IL-6、ANCA、PAB联合肠道菌群检测对IBD的诊断价值

董丽丽 李华铭

[摘要] 目的 探討白细胞介素-6（IL-6）、抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗胰腺腺泡抗体（PAB）联合肠道菌群检测对炎症性肠病（IBD）的诊断价值。 方法 回顾性分析2018年3月至2020年3月在杭州市第三人民医院消化内科住院并行结肠镜检查的IBD患者130例设为IBD组，其中溃疡性结肠炎（UC）患者74例为UC组，克罗恩病（CD）患者56例为CD组，42例非IBD患者为疾病对照组，46例同期来我院健康体检者为健康对照组。检测各组的IL-6、ANCA、PAB及肠道菌群水平，比较各组的ANCA、PAB阳性率，及联合检测对IBD的检测效能。 结果 IBD组的ANCA、PAB、肠球菌（EC）、酵母菌（SB）、双歧杆菌（BL）、拟杆菌（BD）、真杆菌（ES）阳性率显著高于疾病对照组、健康对照组（均P<0.05）;联合检测阳性率均显著高于单独检测（P<0.05）;UC组的ANCA、ES及肠道菌群联合检测敏感度、阳性预测值均显著高于CD组，PAB检测敏感度显著低于CD组（P<0.05）;UC组的SB、ANCA+PAB+肠道菌群联合检测阴性预测值均显著高于CD组（P<0.05）;IBD组、疾病对照组、健康对照组的IL-6、SB、肠杆菌（EMB）、EC、BL、ES水平比较，差异有统计学意义（P<0.05）;联合检测敏感度、特异度均显著高于单独检测（P<0.05）。 结论 IL-6、ANCA、PAB联合肠道菌群检测有助于IBD的临床诊断，具有推广应用价值。

[关键词] 白细胞介素-6;抗中性粒细胞胞浆抗体;抗胰腺腺泡抗体;肠道菌群;炎症性肠病

[中图分类号] R392.1          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2022）13-0106-04

[Abstract] Objective To explore the diagnostic value of interleukin-6 （IL-6）， anti-neutrophil cytoplasmic antibody （ANCA）， anti-pancreatic acinar antibody （PAB） combined with intestinal flora detection for inflammatory bowel disease （IBD）. Methods A retrospective analysis of 130 patients with IBD hospitalized in the Department of Gastroenterology in Hangzhou Third People′s Hospital and underwent colonoscopy from March 2018 to March 2020 were selected as the IBD group， including the UC group of 74 patients with ulcerative colitis （UC） and the CD group of 56 patients with Ron′s disease （CD）.Another 42 non-IBD patients were selected as the disease control group，and 46 patients who came to our hospital for physical examination during the same period were selected as the healthy control group. The levels of IL-6，ANCA，PAB and intestinal flora in each group were detected. The positive rates of ANCA and PAB in each group and efficacy of combined detection for IBD were compared. Results The positive rates of ANCA， PAB， Enterococcus （EC）， Saccharomyces（SB），Bifidobacterium （BL），Bacteroides （BD） and Eubacterium （ES） in the IBD group were significantly higher than those in the disease control group and the healthy control group（P<0.05）.The positive rate of combined detection was significantly higher than that of single detection （P<0.05）.The sensitivity and positive predictive value of combined detection of ANCA， ES and intestinal flora in the UC group were significantly higher than those in the CD group，and sensitivity of PAB detection in the UC group was significantly lower than that in the CD group （P<0.05）.The negative predictive values of SB and combined detection of ANCA+PAB+intestinal flora in the UC group were significantly higher than those in the CD group（P<0.05）.There were statistically significant differences in levels of IL-6， SB， enterobacteria （EMB），EC，BL，and ES in the IBD group， the disease control group， and the healthy control group（P<0.05）.The sensitivity and specificity of combined detection were significantly higher than those of single detection （all P<0.05）. Conclusion IL-6，ANCA and PAB combined with intestinal flora detection is helpful for the clinical diagnosis of IBD. It is worthy of promotion and application.

