UPLC-MS/MS法测定食品中非法添加调节 胃肠功能类化合物

◎ 胡紫艳，李 丹，史 达，蒋小文，金 鑫

(南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 210000)

近年来市面上宣称改善胃肠道功能的食品种类和数量日益庞大。伴随着庞大的市场需求以及追求快速显效的目的，使得此类食品存在较高的非法添加化学药物风险，目前已有较多文献和报道指出在保健食品和中成药中发现非法添加西咪替丁、雷尼替丁等化学药物[1-2]。非法添加的化学药物生产质量得不到保障，用法用量难以控制，消费者在不知情的情况下摄入，存在重复用药、配伍禁忌、毒副作用等诸多安全隐患，可能对服用者身体带来损害，严重情况下甚至诱发死亡。雷尼替丁因含有不可接受剂量的2A类致癌物N-亚硝基二甲基胺，在美国和欧盟等多个国家已撤市[3]。

非法添加化学药物的趋势是多种类化学药物混合添加[4]。由于胃肠功能紊乱会引发便秘，临床上多采用西咪替丁、法莫替丁、雷尼替丁、奥美拉唑和莫沙必利等联合用药方式进行双向调节，因此改善胃肠道功能的食品中存在较高混合添加的风险[5-7]。含有多种非法添加化学药物的食品对人体的危害更大，且难以风险识别和危害溯源。而目前针对此类食品非法添加的相关检验标准并不完善，也缺乏快速检测的方法体系，不利于监管部门精准、快速地查处。因此，迫切需要对调理胃肠功能和有助于润肠通便类的食品建立检测上述风险较高的常见5种物质的检测标准，并配套建立相关非法添加物质快速、精准的检测方法体系，以填补目前的监管盲区。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

Agilent 1290-G6495液相色谱-三重四极杆质谱联用仪（配备ESI源，Agilent公司）；ME204电子天平（十万分之一，METTLER TOLEDO公司）；AllegraX-30R高速离心机（BECKMAN COULTER公司）；Milli-Q超纯水系统（Millipore公司）。

1.2 材料与试剂

标准品枸橼酸莫沙必利（批号：100656-201903）、 西咪替丁（批号：100158-201406）、法莫替丁（批号：100305-201304）、盐酸雷尼替丁（批号：100163-201607）和奥美拉唑（批号：100367-201706）均购于中国食品药品检定研究院。甲醇、甲酸为色谱纯，购自德国Merck公司；实验用水为超纯水。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18RRHD（2.1 mm× 100 mm，1.8 µm）；进样体积：2 µL；柱温：30 ℃；流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：甲醇；流速： 0.3 mL·min-1；梯度洗脱程序：0～5.0 min，8% B；5.0～6.0 min，8%→90% B；6.0～8.0 min，90% B；8～9 min，90%→8% B；9～15 min，8% B。

1.3.2 质谱条件

离子化方式：电喷雾电离（ESI+）；多反应监测（Multiple Reaction Monitoring；MRM）模式；雾化气：N2；干燥气流速：8 L·min-1；喷雾电压：500 V；气流温度：350 ℃；毛细管电压：3 500 V（+）；鞘气流速：11 L·min-1；鞘气温度：250 ℃。具体质谱参数见 表1。

表1 5种标准物质质谱参数表

1.3.3 标准溶液的制备

取莫沙必利、西咪替丁、法莫替丁、雷尼替丁和奥美拉唑标准品适量，分别用甲醇制成浓度均为 100 μg·mL-1的标准贮备液。准确吸取各贮备液1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，制成浓度为100 μg·mL-1的混合标准中间液。再准确吸取混合标准中间工作液适量，用乙腈-水溶液（9∶1）配 成 各 化 合 物 浓 度 依 次 为1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1，作为系列混合标准工作溶液。

1.3.4 样品制备

（1）固体试样。取固体试样混匀，研细，精密称取1.0 g粉末，置50 mL具塞离心管中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL，涡旋1 min，超声提取10 min， 于8 000 r·min-1离心5 min。上清液转移至50 mL容量瓶中，用乙腈-水溶液（9∶1）稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜，取滤液，根据实际浓度适当稀释至线性范围内。

