组织病理学角度探讨真菌性鼻窦炎

李婉婉 范长民 孙配龙 张 斌

(吉林金域医学检验所有限公司 吉林 长春 130000)

真菌性鼻窦炎是临床常见的一种特异性感染性疾病，因其不但感染鼻窦，也侵犯鼻腔，所以学者们提议改名为真菌性鼻-鼻窦炎(fungal rhinosinusitis，FRS)。根据组织学发现，依据真菌是否侵及黏膜，大致可其分为侵袭性及非侵袭性两大类[1, 2]。以往真菌性鼻窦炎被人们认为极为少见的一种疾病，但是随着临床用药的广泛性使用，抗生素、糖皮质激素等被大量使用在治疗各种疾病中，使机体的对各种病菌的免疫能力不断降低，真菌性鼻窦炎也不断增多。其患病症状在临床上没有特殊的特异性症状，患者个体表现的症状也轻重不一，初期症状表现与化脓性鼻窦炎症状相类似甚至相同，临床医师诊断时很容易被误导，耽误患者的尽早治疗[3]。组织病理学是将活检组织或者手术标本制作成切片在显微镜下观察组织细胞形态变化，从而诊断疾病的一种手段，本文介绍一个非侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎的病例，从组织病理学角度进行分析讨论。

1 资料与方法

1.1资料 一名48岁女性医院门诊就诊，单侧鼻阻塞，头疼，流脓涕，行鼻内镜鼻窦开放术手术治疗，取出病灶送检病理。

1.2试剂 苏木素-伊红染色(Hernatoxylin and Eosin Stain,HE)试剂，高碘酸雪夫(PAS)染色液(珠海贝索生物有限公司)，六胺银(Gomori)染色液(珠海贝索生物有限公司)

1.3方法 组织常规取材、10%中性缓冲甲醛溶液固定、常规脱水、透明、石蜡包埋，4μm厚连续切片，70℃烤台烤片30min。行HE染色、PAS染色及六胺银染色。PAS染色中真菌呈紫红色，背景由Mayer苏木素对比染色，细胞核呈淡蓝色；六胺银染色中真菌菌丝及孢子呈黑褐色，背景伊红染色呈红色。具体染色步骤如下：

1.3.1HE染色[4]

(1)将已入蒸馏水后的切片置入苏木精水溶液中染色数分钟。

(2)酸水及氨水中进行分色，各进行数秒钟。

(3)流水冲洗一个小时候入蒸馏水数分钟。

(4)入70%和90%酒精中脱水各进行10分钟

(5)入酒精伊红染色液染色2-3分钟。

(6)染色后切片经使用纯酒精进行脱水，再经二甲苯使切片透明。

(7)将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固，略干，贴签，即可使用。

1.3.2六胺银染色[5](1)切片经二甲苯5min*2、无水乙醇5min*2、95%乙醇5min*2、85%乙醇5min、70%乙醇5min完成脱蜡。脱蜡后自来水冲洗5min。

(2)加入1%过碘酸水溶液中作用10min。自来水冲洗。后使用蒸馏水冲洗二次，每次3min。

(3)六胺银液预热至65℃，切片放入其中浸染75min，蒸馏水冲洗二次，每次3min。

(4)用0.1%氯化金调色处理5min,蒸馏水冲洗二次，每次3min。

(5)用5%硫代硫酸钠处理5min,蒸馏水冲洗二次，每次3min。

(6)用0.5%亮绿复然细胞质。

(7)切片再经70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇各1min；经95%乙醇1min,换液重复一次；无水乙醇2min,换液重复一次快速脱水，后用二甲苯透明5min,换液重复一次。

(8)盖上盖玻片，滴入适量中性树胶，封片。

1.3.3PAS染色[6]

(1)石蜡切片脱蜡放置自来水、蒸馏水中冲洗，70%酒精冲洗，每次3min。

(2)进入高碘酸酒精溶液10min,溶液温度控制在17-20℃为宜。

(3)70%酒精冲洗后，入还原液1min，溶液温度控制在17-20℃为宜。

(4)70%酒精再次冲洗后，入无色盐基性品红溶液60-90min,室内温度较低时，放入37℃恒温箱中进行。

(5)流水冲洗10min,用Mayer苏木素复染液复染细胞核3-5min,再用1%盐酸酒精进行分化。

(6)流水再次冲洗，脱水，透明，封固。

2 结果

2.1 HE染色 HE染色真菌菌丝及孢子不着色，能看到菌丝轮廓，黏膜未见菌丝侵犯(图1)。

图1 HE染色结果(左200X，右400X)

