高效液相色谱-荧光检测法对动物源性食品中氟喹诺酮类药物残留的检测

袁丽 丁磊 杨希 丁建兰 欧阳倩

摘 要：为了检测动物源性食品中氟喹诺酮类药物（沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星）的残留量，本文对高效液相色谱-荧光检测法进行了优化。样品经无水硫酸钠除水，酸化乙腈提取，乙腈饱和的正己烷脱脂，采用0.05 mol/L

的磷酸溶液（三乙胺调pH至2.4）-乙腈流动相进行复溶。结果表明，3种氟喹诺酮类药物在5～300 ng/mL呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.999;在4～80 μg/kg的加标浓度下，回收率为62.80%～94.45%，相对标准偏差为0.29%～5.30%。表明方法适用于动物源性食品中氟喹诺酮类药物残留量的检测。

关键词：动物源性食品;氟喹诺酮类药物;高效液相色谱-荧光检测法

Determination of Fluoroquinolones Residues in Animal-Derived Products by High Performance Liquid Chromatography-Fluorescence

YUAN Li1， DING Lei2， YANG Xi1， DING Jianlan1， OUYANG Qian1

（1.Yingtan Institute of Tesing and Certification， Yingtan 335000， China; 2.Law Enforcement and Inspection Bureau of the Yingtan Administration for Market Supervision， Yingtan 335000， China）

Abstract： In order to detect the residues of fluoroquinolones including sarafloxacin， ciprofloxacin and enrofloxacin in animal-derived products ， the HPLC-FLD method was optimized. Samples were dewatered by anhydrous sodium sulfate， extracted with acidified acetonitrile， degreased with acetonitrile-saturated n-hexane， and reconstituted with 0.05 mol/L phosphoric acid solution （adjusted to pH=2.4 with triethylamine）-acetonitrile mobile phase. The results showed good linearities over the range of 5～300 ng/mL for three fluoroquinolones with good correlation coefficients （r2≥0.999）. The recoveries were 62.80%～94.45% with relativestandard deviations in the range of 0.29%～5.30% at 4～80 μg/kg spiked concentration. This method was suitable for the determination of fluoroquinolones residues in animal derived foods.

Keywords： animal-derived products; fluoroquinolones; high performance liquid chromatography-fluorescence detection method

氟喹諾酮（Fluoroquinolones，FQS）属于喹诺酮类，又称吡啶酮酸类，是一种化学合成的新型抗菌药，因其具有抗菌活性强、抗菌谱广、蛋白结合率低、高效、低毒、组织穿透力强、半衰期较长、用药次数少及价格低廉等特点，被广泛应用于水产和禽畜感染性疾病及临床上细菌感染性疾病的防治[1-5]。但由于氟喹诺酮类药物在动物体内代谢周期长以及养殖人员对其的不规范使用使其在动物源性食品中的残留超标。该药物残留通过食物链进入人体，严重危害人体健康。因此开展动物源性食品中氟喹诺酮类药物残留的检测。

目前，各县（或市）级检验检测机构用于检测动物源性食品中的氟喹诺酮类药物的残留量的方法主要有高效液色谱相法和液相色谱-质谱联用法。本文参照《水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量的测定 液相色谱法》（农业部783号公告-2-2006），通过改变色谱条件、除水剂用量的优化，为检验检测机构提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

乙腈（色谱纯，默克股份两合公司）;正己烷（色谱纯，默克股份两合公司）;盐酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）;无水硫酸钠（分析纯，西陇科学股份有限公司）;磷酸（分析纯，西陇科学股份有限公司）。

标准品：盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星（由江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所提供，100 μg/mL）。

1.2 仪器与设备

UltiMate3000高效液相色谱仪（配荧光检测器，赛默飞世尔科技中国有限公司）;BSA822-CW电子天平（赛多利斯科学仪器上海有限公司）;XW-80A涡旋振荡混合器（上海精科实业有限公司）;HY-4B调速多用振荡器（常州郎越仪器制造有限公司）;TG16-WS高速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）;RE-5299旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）;0.45 μm滤膜。

1.3 试验方法

参照标准《水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量的测定 液相色谱法》（农业部783号公告—2-2006）。

1.3.1 色谱条件

C18色谱柱（50 mm×46 mm，5 μm）;流动相：0.05 mol/L的磷酸溶液（三乙胺调pH至2.4）∶乙腈=82∶18（V∶V）;流速：0.8 mL/min;柱温：40 ℃;进样量：20 μL;荧光检测器：激发波长280 nm，发射波长450 nm。

