miR-155在结肠癌组织中的表达及其对HCT116、SW480细胞增殖与凋亡的影响

朱邢超，乐红琴

盐城市第三人民医院消化内科，江苏盐城 224000

结肠癌是临床常见癌症疾病之一，国内较常见，好发于中老年人群，多数患者早期无明显症状或仅有部分轻微症状，不易发现，容易发生远处转移，会给患者身心健康和生活质量带来许多不利的影响，同时也会带来一定的家庭经济负担[1-2]。刘黎等[3]的研究指出，微小RNA-155（miR-155）的下调能够增加细胞放射的敏感性，抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。microRNAs（miRNAs）是一类22～25 nt内源性的非编码的单链小分子RNA，参与动植物转录后基因表达调控，其与肿瘤疾病的发生、发展密切相关[4]。如在甲状腺乳头状癌[5]中，其表达水平与肿瘤TNM分期、病理分级及淋巴结转移等密切相关；其在乳腺癌[6]疾病中，miR-155表达水平与雌激素受体、孕激素受体有相关性。miR-155与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关，并能对肿瘤细胞生物学形成产生影响，其能为临床治疗结肠癌提供新的治疗策略。该次研究收集2020年6月—2021年6月盐城市第三人民医院内镜中心结肠镜检查病理标本提示为结肠癌，且符合入组条件的78例结肠癌活检组织，分析结肠癌组织中miR-155表达，并明确其对细胞增殖与凋亡的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集盐城市第三人民医院内镜中心结肠镜检查病理标本提示为结肠癌，且符合入组条件的78例结肠癌活检组织纳入结肠癌组织组，另外选取距离癌组织边缘＞5 cm对应的癌旁组织标本为对照组。78例患者男50例，女28例；年龄34～78岁，平均（49.36±2.74）岁；病程7个月～3年，平均（1.26±0.39）年；体质指数23～30 kg/m2，平均（25.39±1.39）kg/m2；分期标准：Ⅰ期19例、Ⅱ期20例、Ⅲ期29例、Ⅳ期10例；组织分化程度：高分化40例、中分化17例、低分化21例。研究并获院内医学伦理委员会批准。

纳入标准：①研究所纳入的研究对象符合世界卫生组织（WHO）关于结肠癌的定义[7]；②经手术病理证实；③手术前均未接受任何放化疗及免疫治疗；④病灶无明显坏死区；⑤患者均在该院建档立卡，个人信息建档立卡齐全；⑥患者对该次研究内容充分了解，并在知情同意书上签字。排除标准：①合并存在严重电解质紊乱者；②妊娠或哺乳期女性者；③具有明显炎症细胞浸润癌旁组织者；④临床资料不全者；⑤合并其他恶性肿瘤疾病患者。

1.2 方法

选取自患者的病灶组织标本，人结肠癌HCT116、SW480细胞购买于中国科学院细胞库，细胞培养液购自美国GIBCO公司，miR-155抑制剂购自上海邦景实业有限公司。

使用qRT-PCR方法检测结肠癌组织和癌旁组织标本miR-155表达水平，按照Trizol试剂盒说明书操作提取总RNA，后根据反转录试剂盒操作步骤进行实时逆转录聚合酶反应，miR-155所用引物和内源性对照均购自上海邦景实业有限公司。

结肠癌细胞增殖率检测，将HCT116、SW480细胞培养至对数生长期后进行细胞传代，并分为空白对照组，不进行干预；miR-155抑制剂作用组，每组再分为24、36、48、72 h观察组，相应作用时间完成后，加入CCK8溶液，并继续培养3 h，后使用酶标仪（山东恒美电子科技有限公司，HM-SY96）读取数值。使用流式细胞仪（贝克曼库尔特国际贸易有限公司，CytoFLEX-LX）检测空白对照组和miR-155抑制剂作用组结肠癌细胞凋亡率。

1.3 观察指标

①对比癌旁组织与结肠癌组织miR-155表达水平差异。

②观察miR-155抑制剂对人结肠癌HCT166、SW480细胞增殖的影响。

③观察miR-155抑制剂对人结肠癌HCT116、SW480细胞凋亡的影响。

1.4 统计方法

采用SPSS 23.0统计学软件处理数据，符合正态分布的计量资料采用（±s）表示，进行t检验；采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌旁组织与结肠癌组织miR-155表达水平比较

经检查发现，结肠癌组织miR-155水平（2.41±0.12）、癌旁组织（1.01±0.09），结肠癌组织miR-155水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 癌旁组织与结肠癌组织miR-155表达水平差异比较（±s）