2.2 PAS染色 结果显示PAS阳性，见真菌菌丝团块，大量菌丝缠绕(图2)。

图2 PAS结果(左200X，右400X)

2.3 Gomori染色 结果显示真菌菌丝及孢子呈阳性，其中能看到大量真菌团块(图3)。

3 讨论

随着我国医疗资源的不断发展壮大，临床用药也越来越丰富多样，对于各种疾病的治疗，大量的药物逐渐被投放在临床治疗应用中，这其中包括抗生素、糖皮质激素具体强大杀菌消炎效果的药物，这些药物的使用也增加了一部分人体的对不同菌属的出现耐药情况，随着我国经济腾飞，我国国人整体生活水平大大提高，生活工作节奏也逐渐加快，人们的生活丰富多彩，生活不规律、工作压力大也屡屡发生在身边，导致多数人都处于亚健康状态，身体免疫能力出现不同程度的下降，抵抗细菌、真菌、病毒的侵害的能力下降。人们机体免疫功能及机体代谢能力的差异化，各类菌属的应变能力、侵袭能力不断增强，也会出现不同病理变化，导致不同的临床结果[7]。

真菌广泛存在于自然界中，而对机体有致病的真菌便有300多个种类，临床上真菌类病变多发，也引起了临床医师对真菌疾病的广泛关注。鼻炎是耳鼻喉科最常见的疾病之一，因鼻腔黏膜受到炎症因子长期刺激而导致，当机体为即使治疗致使病情反复发作，便会继续发展成鼻窦炎，其发生与细菌病毒等感染、鼻腔鼻窦等组织发生病变、周围的组织感染等均有关。真菌性鼻-鼻窦炎根据真菌侵犯范围及组织受损程度不同分为非侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎(Noninvasive fungal rhinosinusitis,NIFS)和侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎(Invasive fungal rhinosinusitis,IFS),其中以NIFS多见[8-9]。非侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎包括侵袭性包括真菌球型鼻-鼻窦炎(fungus ball，FB)、变应性真菌性鼻-鼻窦炎(allergic fungal rhinosinusitis，AFRS)[10]，FB常见于中老年女性，多表现为单侧鼻塞、涕有异味、脓涕，还可伴有头痛等症状，具有较为典型的CT表现，以骨质增生、破坏并存为主，真菌感染以曲霉菌属多于其他菌属[11]，真菌球的主要治疗手段是鼻内镜手术和清创术，能完整清除病灶的同时，清除阻塞因素，重建正常解剖结构，保护窦腔粘膜，恢复正常生理功能[12]，一般不予抗真菌药物治疗，预后良好，不易复发[2]，若出现复发现象，可给予上颌窦冲洗即能有效控制病情。AFRS多见于青年及有特应性体质的人，常伴有支气管哮喘、鼻息肉，其临床症状与FB相似[10]。真菌性鼻-鼻窦炎多数是在机体长期使用糖皮质激素、抗生素、免疫抑制剂或接受放射治疗等情况下发生，也可在一些慢些消耗性疾病导致机体抵抗力下降时发生[13]。

临床对真菌的快速诊断方法有很多，包括常规苏木精-伊红(HE)染色、六胺银染色法和过碘酸雪夫染色(PAS)法等，本实验采用三种检测方法共同检测，从研究结果来看，HE染色着色较浅甚至部分未着色，菌体较小时难以辨认，真菌菌丝及孢子不着色，能看到菌丝轮廓，黏膜未见菌丝侵犯。而六胺银染色法和PAS法均对真菌有良好的显色效果，而六胺银染色比PAS染色的效果更敏感，对各种霉菌均着色，使菌丝和孢子呈明显的黑褐色，颜色形态对比清晰，在镜下极易辨认，也有利于长久保存[14]。六胺银染色真菌的原理是将真菌内的多糖化合物进行氧化后暴露醛基，醛基将六胺银液中银还原，变成黑色的金属银，使真菌着色，菌丝和孢子成明显黑褐色。

本病例组织病理学检查结果显示送检组织内见大量真菌团块，真菌细胞未侵犯黏膜，结合病史及临床症状符合真菌球型鼻-鼻窦炎。