（2）液体试样。准确吸取样品1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL，超声提取10 min，用乙腈-水溶液（9∶1）稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜，取滤液，根据实际浓度适当稀释至线性范围内。

2 结果与分析

2.1 方法学考察结果

2.1.1 专属性

选择市场常见的调理胃肠功能的片剂、固体粉末以及口服液为空白基质，按样品处理方法得到空白基质溶液，进样分析，结果均未检出5种化合物。分别取空白基质溶液，加入混合标准中间工作液适量，作为模拟供试液进行测定，结果均能检出5种化合物，表明空白基质不干扰检测。

2.1.2 线性

取1.3.3项下的系列混合标准工作液进行分析。以化合物的峰面积（Y）为纵坐标，对应的质量浓度 （X，ng·mL-1）为横坐标，绘制标准曲线。由表2可知，5种化合物在规定的范围内线性关系良好，相关系数均大于0.995。提取离子流色谱代表图见图1。

2.1.3 精密度

取未检出的样品作为空白基质，加适量混合标准中间液，配成浓度为10 ng·mL-1的样品溶液，按上述条件重复测定6次。由表2可知，5种目标化合物的相对标准偏差（n=6）为1.52%～3.89%，说明本方法精密度良好。

2.1.4 加样回收和重复性

以不含目标分析物的片剂、固体粉末和口服溶液作为空白样品，分别添加标准曲线内最低、中、最高3个浓度水平，每个浓度平行制备3份样品。按1.3.4样品制备方法处理并进行测定。由表2可知，回收率均在82.3%～108.9%，重复性的RSD＜7.0%（n=9），均符合要求。

2.1.5 检出限

取空白基质固体样品1.0 g、液体样品1.0 mL，加低浓度的混合标准工作液，按样品制备方法制备检出限溶液。以信噪比S/N≥3计算检出限。5种化合物的线性范围、回归方程、相关系数、精密度、回收率和检出限等参数见表2。

表2 检测5种化合物的参数表

2.1.6 基质效应

取调理胃肠功能的片剂、固体粉末、口服液3种类型的阴性样品进行等质量混合作为空白基质，精密称取空白基质样品1 g，加入100 ng·mL-1的混合标准工作溶液5 mL到空白基质中，按1.3.4样品制备方法处理得到10 ng·mL-1的混合基质加标溶液，另取 10 ng·mL-1的混合标准工作液，同时上机测定。计算 2种溶液中化合物的响应值百分比来考察基质效应。由表2可知，5种化合物的基质效应均在85.4%～110.8%，表明3种常见类型的基质样品对 5种化合物的基质效应影响较小，在可接受范围内。

2.2 实验条件优化

2.2.1 提取溶剂的选择

本研究以调理胃肠功能的片剂、固体粉末以及口服液等典型基质作为实验对象，分别比较了甲醇、乙腈、甲醇-水和乙腈-水的提取效果。结果发现，乙腈的提取效率优于甲醇，在提取溶剂中加入一定量的水，使提取溶剂对样品的渗透性加强，增大有机溶剂与样品的接触面积，从而提高提取效率，因此选用乙腈-水溶液（9∶1）作为提取溶剂。

2.2.2 提取时间的考察

称取空白样品1.0 g，加适量混合标准溶液作为模拟样品，置50 mL离心管中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL后，分别超声5 min、10 min、15 min和20 min，8 000 r·min-1离心5 min，澄清液经0.22 μm滤膜过滤，取滤液进行分析测定。

由图2可知，各待测化合物的提取率在前10 min 内与超声时间成正比，10 min后继续延长超声时间，提取率呈下降趋势。因此，选用超声10 min对样品进行提取。

3 结论

食品中非法添加化学药物会对服用者的身体健康和生命安全造成严重威胁，随着现代生活节奏的加快所造成的饮食不规律及饮食结构的不合理，市场上调节胃肠功能的食品（保健食品）受到越来越多人的青睐。但目前监管中尚缺乏对此类食品中是否非法添加治疗胃肠疾病的化学药物的检测方法。本研究建立的方法样品前处理简单、快速，灵敏度度高，适用于食品中非法添加调节胃肠功能类化合物的筛查和测定。