老年科鲍曼不动杆菌耐药性及外排泵基因研究

侯盼飞, 余九峰, 周素芹

(南京医科大学康达学院附属涟水人民医院, 1. 检验科, 2. 药剂科, 江苏 涟水, 223400)

鲍曼不动杆菌是一种需氧、非发酵乳糖的革兰阴性菌，为条件致病菌，易定植在人的皮肤、呼吸道及医院环境中[1]。老年科患者因患有基础疾病、长期服用抗菌药物、免疫功能低下等问题，是医院感染的高发人群[2]。近年来，鲍曼不动杆菌的耐药率呈现上升趋势，因而探讨老年科患者鲍曼不动杆菌的耐药性及耐药机制具有重要意义。多种菌株耐药与外排泵系统过度表达有关。本研究分析老年科临床分离鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物的敏感性及外排泵基因携带情况，以期为医院感染防控和临床合理用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 菌株: 临床菌株为2020年1—12月南京医科大学康达学院附属涟水人民医院老年科分离的鲍曼不动杆菌85株; 质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

1.1.2 材料: 药敏纸片为OXOID公司生产，培养基购自安图生物工程股份有限公司，聚合酶链反应(PCR)试剂盒购自大连宝生物有限公司。

1.1.3 仪器: Vitek2 compact细菌鉴定仪购自生物梅里埃公司, SLAN-96P荧光定量PCR扩增仪购自上海宏石医疗科技有限公司，凝胶成像仪购自北京六一生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 药物敏感性检测: 用纸片扩散法检测85株鲍曼不动杆菌对临床常用的15种抗菌药物的敏感性。具体方法及结果解释标准参照临床实验室标准化协会(CLSI)的抗菌药物敏感性试验性能标准(2020年版, M100-S30)[3]。

1.2.2 外排泵基因检测: 采用煮沸法提取基因组DNA。adeB-P1引物序列(5′-3′)为TTCGGTATGGTGCTTGCCAT, P2为TCTTGGCTGCCATTGCCATA, 产物916 bp;adeG-P1引物序列(5′-3′)为TGTTCGGGATGGTACTTGCC, P2为CAGGAACGAAACCACCTGGA, 产物528 bp;adeJ-P1引物序列(5′-3′)为TGGTGTTAGCCGCATGCTTA, P2为CCAATACCCGCGTTTTGACC, 产物291 bp。采用25 μL反应体系。PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳观察特异性扩增条带，挑选部分阳性产物进行测序。

1.3 统计学分析

采用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计数资料采用百分率表示，采用卡方检验对多重耐药菌和非多重耐药菌的基因阳性率进行比较,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 药敏试验结果

药敏试验结果显示，鲍曼不动杆菌对多黏菌素B的敏感率为100.0%, 对米诺环素(29.4%)、头孢哌酮-舒巴坦(35.3%)、阿米卡星(38.8%)和庆大霉素(41.2%)耐药率较低，对其他检测药物的耐药率均超过50.0%, 见表1。本研究共检出多重耐药菌49株，占57.6%。

2.2 外排泵基因检测

依据药敏试验结果，将85株菌株分为多重耐药组49株和非多重耐药组36株。49株多重耐药菌中,adeB、adeG和adeJ外排泵基因的阳性率分别为73.5%、77.6%和71.4%, 非多重耐药菌对应基因阳性率分别为41.7%、52.8%和52.8%, 2组间差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。将测序结果与GenBank数据中的基因序列比对，同源性为99%。部分代表菌株adeB、adeG、adeJ基因电泳图见图1。

M: 标准分子量参照物; 1～3: adeB; 4～6: adeJ; 7: 阴性对照; 8～10: adeG。图1 adeB、adeG和adeJ基因PCR产物电泳图

3 讨 论

鲍曼不动杆菌是一种重要的医院感染病原菌，已被发现广泛分布于重症监护病房、呼吸科、神经外科等科室，但目前针对老年科鲍曼不动杆菌的相关研究[4]尚较少见。陈亚男等[5]对老年患者呼吸机相关性肺炎合并耐药菌感染情况进行分析，发现鲍曼不动杆菌的检出率最高，达51.15%。全国细菌耐药监测网[6]监测结果显示，近年来老年患者鲍曼不动杆菌检出率均居前4位，且该菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均波动在60%左右。本研究结果显示，南京医科大学康达学院附属涟水人民医院老年科临床分离的鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为54.1%和55.3%, 除头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、庆大霉素、米诺环素外，鲍曼不动杆菌对其他检测药物的耐药率均高于50.0%, 与全国细菌耐药监测网监测结果[6-7]基本一致。本研究中，所有鲍曼不动杆菌均对多黏菌素B敏感，但该药物毒副作用大，故很少被应用于老年科患者中[8]。本研究还发现，鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素的敏感性也较高，故阿米卡星、庆大霉素可作为替代用药。

相关研究[9]表明，鲍曼不动杆菌一旦对碳青霉烯类抗生素耐药，常表现为多重耐药甚至泛耐药。已有研究[10-11]证实，外排泵过表达是导致鲍曼不动杆菌耐药的重要机制，目前在鲍曼不动杆菌中发现的外排泵主要包括AdeABC、AdeIJK和AdeFGH等。本研究依据药敏试验结果将85株鲍曼不动杆菌分为多重耐药组和非多重耐药组并进行外排泵基因检测，结果显示，多重耐药组菌株的adeB、adeJ、adeG基因阳性率均高于非多重耐药组，差异有统计学意义(P<0.05)。由此表明, AdeABC、AdeIJK和AdeFGH外排泵均是导致鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因。但外排泵种类繁多，机制复杂，且多种外排泵之间还可能存在相互作用[12], 未来有待进一步深入研究。

综上所述，老年科鲍曼不动杆菌耐药形势较严峻，其多重耐药与携带adeB、adeG和adeJ外排泵基因密切有关。进一步探索外排泵的作用机制，开发有效的外排泵抑制剂，研发新的抗菌药物剂型，或可为多重耐药菌的治疗提供新的方向。