UPLC法测定醋酸阿托西班含量及有关物质方法学研究

林强

摘要：醋酸阿托西班是子宫内及蜕膜、胎膜上受体的催产素竞争性的拮抗剂，能有效帮助早产的孕妇推迟即将来临的早产，达到保胎的目的。目前通常采用HPLC法测定醋酸阿托西班含量及有关物质，其检测时间较长，化学试剂用量大，本文参照HPLC测定方法，进行UPLC含量及有关物质测定方法学研究。

关键词： HPLC、UPLC、醋酸阿托西班、方法学

【中图分类号】 R4 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）12--01

原料藥生产过程中，需严格控制每一道工序纯化产物的有关物质，故而每次纯化收集的馏分都需经过检测，检测符合要求后方可转入下一道工序。目前生产过程中的检测，主要以高效液相色谱仪（HPLC）进行检测。其单次检测耗时较长，大批量生产时检测次数多，需配备较多的高效液相色谱仪（HPLC）及较长的检测周期以满足生产的需求，设备、时间及人工成本较高。

目前，超高效液相色谱仪（UPLC）发展技术已十分成熟，其采用的色谱柱填料粒径更小，更利于有关物质的分离。相比较于高效液相色谱仪（HPLC），它的主要优势有分离度高，检测时间短，灵敏度更高，溶剂用量小等优点。如果能在原料药生产过程中使用，能够大大降低单次检测时长，检测周期都能较大的缩短，对于原料药生产过程的成本控制是非常有效的。而且，超高效液相色谱仪（UPLC）具有灵敏度高的优点，对于产品质量的控制也能起到很大的作用。

本文根据醋酸阿托西班原料药HPLC测定方法，进行UPLC方法学研究，旨在探讨UPLC条件下中间控制过程检测的适用性。

1. 仪器及试剂

本次使用的是waters公司生产的超高效液相色谱仪ACQUITY UPLC H-Class系统，C18色谱柱，规格为：2.1×50mm，1.8微米;试剂为：乙腈，纯化水，溶剂：50mmol/L磷酸二氢钾溶液。

2. 试验

2.1专属性试验：

分别称取经过结构确认的，生产过程中产生的相关杂质（杂质1、杂质3、杂质9、杂质27），用溶剂进行稀释配制成试液。

将目标产品阿托西班用溶剂配制成供试品溶液，与各杂质试液按（浓度比约为100：1）比例混合配制成系统适用性溶液，并对该系统适用性溶液进行检测，确定该洗脱条件下各组分分离及柱效情况。要求各组分USP分离度≥1.5，USP理论塔板数≥5000。检测结果如下：

从上表可以看出，系统适用性溶液各组分USP分离度>1.5，理论塔板数>25000，各组分之间均能达到有效分离，系统适用性良好。

2.2耐用性试验：

2.2.1、分别采用0.15ml/min、0.20ml/min、0.25ml/min，三个不同的流速，对系统适用性溶液进行检测，确定不同流速情况下系统适用性溶液分离情况;

2.2.2、分别采用三根相同规格，不同品牌色谱柱，按0.2ml/min的流速，对系统适用性溶液进行检测，确定不同品牌色谱柱情况下该系统适用性溶液分离情况。

通过检测结果发现，不同流速情况下，系统适用性溶液各组分USP分离度均>1.5，理论塔板数均>25000，流速的细微变化对样品检测分离无影响;不同品牌色谱柱之间检测结果同样满足分离度及柱效要求，保留时间基本一致。

2.3定量限及检测限试验：

通过检测，通常信噪比达到10～15，可作为定量限;信噪比达到3～5，可作为检测限。定量限及检测限均符合要求，满足日常生产需求。

2.4线性范围试验：

取溶剂，定量限试液进样1ul作为最低点，取阿托西班配制样品溶液，分别进样0.5ul、1.0ul、1.5ul、2.0ul、2.5ul， 检测结果峰面积分别为142、2837301、5866774、8837434、11769891、14843102，通过计算得出R2=0.9999，即当前样品浓度下，在当前的进样量范围内，结果满足线性关系。

2.5准确度（回收率）试验：

配制成阿托西班含量分别为80%、100%、120%的三组样品，每组检测3次，共计9次，并计算其回收率。回收率（%）=实际测定值/理论值*100%，通过结果计算回收率为100.13%，符合要求。

稳定性试验：

配制样品溶液进行稳定性考察，分别在：0小时、2小时、4小时、8小时、12小时、24小时、30小时进样测定，样品峰面积RSD≤0.6%。样品溶液稳定性良好。

2.6进样精密性试验：

2.7.1、配制阿托西班样品溶液，连续进样6针进行测试进样精密度，确定设备重复性，保留时间及峰面积RSD分别为0.8%;0.6%。

2.7.2、使用不同实验室，同型号设备，相同参数条件，不同操作人员连续进样6针进行检测中间精密度。

检测结果显示，进样精密度保留时间及峰面积RSD值分别为0.0%及0.1%，设备重复性精密度良好。

不同实验室检测结果显示，保留时间及峰面积RSD分别为0.3%和0.3%，重复性符合要求，中间精密度良好。

3. 结论

通过上述试验结果表明，在当前醋酸阿托西班原料药UPLC检测色谱条件下，主成分阿托西班与杂质之间的分离度、柱效，系统适用性良好;设备定量、检测灵敏度高，设备准确度及精密度符合生产需求，可以作为醋酸阿托西班中间过程控制的检测方法。

参考文献：

[1]HPLC法测定醋酸阿托西班有关物质的研究[J]. 姚志勇，支钦，李新宇.  中国处方药. 2014（05）