纤维胶凝蛋白3在反复上呼吸道感染患儿血清中的表达及意义

赵苗苗，魏敬芝，张 昆

(汉中市中心医院儿科，陕西 汉中 723099)

反复上呼吸道感染病情复杂并且难于治疗，是儿科常见的疾病，长期反复会导致患儿生长发育受到严重阻碍，还易并发肺炎、心力衰竭等[1-2]。目前小儿反复上呼吸道感染的具体发病机制尚未明确。免疫功能发育不完善可能是发病的主要原因，从而导致继发免疫功能下降[3]。纤维胶凝蛋白(Ficolin，FCN)是一组能够识别并结合病原相关模式分子的蛋白，在固有免疫防御中扮演着重要的角色[4-5]。纤维胶凝蛋白3(Ficolin-3，FCN3)是FCN家族的关键因子，主要分布于血浆中，可能通过激活凝集素途径参与机体免疫反应。有研究[6]通过ELISA分析发现FCN3在涂阴肺结核中表达降低，认为其可作为涂阴肺结核诊断的血清标志物。基于FCN3在涂阴肺结核中的应用，本研究观察反复上呼吸道感染患儿血清中FCN3表达水平，并探讨其与体液免疫的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 本研究入选的126例反复上呼吸道感染患儿均于2017年12月至2019年12月收治入院，设为观察组，其中年龄2～11岁，平均(7.19±2.43)岁；男性67例，女性59例。病例纳入标准：①符合反复呼吸道感染的诊断标准[5]；②患儿年龄2～12岁；③家属接受本研究内容。排除标准：①合并有心、肝、肾功能障碍，以及血液系统、免疫系统疾病；②近期使用过免疫抑制剂或激素药物；③本身存在先天性肺发育畸形、免疫缺陷疾病、支气管哮喘、结缔组织病。同时，选取同时期体检结果健康的儿童120例为对照组，其中年龄2～12岁，平均(6.57±2.11)岁；男性65例，女性55例。两组基本资料比较差异无统计学意义(均P>0.05)。本研究所有受试者家属均知情同意，并签署知情同意书，且该研究已经医院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂与仪器 人FCN3酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒(货号：EH0137)购自武汉菲恩生物科技有限公司；人IgM ELISA试剂盒(货号：JK-A-5201)、人IgA ELISA试剂盒(货号：JK-A-5203)、人IgG ELISA试剂盒(货号：JK-A-5202)购自上海晶抗生物工程有限公司。台式高速冷冻离心机(型号：贝克曼库尔特Allegra 64R)购自贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司；恒温恒湿箱(型号：LHS-250HCN)购自上海锦玟仪器设备有限公司。

1.3 研究方法

1.3.1 样本采集及测定：两组受试者均于晨起采用清洁干燥试管抽取空腹肘静脉血5 ml，于离心机下以3000 r/min离心15 min，收集上清液至EP管内，保存-20 ℃冰箱备用。采用ELISA法检测两组受试者血清中IgA、IgG、IgM、FCN3的表达水平以及观察组患儿治疗前后FCN3表达水平，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3.2 治疗方法：根据中国医师协会儿科医师分会儿童耳鼻咽喉专业委员会发布的《儿童反复上呼吸道感染临床诊治管理专家共识》[7]对患儿采用阿奇霉素治疗，根据患儿不适部位灵活运用，以减缓患儿症状。

2 结 果

2.1 两组一般资料比较 见表1。两组年龄、性别、家族史、体重指数比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组血清FCN3水平及体液免疫指标比较 见表2。观察组血清FCN3表达水平及体液免疫指标IgA、IgG、IgM水平低于对照组(均P<0.05)。

2.3 观察组患儿治疗前后血清FCN3及体液免疫指标比较 见表3。观察组患儿治疗后血清FCN3及体液免疫指标表达IgA、IgG、IgM水平高于治疗前(均P<0.05)。

表2 两组血清FCN3水平及体液免疫指标比较

表3 观察组患儿治疗前后血清FCN3及体液免疫指标比较

2.4 观察组患儿血清FCN3表达水平与体液免疫指标相关性分析 Pearson分析结果显示，FCN3表达水平与IgA、IgG、IgM呈正相关(r=0.531、0.436、0.499，均P<0.05)。

2.5 血清FCN3水平对反复上呼吸道感染发生的预测价值 见图1。ROC曲线分析显示，血清FCN3预测反复上呼吸道感染发生的曲线下面积为0.752(95%CI：0.688～0.815)，截断值为15.723 μg/ml，敏感度为96.0%，特异度为51.7%。

