血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合 Hs-cTnI在急性心肌梗死患者中的表达及其临床意义

麦壮艳 林应源 万树莉 王婷婷

急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）是一种由心肌缺血性坏死造成的急性致命性疾病，尽管过去10年预后有了显著改善，但其死亡率仍居高不下[1]。对AMI进行早期诊断，并及时采取有效的救治措施，是降低死亡率并改善预后的关键。高敏心肌肌钙蛋白I（high sensitivity cardiac troponin I,Hs-cT－nI）检测能早期提示微小心肌损伤，是当前诊断AMI的首选实验室指标[2]。越来越多的研究表明，环状RNA（circular RNA,CircRNA）是一种内源性转录物，具有较高的稳定性和组织特异性，其异常表达与心血管疾病的发病机制高度关联[3-4]。近期研究发现，CircRNA_0050908及CircRNA_0001879在心血管疾病患者中存在异常表达，对心血管疾病的发生、发展具有重要的调控作用，有望成为心血管疾病诊断和治疗干预的理想候选指标[5-6]。目前，关于CircRNA_0050908及CircRNA_0001879对AMI的诊断价值少有文献报道。本研究通过检测AMI患者血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平，分析其联合传统心肌标志物Hs-cTnI对 AMI诊断及预测心血管不良事件的价值，以期为AMI的诊治提供帮助。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2018年1月至2021年6月海南西部中心医院收治的AMI患者108例作为研究对象（AMI组），其中男 73例，女 35例；年龄 35～81（57.30±11.82）岁。纳入标准：（1）符合《欧洲心脏病学会急性心肌梗死管理指南（2017）》[7]中的诊断标准；（2）年龄≥18岁，发病至入院时间＜8 h。排除标准：（1）已接受过冠状动脉旁路移植术、静脉溶栓治疗；（2）存在恶性肿瘤、血液病及脑血管疾病。随访所有患者在确诊30 d内再次发生心血管不良事件的情况，AMI患者再次发生心血管不良事件18例（心源性死亡4例，再次心肌梗死4例，心绞痛7例，心力衰竭3例）。另选取健康体检者50名作为对照组，其中男32例，女性18例；年龄36～80（58.10±9.62）岁。两组研究对象性别、年龄、基础疾病史、血压、TC、TG、LDL-C及 HDL-C比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。本研究经医院医学伦理委员会审批通过，所有研究对象均知情同意。

表1 两组研究对象临床资料比较

1.2 方法

1.2.1 血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平检测 采集所有患者入院即刻和健康体检者体检时的静脉血各3 ml，3 000 r/min离心10 min，分离血清。取血清400 μl采用Trizol试剂盒提取血清总RNA，使用逆转录试剂盒进行逆转录，获取反转录DNA（PCR相关试剂盒均购自上海生物工程有限公司）。采用RT-qPCR法检测血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879 水平，PCR 总反应体系为 20 μl：1 μl引物及探针 Mix（20×），10 μl TaqMan 通用混合物溶液（2×），1.33 μl反转录脱氧核糖核酸，7.67 μl双蒸水。扩增反应条件为：95℃预变性5 min 1个循环，95℃变性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸60 s。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参基因，采用 2-ΔΔCt法计算结果。

1.2.2 血清Hs-cTnI水平检测 另取上述血清200 μl，使用DXI 800全自动化学发光分析仪（美国贝克曼库尔特公司）及配套试剂检测Hs-cTnI水平。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0统计软件。计量资料以 表示，方差齐时，组间比较采用两独立样本t检验；方差不齐时，组间比较采用非参数检验。ROC曲线评估CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合HscTnI诊断AMI及预测心血管不良事件的效能。采用Pearson相关分析 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平与Hs-cTnI水平的相关性。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平比较 AMI组患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表2。

表2 两组研究对象血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平比较

2.2 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合Hs-cTnI诊断AMI的效能 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI诊断AMI的最佳截断值分别为1.83、1.50、0.91 μg/L，3项联合诊断AMI的AUC明显高于单项CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及 Hs-cTnI检测，其灵敏度为0.982，特异度为0.913，见表3和图1（插页）。