[Key words] Interleukin-6; Anti-neutrophil cytoplasmic antibody; Anti-pancreatic acinar antibody; Intestinal flora; Inflammatory bowel disease

炎症性肠病（inflammatory bowl disease，IBD）是一种累及回肠、直肠、结肠的特发性慢性肠道炎症性疾病。临床诊断IBD主要通过其临床表现、内镜及病理组织学检查结果。但由于该病临床表现复杂多样，极易导致误诊，且难以判断炎症活动程度，因而探索多方式联合诊断进而提高诊断准确度具有积极意义。肠镜检查及镜下组织活检是目前IBD诊断的金标准，但该操作侵入性大，耗时长，具有一定局限性[1]。目前研究[2-3]普遍认为IBD的发病与肠道菌群密切相关，主要原因为肠道菌群作为肠道内的内生菌，与肠道黏膜免疫存在复杂的交互作用，从而维持肠道稳态，肠道菌群失衡是IBD发生、发展的重要因素，还和多种自身免疫性疾病紧密联系。白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、抗中性粒细胞胞浆抗体（antineutrophil cytoplasmic antibody，ANCA）、抗胰腺腺泡抗体（antipancreatic acinar antibody，PAB）是传统用于诊断IBD的血清学指标。本研究通过分析IBD患者与健康人群的血清IL-6、ANCA、PAB抗体及肠道菌群差异，探讨以上指标对IBD的诊断价值，以期为临床诊断IBD提供一定参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年3月至2020年3月在杭州市第三人民医院消化内科住院并行结肠镜检查的IBD患者130例，其中溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）患者74例（UC组），克罗恩病（crohn′s diseas，CD）患者56例（CD组）;选取杭州市第三人民医院消化内科收治的42例非IBD患者为疾病对照组，另选取46例同期来杭州市第三人民医院健康体检者为健康对照组。四组受试者的性别、年龄、身高、BMI比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。见表1。本研究经医院医学伦理委员会批准。

纳入标准：①符合IBD诊断标准[4];②均经肠镜检查及镜下组织活检确诊为IBD;③知情同意，并签署相关协议书;④结肠镜证实患者没有肠道器质性和阻塞性病变。排除标准：①身体体征极其不稳定，依从性较差，完全不配合医嘱;②细菌性痢疾、阿米巴痢疾、慢性血吸虫病、肠结核、缺血性结肠炎、放射性结肠炎、结肠癌、不明原因的一过性结肠炎等;③严重精神疾病与认知障碍，无法配合相关试验进行;④合并恶性肿瘤、恶性血液病、肝硬化、糖尿病、肾功能衰竭、重度脂肪肝、肥胖患者;⑤临床资料不全，近期患有急性感染性胃肠疾病或上消化道糜烂/溃疡者;⑥近期内服用益生菌制剂、非甾体类抗炎药和他汀类药物者。

1.2 方法

1.2.1 ANCA、PAB评价金标准  参考2018年中华医学会消化病学会炎症性肠病学组《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见》[5]，以结肠镜检查结果为本试验金标准。

1.2.2 IL-6、ANCA、PAB  空腹抽取患者血样5 ml，采用酶联免疫检测法检测受试者的血清IL-6水平。采用间接免疫荧光薄片法检测ANCA、PAB水平，试剂盒均购自德国欧蒙公司，取25 μl血清采用PBS按1∶10比例稀释，稀释血清移入样板反应区，封膜，37℃ 30 min，移出反复冲洗3次，加入20 μl荧光标记的抗人IGg，室温孵育30 min，显微镜下荧光细胞核周围呈线条状分布者为阳性。

1.2.3 肠道菌群检测  全部受检对象于结肠镜检查当日留取新鲜粪便样本5～10 g，放置于密闭无菌便盒中，常温30 min送检，根据光冈知足法进行细菌培养、鉴定及菌落检测。肠杆菌（enterobacillus，EMB）、肠球菌（enterococcus，EC）及酵母菌（saccharomycetes，SB）采用需氧菌培养基培养;双歧杆菌（bifidobacteria，BL）、擬杆菌（bacteroidetes，BD）、真杆菌（eubacterium sp，ES）采用厌氧培养基。细菌经革兰染色，生化试验进行鉴定，计算各组样本所含菌群数量，结果以对数LgN（CFU/g）表示。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件处理数据。计量资料用（x±s）表示，采用t检验，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义，IL-6、ANCA、PAB及各肠道菌群指标的诊断效能采用ROC曲线表示。

2 结果

2.1 各组的ANCA、PAB阳性率比较

IBD组的ANCA、PAB、EC、SB、BL、BD、ES阳性率显著高于疾病对照组、健康对照组（P<0.05）;联合检测的阳性率均显著高于单独检测，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.2 ANCA、PAB、肠道菌群及联合检测对IBD的诊断价值

