老年帕金森病患者血清EGF、CysC、Aβ1～42表达变化及其与疾病分期、认知障碍的相关性

王小玲 张霞 程秋凤 王磊

(1聊城市人民医院脑科医院神经内科，山东 聊城 250000；2聊城市第三人民医院神经内科)

帕金森病在老年群体中具有较高发病率，且部分患者存在一定程度认知损害，若患者未及时得到有效干预，则随病情进展，多数患者可进展为帕金森病痴呆〔1～3〕。随临床研究深入发现，表皮生长因子(EGF)可促进细胞有丝分裂，并参与神经细胞等诸多细胞生长与增殖、分化，且对神经干细胞发育及增殖等具有调控作用，还可促使受损神经功能恢复〔4,5〕。β淀粉样蛋白(Aβ)1～42近些年已成为神经系统退变性疾病生物学标志物研究热点，其自身可造成多巴胺(DA)神经元进行性变性，改变DA能神经元形态，沉积于脑部皮层引发氧化应激反应、炎性级联反应，参与帕金森病发病及进展〔6～8〕。而胱抑素(Cys)C为反映肾功能的重要指标，新近研究发现其和诸多神经系统病变具有关联性，能调节半胱氨酸蛋白酶活性，参与炎性反应，而神经免疫炎症为帕金森病重要发病机制，故认为其与帕金森病也具有一定关联性〔9～11〕。本研究探讨老年帕金森病患者血清EGF、CysC、Aβ1～42表达变化及其与疾病分期、认知障碍的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 2017年2月至2019年12月聊城市人民医院脑科医院帕金森病患者116例设为研究组，另选取同期健康体检者116例设为对照组。研究组男67例，女49例；年龄60～78岁，平均(69.03±4.30)岁；疾病分期：早期54例〔Hoehn-Yahr(H-Y)分级<3级〕，中晚期62例(H-Y分级≥3级)；认知状况：伴认知障碍73例〔蒙特利尔认知评估(MoCA)量表评分<26分〕，无认知障碍43例(MoCA评分≥26分)；受教育程度：小学及以下26例，中学56例，大专及以上34例。对照组男63例，女53例；年龄61～80岁，平均(70.39±4.61)岁；受教育程度：小学及以下23例，中学57例，大专及以上36例。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，本研究经医院伦理委员会审批通过。纳入标准：(1)研究组符合《中国帕金森病治疗指南(第三版)》〔12〕中帕金森病诊疗标准；(2)对照组MoCA评分≥26分；(3)知晓本研究，签署同意书；(4)研究组既往未采取帕金森病相关治疗药物。排除标准：(1)合并其他神经系统病变；(2)合并全身性感染性病变；(3)存在进行性核上性麻痹、皮质基底节变性等帕金森病叠加综合征；(4)DA受体阻滞剂所致帕金森病综合征及血管性帕金森病综合征；(5)其他可造成认知障碍的疾病，包括头部外伤、药物不良反应、严重抑郁等。

1.2方法 入院后抽取所有受检者外周静脉血4 ml，离心取上清液(3 000 r/min，10 min)，离心半径为4.5 cm，置于-20℃环境中储存待检，以美国Bio-RAD公司Bio-RAD550型酶标仪经酶联免疫吸附法测定EGF、CysC、Aβ1～42水平；试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.3观察指标 (1)统计研究组与对照组血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(2)统计分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平与帕金森病间关联性。(3)统计分析研究组不同疾病分期患者血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(4)统计分析研究组不同认知障碍程度患者血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(5)统计分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平与疾病分期、认知障碍间关联性。(6)统计分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平对帕金森病单独及联合诊断效能。

1.4统计学方法 采用SPSS22.0软件进行t检验、χ2检验、Spearman相关分析，受试者工作特征(ROC)曲线探讨血清各指标单一与联合检测对帕金森病诊断效能。

2 结 果

2.1两组血清指标水平 研究组血清Aβ1～42、EGF水平明显低于对照组，CysC水平明显高于对照组(均P<0.001)。见表1。

表1 两组血清指标水平比较

2.2血清指标与帕金森病关联性 以帕金森病作为因变量，将Aβ1～42、EGF、CysC作为自变量，纳入Logistic回归分析模型，结果显示，Aβ1～42、EGF、CysC与帕金森病具有显著关联性(P<0.001)。见表2。

表2 帕金森病影响因素的Logistic回归分析

2.3不同疾病分期患者血清指标水平比较 中晚期患者血清Aβ1～42、EGF水平明显低于早期患者，CysC水平明显高于早期患者(P<0.01，P<0.001)。见表3。

表3 不同疾病分期患者血清指标水平比较

2.4不同认知障碍程度患者血清指标水平 伴认知障碍患者血清Aβ1～42、EGF水平明显低于无认知障碍患者，CysC水平明显高于无认知障碍患者(均P<0.001)。见表4。