表1 癌旁组织与结肠癌组织miR-155表达水平差异比较（±s）

组织miR-155表达水平结肠癌组织组（n=78）对照组（n=78）t值P值2.41±0.12 1.01±0.09 82.430<0.001

2.2 miR-155抑制剂对HCT116、SW480细胞增殖率的影响

miR-155抑制剂对人结肠癌HCT116、SW480细胞作用后发现，其能有效降低HCT116、SW480细胞增速度，见图1、图2。

图1 miR155抑制剂对HCT116细胞增殖率的影响

图2 miR-155抑制剂对SW480细胞增殖率的影响

2.3 miR-155抑制剂对人结肠癌HCT116、SW480细胞凋亡的影响

miR-155抑制剂对HCT116、SW480细胞作用后发现，与空白对照组相比，能明显增加结肠癌细胞凋亡率，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 miR-155抑制剂的使用对结肠癌HCT116细胞和SW480细胞凋亡的影响（±s）

表2 miR-155抑制剂的使用对结肠癌HCT116细胞和SW480细胞凋亡的影响（±s）

组别细胞凋亡率幅度 凋亡率空白对照组mi R-155抑制剂作用组HCT116（4.05±0.47）SW480（3.77±0.29）HCT116（4.09±0.46）SW480（3.75±0.27）t/P HCT-116值t/P SW480值2.84±0.94 3.64±1.13 21.43±3.29 17.24±2.59 47.983/<0.001 42.506/<0.001

3 讨论

结肠癌是全球常见的恶性肿瘤，随着生活方式、膳食习惯改变，人口老龄化加剧等因素的影响，其发病率逐渐呈上升趋势。疾病与多种因素有关，涉及多方面，如生活环境、遗传以及药物不合理使用等，疾病的发生、发展与肿瘤细胞增殖、转化密切相关，需要加强对疾病分子生物学深入研究。结肠癌具有很强的环境关联性和遗传风险因素，手术治疗虽能有效消除病灶，但术后复发和转移会影响整体治疗效果，患者的生存质量仍旧受到威胁[8-9]。结肠癌发生发展机制，涉及原癌基因激活、抑癌基因突变、细胞异常增殖、染色体缺失等。miRNAs在恶性肿瘤发生过程中会发挥癌基因或抑癌基本功效，其很有可能会成为恶性肿瘤诊断与判断患者预后的预期靶点[10]。miR-155位于人21号染色体，其能够促使细胞周围纤维母细胞转化为肿瘤相关性纤维细胞，进而会促使恶性肿瘤疾病进展[11]。另外其还会抑制TP53INPI mRNA功能，降低其表达水平，可促进肿瘤细胞增殖[12]。

该次研究结果指出，相较于癌旁组织（1.01±0.09），结肠癌组织miR-155水平（2.41±0.12）较高（P＜0.05），表示其在一定程度上促进结肠癌的发生、发展。此外在常占国等[13]的研究中提到，miR-155在结肠癌组表达水平（3.09±0.23）高于正常组（1.02±0.15），与该次研究结果相似，且其表达水平还与与淋巴结转移、临床分期、组织分化程度以及浸润深度密切相关。另外其低表达时，无进展生存期、总体生存时间均较高，提示通过miR-155表达水平能够判断患者预后[14]。

关于miR-155在细胞增殖以及凋亡中的作用，研究结果表示，miR-155抑制剂能有效降低结肠癌HCT116细胞、SW480细胞增速度，增加结肠癌细胞凋亡率（P＜0.05），提示结肠癌细胞增殖与凋亡中，miR-155具有重要的调控作用。miR-155可能在结肠癌的迁移中发挥重要作用，可通过上调其表达，增强肿瘤细胞的转移能力，从而影响患者预后[15]。除却细胞增殖外，关于肿瘤细胞凋亡临床也需加强重视，其是细胞内普遍存在的生物学过程，一定程度上能够反映抗癌药物使用的有效性[16-17]。线粒体凋亡信号通路是最为常见的肿瘤细胞通路，且线粒体凋亡信号也在肿瘤细胞凋亡中发挥着重要作用[18-19]。Bcl-2家族蛋白在线粒体凋亡信号通路中具有重要价值，Bcl-2家族蛋白，特别是Bax，能促进细胞凋亡发生。在李涛等[20]的研究中提到，miR-155抑制剂使用后，线粒体凋亡相关蛋白Bax呈高表达状态，提示线粒体凋亡信号通路活化，诱导结肠癌细胞凋亡。

综上所述，在结肠癌组织中，miR-155表达水平较高，对其进行抑制能够降低HCT116细胞、SW480细胞增殖率，促使细胞凋亡，其有望能成为结肠癌患者治疗靶点，以期能够改善患者预后。