UC组的ANCA、ES及肠道菌群联合检测的敏感度、阳性预测值均显著高于CD组，PAB检测敏感度显著低于CD组（P<0.05）;UC组的SB、ANCA+PAB+肠道菌群联合检测阴性预测值均显著高于CD组（P<0.05）。见表3。

2.3 三组的IL-6、肠道菌群水平比较

IBD组、疾病对照组、健康对照组的IL-6、SB、EMB、EC、BL、BD、ES水平比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

2.4 ANCA、PAB、IL-6、肠道菌群及联合检测对IBD的ROC曲线分析

联合检测的敏感度、特异度均显著高于单独检测，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表5、图1。

3 讨论

IBD临床表现为反复腹痛、腹泻、黏液脓血便、肠梗阻和肠穿孔，甚至出现各种全身并发症如视物模糊、癌变等[6]。研究[7]显示其发病率呈显著上升趋势。超过40%的IBD患者伴有肠外表现，可涉及多个器官系统，包括关节、皮肤、眼、肝、胆、肺、肾脏、免疫或血液系统等[8]。研究[9]发现IBD发生是环境因素、饮食习惯、遗传基因、肠道菌群及患者自身免疫因素等共同作用的结果。目前尚无可治愈的药物，且病情反复，严重影响患者的生活质量。

IBD相关抗体、血清标志物、肠道菌群等检测因其简单方便、无创经济等优势，近年来得到广泛关注[10]。IBD患者存在不同程度的肠道菌群紊乱现象，其中梭状芽孢菌呈降低趋势，而硝酸盐还原菌、大肠杆菌等数量则呈显著增长趋势[11，12]。

ANCA是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆中溶酶体酶发生反应的抗体，研究[13]发现ANCA在IBD相关的靶抗原多数为宿主反应中的中性粒细胞杀伤微生物的活性蛋白。PAB是一种针对胰腺泡的糖基磷脂醇的锚定蛋白，UC和CD患者中均可检测到PAB。本研究显示，UC、CD患者ANCA阳性率分别为48.65%、7.14%，疾病对照组与健康对照组分别为9.52%、0;相关研究[14]发现UC患者ANCA阳性率为50%～70%，CD患者为2%～28%、正常人为0～2.5%，且IBD组的ANCA、PAB阳性率显著高于对照组，提示ANCA抗体可用于辅助检测IBD，但研究[15]发现在免疫性疾病如自身免疫性肝病中可检测出ANCA，因此临床诊断IBD应将免疫性疾病纳入考量。本研究结果显示，UC、CD患者的PAB阳性率分别为24.32%、48.21%，略高于国外研究[16]。但值得关注的是，未行无麦胶饮食的乳糜泻患者中PAB阳性率与CD患者相近，因此，IBD患者诊断时应参考多指标共同评定[17]。

本研究显示，UC组的ANCA、ES及肠道菌群联合检测敏感度、阳性预测值均显著高于CD组，PAB检测敏感度显著低于CD组;UC组的SB、ANCA+PAB+肠道菌群联合检测阴性预测值均显著高于CD组，进一步证实ANCA在UC患者中表达更高，CD组表达更低，肠道菌群可辅助IBD诊断。测量不同对照组肠道菌群数量显示，IBD患者IL-6水平显著升高，提示炎症因子水平升高是IBD发生的前期征兆，Faubion等[18]研究与本研究相似。此外，IBD患者SB、EMB、EC、BL、BD水平显著上升，ES水平显著下降。表明肠道菌群发生紊乱，厌氧菌数量升高，梭状芽胞杆菌数量显著降低是IBD发生的标志之一。主要原因为正常生理状态下，肠道内菌群之间存在相互依存、制约机制，而肠道微生态失衡，导致拮抗病原微生物定植抗力减弱，肠黏膜屏障功能受损，肠道通透性增加，继而引发慢性炎症性疾病[19]。此外，ROC分析结果显示，IL-6、ANCA、PAB联合肠道菌群检测的敏感度、特异度分别为100.0%、93.3%，表明联合多指标检测可辅助诊断IBD，与杨文宏等[20]研究结果一致。本研究样本量较少，研究结论难免存在一定偏倚。

综上所述，IBD患者菌群结构改变显著，炎症因子表达水平显著升高，IL-6、ANCA、PAB及肠道菌群水平可辅助用于IBD诊断。

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（收稿日期：2021-09-27）