FQ-PCR 联合ELISA 在乙型肝炎检测中的应用价值

林爽

乙型肝炎主要表现为肝脏炎性病变,属传染性病症,是多器官传染性疾病［1］。该病发病与季节无关,常为散发,目前是世界性流行类疾病［2］。临床主要表现为肝区疼痛、上腹部不适、食欲减退、恶心等。随着乙型肝炎逐步发展,部分患者会进展为肝硬化、原发性肝细胞癌、肝衰竭,严重影响患者生活质量和生命安全。研究显示,把握检测乙型肝炎最佳时机,掌握肝炎治疗进展、病毒复制情况对于该病临床治疗具有重要作用［3］。传统检测多采用ELISA 法诊断乙型肝炎病毒(HBV)感染,通过血清检测评价特异性抗体、抗原在血清内状况,来判断机体感染情况。随着医疗技术持续发展以及生物学技术不断进步,FQ-PCR 技术在临床疾病诊断中得到广泛应用,尤其在乙型肝炎诊断中,可有效显示HBV 活性和复制性情况,为临床治疗和预后评价做出科学指导,但由于其无法准确判断乙型肝炎病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)感染状态,单独应用存在一定缺陷［4］。基于此,本次研究本院对收治的部分乙型肝炎患者采用FQ-PCR 联合ELISA 检测,结果显示,与单一检测手段相比,联合检测准确率更高。具体情况报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在本院2020 年4 月～2021 年3 月收治的乙型肝炎患者中选取180 例纳入本次研究,根据检测方法不同分为对照1 组(59 例)、对照2 组(59 例)及观察组(62 例)。观察组,男39 例,女23 例；年龄20～80 岁,平均年龄(49.57±10.24)岁。对照1 组,男31 例,女28 例；年龄21～79 岁,平均年龄(49.04±10.46)岁。对照2 组,男32 例,女27 例；年龄20～81 岁,平均年龄(50.21±10.35)岁。三组患者的一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本院伦理委员会审核批准了本次研究。纳入标准：180 例纳入者均知晓本次研究,并签署了同意书；均符合乙型肝炎相关诊断标准。排除标准：精神疾病者；恶性肿瘤者；血液系统存在疾病者；患相关性代谢系统疾病。

1.2 方法 清晨取患者空腹静脉血,经3000 r/min 离心10 min 后,对血清实施分离,置于4 ℃条件下保存备用。对照1 组行FQ-PCR 检测,对照2 组行ELISA检测,观察组行FQ-PCR+ELISA 检测。

ELISA 检测：检测HBV 血清标注物,全自动酶标仪选择上海科华生物工程股份有限公司(型号为ST-360),ELISA 试剂源自上海科化生物股份有限公司,所需试剂均源于同一生产公司,确保无菌操作,对乙型肝炎各项指标实施检测,包括乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎E 抗体(HBeAb)、乙型肝炎E 抗原(HBeAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。

FQ-PCR 检测：应用美国ABI 公司的荧光定量分析仪(型号为ABI7500Fast)展开检测,FQ-PCR 诊断试剂盒源自中山大学达安基金股份有限公司。对HBVDNA 实施定量检测,以试剂操作说明书为依据执行整体操作。HBV-DNA>10×102IU/ml,即为阳性。

1.3 观察指标 比较三组诊断结果。

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示,采用t 检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P<0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

观察组诊断乙型肝炎的准确率为96.77%,对照1 组诊断乙型肝炎的准确率为84.75%,对照2 组诊断乙型肝炎的准确率为81.36%。观察组诊断乙型肝炎的准确率明显高于对照1 组与对照2 组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照1 组与对照2 组诊断乙型肝炎的准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 三组诊断乙型肝炎的准确率比较［n(%)］

3 讨论

在临床上,乙型肝炎属于病毒性肝炎,传染性较强,主要病毒为HBV。在我国约9300 万人携带HBV,HBV 长期在机体内潜伏,部分携带者因体内HBV 被激活而致病［5］。该症的特点在于传播途径广、传染率高、病情迁延不愈、起病缓慢等,多数患者早期症状均不明显,发现时疾病已发展至晚期,需接受持续治疗,患者身体痛苦增加,经济负担加重。早期接受及时、高效的诊断,并施以有效、正确的治疗,可避免病情持续恶化,能有效延长患者的生存时间［6］。但因治疗时大量应用抗病毒药物,显著增加了HBV 变异株的数量,造成传统检测HBV 血清学的难度增加,检测可重复性、准确性、敏感性缺陷较大［7-10］。

ELISA 为HBV 感染传统检测手段,其优势在于价格低、检测时间短、特异度与灵敏度较高、方法简单等［11-13］,通过对血清内特异性抗原、抗体实施有效检测来判断是否感染HBV,也可反映HBV 免疫应答状态。但检测结果易受到多种因素影响,如标本保存、血清分离、加样有无气泡、溅出、孵育时间、方式、洗板情况等。该项检测还需应用特殊设备,且难以对病毒感染程度、数量实施定量分析,且在急诊初筛、门诊、无偿献血中并不适用,难以准确反映HBV 传染风险、感染复制情况。

FQ-PCR 法为DNA 探针杂交、PCR 技术的融合,可经检测闭管、荧光技术直接对PCR 过程中荧光信号的变化实施探测,能对HBV 感染程度实施定性、定量分析,在选择治疗方案、判断预后效果中具有重要指导意义。FQ-PCR 可以将HBV-DNA 水平定量、可靠、真实、准确的反映出来。该手段可直接检测HBV-DNA 的水平,将HBV 传染性、复制水平、存活、活动性直观体现出来。但HBV-DNA 难以判断其感染状态。所以,临床部分学者提出实施FQ-PCR 联合ELISA 检测。

许娇［9］研究显示,与单一检测手段相比,FQPCR 联合ELISA 检测的价值更高。本次研究结果显示：观察组诊断乙型肝炎的准确率为96.77%,对照1 组诊断乙型肝炎的准确率为84.75%,对照2 组诊断乙型肝炎的准确率为81.36%。观察组诊断乙型肝炎的准确率明显高于对照1 组与对照2 组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照1 组与对照2 组诊断乙型肝炎的准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。提示相较于单一检测,联合检测的准确性更高,与相关研究［10］结果基本相符,进一步证实了本文可信度。

综上所述,实施FQ-PCR 联合ELISA 检测,在早期诊断乙型肝炎中作用显著,可使诊断准确率提高,值得应用。