卵巢浆液性肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达及意义

张 豪 祝 参 余 筱

卵巢浆液性肿瘤是常见的卵巢肿瘤，多为交界性，但其在进展过程中存在发生不良结局的风险[1-2]。浆液性肿瘤的发生和体内与细胞增殖、凋亡相关的基因及蛋白的表达失衡有关。沉默信息调节因子(SIRT1)能够通过影响到肿瘤细胞的凋亡，加剧癌细胞的异常转录，最终促进卵巢肿瘤的发生[3]；RAS相关蛋白(Rap1)，能够通过影响到肿瘤细胞的浸润和粘附能力，促进癌细胞生物学特征的改变[4]；伏隔核因子1(NAC1)能够通过影响到核因子的激活程度，加剧核基因诱导的癌细胞内信号通路的上调，从而干预到肿瘤细胞的增殖[5]。为进一步探讨卵巢浆液性肿瘤与上述细胞因子的关系，本文就卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的表达情况进行研究，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2019年2月至2020年8月在我院收治的卵巢浆液性肿瘤患者的肿瘤组织标本100份为卵巢浆液性肿瘤组，选取同期在我院收治的卵巢良性肿瘤患者的肿瘤组织标本100份为卵巢良性肿瘤组。纳入标准：①患者年龄>18周岁；②卵巢浆液性肿瘤或良性肿瘤经病理诊断明确；③无其他严重基础疾病者。排除标准：①合并生殖系统疾病；②近期接受手术治疗者。对照组年龄28～60岁，平均(40.27±5.23)岁；观察组年龄30～62岁，平均(40.25±4.97)岁。2组的年龄无显著差异(P>0.05)，具有可比性。研究经伦理委员会评审通过，符合医学伦理学要求。

1.2 研究方法

组织标本蜡块切片，脱水操作后采用3%H2O2室温条件下孵育20 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，磷酸盐缓冲液稀释后的山羊血清封闭抗体5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗(购自赛默飞世尔中国 浓度：1∶1000)5 ml，37℃孵育2 h，或者放置4℃冰箱过夜孵育，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入生物素荧光标记的二抗(购自赛默飞世尔中国 浓度：1∶2000)3 ml，37℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，增强型HRP-DAB底物显色试剂盒 (PA110)显色，自来水冲洗，复染，封片。阳性细胞判定：细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性，黄色或棕色颗粒以及阳性细胞所占百分比<10%为表达弱阳性，≥10%～50%为表达中等阳性，>50%为强阳性。

1.3 观察指标

观察2组患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达情况，比较不同临床病理特征卵巢浆液性肿瘤患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达的差异，分析卵巢浆液性肿瘤患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达的影响因素。

1.4 统计学处理

采用SPSS 11.5统计学软件对数据分析。计量资料用均数±标准差表示，2组间比较采用t检验，计数资料比较采用卡方检验，Logistic逐步回归分析卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达的影响因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达情况比较

表1显示，卵巢浆液性肿瘤组患者的肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达率分别为65.00%、60.00%、55.00%，高于卵巢良性肿瘤组的6.00%、20.00%、8.00%(P<0.05)。

表1 2组患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白水平的比较(例，%)

2.2 不同临床病理特征卵巢浆液性肿瘤患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达情况比较

表2显示，Ⅲ+Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移的患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达率较高(P<0.05)，不同年龄患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 不同临床病理特征卵巢浆液性肿瘤患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达情况比较(例，%)

2.3 卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达的影响因素

将单因素分析有意义的因素作为自变量并进行赋值，临床分期：Ⅰ+Ⅱ期=0、Ⅲ+Ⅳ期=1，组织学分级：高分化=0、中、低分化=1，淋巴结转移：无=0、有=1。分别将肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达情况作为因变量进行logistic逐步回归分析，结果显示，临床分期是卵巢浆液性肿瘤患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达的独立影响因素。见表3。

表3 卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达的影响因素

3 讨论

在不同类型的卵巢肿瘤患者中，卵巢浆液性肿瘤的发病率较高，同时卵巢浆液性肿瘤的发病呈现出了明显的年轻化趋势。多次流产病史、月经推迟绝经等群体中卵巢浆液性肿瘤的发生风险会进一步上升[6]。流行病学随访发现，卵巢浆液性肿瘤患者的总体生存时间较短，患者的病情进展较快，卵巢浆液性肿瘤发生恶性或者肿瘤复发转移的风险可随着时间的延长而显著上升[7-8]。对卵巢肿瘤的临床病理特征的评估具有一定的意义，其能够在卵巢肿瘤患者的临床预后的随访或者整体性病情的评估中发挥作用。虽然已有的研究认为CA125等肿瘤蛋白与卵巢肿瘤的病情进展密切相关，认为CA125等指标能够评估卵巢肿瘤的临床病理特征情况，但CA125等指标评估卵巢浆液性肿瘤的局限性仍然存在，其对于卵巢浆液性肿瘤评估的特异程度仍然不足[9]。

SIRT1是沉默调控相关因子，其能够通过结合癌细胞转录上游因子的激活程度，干预到肿瘤细胞转录启动子的上调水平，从而影响到肿瘤细胞的增殖[10-11]。SIRT1还能够影响到肿瘤细胞内不同信号通路的激活程度，提高癌细胞内P16/AKT的活跃程度，最终影响到肿瘤细胞的凋亡抑制过程[12]。AC1是核调控修饰基因，其对于卵巢癌细胞内癌基因的调控修饰作用，能够提高癌基因的翻译水平，增加肿瘤细胞的扩增风险；Rap1是RAS蛋白家族成员，其对于下游RAS蛋白的调控作用，能够提高肿瘤细胞的浸润深度[13]。

本次研究通过免疫组化法分析肿瘤组织中SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达情况，发现在卵巢浆液性肿瘤患者病灶组织中，SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组(P<0.05)，表明卵巢组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的高阳性表达会增加卵巢浆液性肿瘤发生风险。不同肿瘤相关蛋白的改变，能够在癌基因激活、肿瘤细胞形态学改变及癌细胞内信号通路激活方面发挥作用，影响到卵巢肿瘤的早期发生和中晚期病情进展。有少部分研究者也发现，在卵巢癌患者中，SIRT蛋白的阳性表达率可随着卵巢癌患者临床预后的恶化而显著上升，卵巢癌远期复发转移或者病死患者，SIRT蛋白的阳性表达率显著升高[14]。在临床分期为Ⅲ+Ⅳ期、组织学分级不佳、卵巢癌细胞低分化、有淋巴结转移的卵巢浆液性肿瘤患者中，肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白的阳性表达率较高，表明SIRT1、NAC1、Rap1的表达与卵巢肿瘤患者的不同临床病理特征均具有一定的关系。SIRT1对于卵泡上皮细胞异常病变的影响，能够提高卵泡上皮细胞的浸润深度，促进癌细胞粘附盆腔内淋巴结组织；NAC1对于卵巢肿瘤临床病理特征的影响，主要在于其具有核基因的错配修复能力，可以影响到肿瘤的生物学特征；Rap1对于卵巢浆液性肿瘤的影响，主要在于其对于MAPK信号通路的调控有关，最终加剧肿瘤细胞排列极性的紊乱和组织学分级的恶化[15-16]。危险因素分析也可见，临床分期是卵巢浆液性肿瘤患者SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达的独立影响的因素。

综上所述，卵巢浆液性肿瘤患者肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白阳性表达率较高，且与临床分期密切相关。卵巢浆液性肿瘤组织SIRT1、NAC1、Rap1蛋白表达与生存预后的关系仍有待进一步的研究加以证实。