仪器仪表有限公司），1毫升玻璃比色皿。

二、方法

1.建模及分组。肥胖小鼠模型的建立参考卢申姣等的方法。随机选取饲喂正常饲料的10只小鼠作为空白对照组，将建模成功的30只肥胖小鼠分为模型组、高剂量组（300毫克/千克）、中剂量组（200毫克/千克）、低剂量组（150毫克/千克）。每只小鼠每天灌胃0.02毫升/克，记录每日采食量。

2.测量血清IL-6、IL-10、FFA水平。血液采取后在室温条件下让其自然凝固20分钟，随后将静置液离心20～30分钟（2000～3000转/分钟）。最后要认真收集上清液。储存时如果有其他沉淀形成，应再次离心，重复上述过程，具体按照试剂盒说明书操作，3种物质均可使用双抗体夹心法检测血清中IL-6、IL-10、FFA含量。

3.白色脂肪称重。脱颈处死后的小鼠进行解剖及采样，采取腹膜后白色脂肪组织、附睾白色脂肪组织等，用电子天秤来进行称重，并记录数据。

4.数据处理。试验数据用“平均数±标准差”表示，各组数据间用SPSS（V22）完成。

三、结果与分析

1.山楂黄酮对各组小鼠体重、摄食量、白色脂肪重量的影响。由表1可知，高剂量组白色脂肪显著低于模型组（P＜0.05），中剂量组白色脂肪相较于模型组低，建模组小鼠体重和脂肪比空白的组高很多，说明建模成功，同时也间接证明了山楂黄酮提取物会影响高脂饮食小鼠体重和脂肪变化，高剂量组最为明显，其次是中剂量组和低剂量组。

表1 各组体重、采食量、白色脂肪重 克

2.白细胞介素-6（IL-6）测定结果。ELISA检测各组试验数据中IL-6、IL-10的含量，模型组小鼠血清IL-6含量较正常组明显升高，说明造模成功，而山楂黄酮提取物各组IL-6较模型组降低。

表3 山楂黄酮提取物对各组小鼠血清中IL-10含量的影响（±s）

表4 山楂黄酮提取物对血清中游离脂肪酸（FFA）水平影响（±SD，n=10）

3.白细胞介素-10（IL-10）测定结果。IL-10含量较低，各组造模后含量开始升高，给药后可以看出各组IL-10含量均高于正常值。模型组含量最高，给药组介于正常组与模型组之间。

4.小鼠血清中游离脂肪酸（FFA）水平。摘眼球取血，根据检测试剂盒说明操作，经过离心后测定各组小鼠游离脂肪酸（FFA）的含量。数据显示，空白对照组小鼠与高脂肥胖模型小鼠血清FFA表现出差异显著，山楂黄酮提取物组与高脂模型组FFA浓度相比高剂量和中剂量差异极显著（P＜0.01），低剂量组水平显著升高（P＜0.05）。各项结果均表明，山楂黄酮提取物对降低血清中FFA水平效果显著，且剂量越高效果越明显，可缓解FFA过量导致的脂质堆积，进而预防机体带来的影响。

三、讨论

经过对测定高脂饲料诱导的肥胖小鼠体内的一些细胞因子可知，高脂饮食会导致机体出现慢性炎症，血清中白介素-6水平随肥胖模型的建立不断上升，饲喂山楂黄酮后其含量下降，证明山楂黄酮是增强免疫力的保健药物。机体炎症因子水平上升，在血液中含量很少的IL-10也会随高脂饮食而提升，说明慢性炎症会对动物机体造成持续性损伤。而山楂黄酮使白介素-10含量下降，说明山楂黄酮对动物机体有修复损伤的作用。根据结果还可以发现，山楂黄酮提取物对FFA有抑制作用，FFA作为白介素-6分解脂肪的产物可以诱导细胞发生炎症反应，防止脂类物质在血管及其他器官中聚集，保护一些细胞炎性因子对组织器官的损害。因此，该试验结果为深入研究山楂黄酮作为细胞修复、动物消炎保健做出进一步论证。