1.3.2 样品处理

（1）提取。准确称取样品5 g于50 mL离心管中，加入酸化乙腈20 mL后迅速涡旋，涡旋2 min，再加入无水硫酸钠5 g，经摇床振荡20 min，4 000 r/min离心5 min，取上清液。残渣中加入酸化乙腈20 mL，重复上述操作一次，合并上清液。

（2）净化与浓缩。将上清液置于分液漏斗中，加入乙腈飽和的正己烷25 mL，振荡1 min，充分静置，取下层乙腈层移入鸡心瓶，40 ℃旋转蒸发至干。用流动相2.0 mL溶解残渣，经0.45 μm微孔膜过滤，滤液经高效液相色谱仪测定。

1.3.3 标准工作曲线的绘制

分别精密吸取标准品盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星于10 mL容量瓶中，用流动性逐级稀释成浓度为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL和300 ng/mL的标准系列工作溶液。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

农业部783号公告-2-2006中采用的流动相四丁基溴化铵保存期短且需冷藏保存，本次试验采用农业部1025号公告-14-2008中的乙腈∶磷酸溶液为流动相，流动相易保存、易配制，且3种氟喹诺酮类化合物的分离效果好、峰形好、响应值高，色谱图见图1。

2.2 提取条件的优化

无水硫酸钠是常用的除水剂，农业部783号公告-2-2006中加入30 g的无水硫酸钠虽然能起到很好的除水作用，但大量的无水硫酸钠会包裹在被测样品表面，使得乙腈提取液无法有效提取样品中的待测物。本试验过程中比较了无水硫酸钠不同用量的影响，分别加入3 g、5 g、10 g无水硫酸钠，试验结果表明无水硫酸钠用量为5 g时，3种氟喹诺酮类化合物的回收率达到最高。

2.3 标准曲线和检出限

以标准工作溶液浓度为横坐标、各化合物色谱峰面积为纵坐标绘制曲线，得到3种化合物的标准曲线;以3倍信噪比时对应的浓度得到化合物的检出限。

从表1可见，3种化合物的线性相关系数均大于0.999，表明在5～300 ng/mL浓度范围内3种化合物均呈现良好的线性关系;3种化合物的仪器检出限为0.004～0.010 μg/kg。

2.4 精密度试验

将浓度为50 ng/mL的盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星混合标准溶液分别连续进样8次，记录其峰面积，精密度用峰面积变化的RSD表示。如表2所示，盐酸沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星的RSD分别为0.27%、0.29%、0.30%，均小于2%，表明精密度良好。

2.5 加标试验

按试验方法对空白鱼肉、猪肉样品进行加标回收试验，3种氟喹诺酮类药物的加标量分别为4 μg/kg、40 μg/kg、80 μg/kg，计算回收率和测定值的相对标准偏差，结果见表3。鱼肉和猪肉中3种氟喹诺酮类药物的回收率是62.80%～94.45%，回收率均能达到标准要求，相对偏差为0.29%～5.30%，精密度较好。

3 结论

本试验以农业部783号公告-2-2006为基准，对检测鱼肉、猪肉中氟喹诺酮类化合物残留量的检测方法进行优化，结果表明鱼肉和猪肉中3种氟喹诺酮类药物的回收率均能达到标准要求，能够为检测动物源性食品中的氟喹诺酮类药物的残留量提供参考。

参考文献

[1]兰承兴，田雪莲，周开拓，等.优化高效液相色谱法对水产品中4种氟喹诺酮类药物残留的检测[J].贵州畜牧兽医，2018，42（2）：25-29.

[2]李佩佩，郭远明，陈雪昌，等.色谱法检测动物源食品中喹诺酮类药物残留研究进展[J].食品科学，2013，34（3）：

303-307.

[3]田茂军，彭敬东，张晶.分散液液微萃取-高效液相色谱法测定蔬菜中氟喹诺酮类药物残留[J].西南师范大学学报（自然科学版），2016，41（1）：40-44.

[4]姜兴华，杨韶芸，沈荣明.高效液相色谱法测定鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物的含量[J].食品安全质量检测学报，2016，7（12）：4978-4981.

[5]中华人民共和国农业部.水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量的测定 液相色谱法：农业部783号公告—2—2006[EB/OL].（2006-12-19）[2022-03-02].http：//down.foodmate.net/wap/index.php？moduleid=23&itemid=112073.