表4 不同认知障碍程度患者血清指标水平比较

2.5血清指标与疾病分期、认知障碍间关联性 血清Aβ1～42、EGF水平与疾病分期、认知障碍呈负相关，CysC水平与疾病分期、认知障碍呈正相关(均P<0.001)。见表5。

表5 血清指标与疾病分期、认知障碍间关联性分析

2.6血清指标单独及联合诊断效能 各指标联合诊断AUC为0.892，95%CI为0.845～0.929，当Aβ1～42截断值≤1.01 ng/ml、EGF≤886.17 ng/L、CysC>0.98 mg/L，其联合诊断敏感度为86.21%、特异度为81.90%，见表6、图1。

表6 血清指标单独及联合诊断帕金森病效能

图1 单独及联合诊断帕金森病ROC曲线

3 讨 论

帕金森病具有较高发病率，其致病因素复杂，与遗传、环境及年龄等均具有密切关联性，且细胞凋亡、钙离子超载、兴奋性氨基酸毒性、免疫异常、炎症反应、氧化应激、线粒体功能异常等均参与了疾病发生及进展〔13～15〕。同时，帕金森病患者随病程延长及临床分期增高，通常会发生不同程度认知障碍，对其日常生活构成影响。

帕金森病患者DA神经元变性丢失，额叶和基底核间皮质-皮质下DA环路显著受损，纹状体DA耗竭，可能为帕金森病患者发生认知功能障碍的重要病理基础〔16,17〕。正常生理状态下，脑内Aβ生成、降解维持动态平衡状态，血脑屏障中Aβ可利用外向转运及内向转运维持外周血、脑部Aβ含量平衡〔18〕。相关研究指出，若编码APP基因发生突变及其他因素造成β-分泌酶活性显著增高，则APP易被γ-分泌酶及β-分泌酶一同切割形成Aβ，主要包括Aβ1～42与Aβ1～40两种形式〔19,20〕。Aβ1～42亚型含量虽少于Aβ1～40，但聚集性和神经毒性均更强，其神经毒性作用主要参与细胞凋亡、细胞中钙稳态失衡、氧自由基代谢等。α-突触核蛋白(Syn)和帕金森病间关联性研究较早，其病理性聚集、错误折叠可形成路易小体，最终造成细胞凋亡。而Cheng等〔21〕研究表明，α-Syn异常聚集可造成突触损伤与功能异常，而可溶性Aβ较纤维状Aβ引发上述病理变化的风险更大，且Aβ1～42和α-Syn聚集、α-Syn过磷酸化关系密切。Clinton等〔22〕协同作用加剧突触损伤，致使疾病进展性加剧。另有研究证实，Aβ1～42和α-Syn能协同作用于神经元，致使细胞突触数目与功能降低，且相较于单纯阿尔茨海默病患者，同时具备Aβ1～42和α-Syn病理改变的患者，认知功能异常进展更快〔23,24〕。本研究结果可能是因Aβ1～42造成血脑屏障渗透性提升，紧密连接蛋白受损，上调高级糖基化终产物受体作用，使脑屏障中Aβ1～42内向转运显著多于外向转运，脑中Aβ1～42水平明显增高，发生聚集沉积，故外周血内Aβ1～42水平减少。

CysC属半胱氨酸蛋白酶抑制剂，以恒定速度在所有有核细胞中表达，其和诸多神经系统病变均具有关联性，其能通过影响半胱氨酸蛋白酶活性，参与细胞外基质生成及降解，参与炎性反应，诱导神经细胞再生，且其还可上调α-Syn表达，最终造成神经细胞凋亡〔25,26〕。本研究结果产生的原因可能在于：脑组织受损伤时，对应组织蛋白酶水平增高，CysC活化，表达增加，保护机体细胞。同时，CysC对认知功能具备一定保护作用，其可结合于Aβ1～42及Aβ1～40，对淀粉样斑块沉积予以抑制，减少蛋白组酶，阻止Aβ生成和聚集〔27,28〕。EGF不仅具备强力细胞有丝分裂原，还可促进神经系统生长发育，并能于神经元氧化损伤中，对中脑DA神经元产生营养及保护作用。Chen-Plotkin等〔29〕研究证实，血清EGF含量降低和帕金森病患者发生认知功能障碍具有密切关联性，其在预测帕金森病患者认知功能转化中具有潜在优势。本研究结果提示EGF表达情况也与帕金森病发病及病情程度等具有相关性。此外，本研究还显示联合诊断效能更高，故推测临床实际可联合上述指标对帕金森病予以综合诊断，确保实现早发现、早治疗。但本研究存在样本选取量少等弊端，故其具体效力仍需进一步探究证实。