表3 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合Hs-cTnI诊断AMI的效能

图1 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合 Hs-cTnI诊断AMI的ROC曲线

2.3 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合Hs-cTnI预测心血管不良事件的效能 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI预测心血管不良事件的最佳截断值分别为 1.95、1.61、0.86 μg/L，3 项联合预测心血管不良事件的AUC明显高于单项CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及 Hs-cTnI检测，其灵敏度为0.943，特异度为0.875，见表4和图2（插页）。

表4 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合Hs-cTnI预测心血管不良事件的效能

图2 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879联合Hs-cTnI预测心血管不良事件的ROC曲线

2.4 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平与Hs-cTnI水平的相关性分析 Pearson相关分析显示，AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平与Hs-cTnI水平均呈正相关（r=0.830和0.751，均 P＜0.01），见图 3。

图3 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平与Hs-cTnI水平的散点图

3 讨论

AMI是一种心肌急性缺血性坏死的常见急危重症，在过去的几十年中，AMI已成为一个重要的死亡原因，在全球范围内AMI的发病率逐年上升，严重威胁着人类的生命健康[8]。早发现、早治疗是当前AMI防治的重中之重。生物标志物在AMI早期诊断和治疗中起着重要的作用。因而，寻找一种更加有效的AMI诊疗标志物组合对患者的早期救治具有极大的帮助。CircRNA是一类呈封闭环状结构的特殊非编码RNA，参与调节心肌细胞凋亡及心肌损伤，在心血管疾病的诊断及治疗中起到很大的指导作用，被认为是临床治疗AMI的新靶点[9]。国内外研究证实，CircRNA在心血管疾病患者血液样本中异常表达，其参与多种心血管疾病的发生、发展，可能是一种潜在的心血管疾病诊断和治疗的理想候选基因生物标志物[10-11]。Hs-cTnI作为AMI诊断的金指标，已在临床上得到广泛认可和共识，其对心肌损伤的诊断具有重大的帮助[12]。

本研究 AMI组患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平均明显高于对照组，提示血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及HscTnI水平高表达可能参与AMI的发病过程。这可能是CircRNA_0050908和CircRNA_0001879作为重要的炎症调控因子，其过度表达促进了冠状动脉粥样硬化的发生，使心肌缺血、缺氧从而引起心肌梗死，在AMI的发生及发展中起着重要作用。Lau等[13]研究指出，与对照组相比，AMI患者血清Hs-cTnI水平明显升高，对AMI诊断具有一定价值。Gong等[14]研究认为，CircRNA在AMI的发生、调控和病理生理作用中发挥了重要的作用，对AMI的诊断和预后具有重要的生物学意义，是AMI治疗的潜在靶点。由此推测CircRNA_0050908、CircRNA_0001879 在 AMI发病中发挥了巨大的潜力。

本研究ROC曲线显示，CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI对 AMI诊断及预测心血管不良事件的AUC均较高，3项联合的AUC最大，均＞0.925。相关分析也显示，AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平与Hs-cTnI水平均呈正相关。说明 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879诊断 AMI及预测心血管不良事件有很大的潜力，两者联合HscTnI诊断AMI及预测心血管不良事件的效能最高。研究表明，Hs-cTnI诊断AMI的准确性较高，在早期排查AMI中也有较高的灵敏度，具有较好的临床实用性[15]。另有研究认为，CircRNA在AMI中起着至关重要的调节作用，是AMI的潜在诊断标志物和预后标志物，为AMI的靶向治疗提供了很好的指导作用[16]。由此可见，早期检测CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平对早期发现AMI有很大的帮助。

综上所述，AMI患者血清 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879表达水平明显升高，联合Hs-cTnI检测有助于提高 AMI诊断及心血管不良事件预测的准确性。通过 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879与Hs-cTnI的相互结合，很好地弥补了Hs-cTnI单一指标对AMI诊断存在的局限性，为AMI的早诊断、早救治提供重要的依据。