图1 血清FCN3预测反复上呼吸道感染发生ROC曲线

3 讨 论

反复上呼吸道感染多见于学龄前儿童，随着年龄的增长，发病率逐年降低[8-11]。上呼吸道感染易受天气、环境、自身免疫能力的影响，故易反复发作，最终形成反复呼吸道感染，甚至会出现感染中毒、重度肺炎，还可能危及患儿生命[12]。宋元玉[13]通过引入“创伤后成长”概念，认为反复呼吸道感染的患儿创伤后成长水平低，其主要因素不仅包括患儿自身情况，而且与患儿家庭观念及父母文化程度也有一定的关系。因此，对儿童反复上呼吸道感染的重视，既有关患儿本身的身心健康，也对其家庭和未来起着重要作用。

体液免疫和细胞免疫是参与机体免疫功能的重要机制。有研究[14-15]通过对反复呼吸道感染患儿机体免疫指标检测发现，IgA、IgG、IgM水平均明显比健康正常儿童低，说明反复呼吸道感染不仅与病原体直接侵害有关，而且与患儿机体免疫功能也密切相关。Munteanu等[16]认为，如果儿童时期发生长期或合并严重并发症反复感染，则应考虑存在免疫缺陷，反复感染经常累及上呼吸道，年龄在5岁内的儿童1年内可出现4～8次呼吸道感染发作。细胞免疫的改变可能与反复呼吸道感染有关。Pasternak等[17]对394例3个月至18岁的反复呼吸道感染患儿进行评估，发现65%的反复呼吸道感染患儿存在体液免疫功能紊乱，儿童的呼吸道感染通常是由IgG、IgA、IgM表达水平异常导致的。本研究结果中，反复上呼吸道感染患儿血清IgA、IgG、IgM表达均低于对照组，提示患儿可能出现免疫功能低下，易引起上呼吸道感染，需医护、家长、学校三方密切关注，从而保证患儿的身心健康。

FCN是补体途径甘露糖凝集素家族中的一种结合蛋白，也是近年来新发现的凝集素，其在抵抗病毒性相关疾病中起着极大的作用，其主要通过识别病毒表面糖蛋白激活补体途径，达到降低病毒感染的效果[18]。FCN在人类及多种动物体内均有表达，目前在人类和脊椎动物中有3类FCN，为M-Ficolin(Ficolin-1)、L-Ficolin(Ficolin-2)、H-Ficolin(Ficolin-3)，分别由FCN1、FCN2、FCN3基因编码[19]。Man-Kupisinska等[20]发现重组FCN3以浓度依赖的方式与IgG和IgM相互作用。Michalski等[21]发现FCN3通过巨噬细胞增强肺炎链球菌的吞噬作用，具有杀菌活性。Plawecki等[22]在系统性红斑狼疮患者和健康受试者间发现抗FCN3水平存在显著差异，165例系统性红斑狼疮患者中有56例检测到抗FCN3抗体呈阳性。本研究中，反复上呼吸道感染患儿血清中FCN3表达水平低于对照组，因此猜测FCN3参与反复上呼吸道感染病程并呈现低表达状态，其可能通过巨噬细胞表现出一定杀菌活性，表达降低可能是由反复感染所导致的消耗，但是否以浓度依赖的方式与体液免疫指标相关，仍需进一步研究。另外，本研究中患儿治疗后血清FCN3表达水平较治疗前提高，提示FCN3与患儿病情有关，患儿FCN3表达上调可能与所采用的抗感染治疗提高巨噬细胞免疫调节作用相关。

Pearson分析显示，FCN3表达水平与IgA、IgG、IgM均呈正相关，进一步验证FCN3表达是与体液免疫指标相关并呈正相关，但究竟是否存在相关共同机制或靶标，是否是引起与被引起的关系，仍需未来详细研究。ROC曲线分析显示，血清中FCN3预测反复上呼吸道感染发生的曲线下面积为0.752，截断值为15.723 μg/ml，敏感度为96.0%，说明FCN3水平对于预测反复上呼吸道感染有一定的作用，可以作为预测反复上呼吸道感染发生的敏感指标，当FCN3表达低于15.723 μg/ml时，患儿可能发生反复上呼吸道感染。但血清FCN3水平预测反复上呼吸道感染发生的特异性只有51.7%，相对较低，因此在临床应用中可联合其他常见特异性较高的指标，以提高特异性，降低误诊率。

综上所述，反复上呼吸道感染患儿血清中FCN3低表达，且与IgA、IgG、IgM的表达水平呈正相关，是预测反复上呼吸道感染较为良好的指标。但本研究仍存在不足，如样本量具有局限性，未来可经扩大研究年份及研究区域进行改善；也未研究反复上呼吸道感染患儿相关炎性因子表达情况，未来的研究可针对这一缺陷进行补充。