■王 曼 何元庆 李 敏 熊兆龙 何 健*
(1.西南科技大学生命科学与工程学院,四川 绵阳 621010;2.四川铁骑力士集团冯光德实验室,四川 绵阳 621006)
饲料禁抗给畜牧行业造成很大压力,同时非洲猪瘟疫情的原因造成了猪肉产出较低,但消费者对蛋白需求却逐步增加[1]。如何提高动物的存活率成为了一个热门话题。中草药具有营养和保健的双重功效,许多中草药,如补益药、清热解毒药、活血祛瘀药等,不仅能够提高机体的免疫能力,还对病原微生物有抑制和杀灭作用[2]。近年来,大量的研究发现中草药具有治疗、预防畜禽疾病的作用[3]。但在畜禽上,现有的研究大多是集中在单种中草药的使用上,研究结果依然存在争议[4-5]。传统中药应用均是以复方形式进行治疗,很少采用单一药材治疗疾病[6]。中药中一些经典的扶正、补虚益气的中药配方如复方柴术散,苍茂散,玉屏风散等,已广泛运用。其中,玉屏风复方(黄芪、白术和防风组成)被大量运用到养殖过程中。中医认为黄芪味甘,性微温,入脾,肺经,能够补中益气,固表利水,托脓毒和生肌的功效[7]。白术味苦、甘,性温,归脾、胃经具有健脾益气,燥湿利水,止汗安胎的功效[8]。防风味辛、微甘,性温,归肝、膀胱、脾经,具有祛风、解表、胜湿、止痉之功效[9]。玉屏风散固表,止汗,益气,增强动物免疫力,提高免疫系统组织细胞活性,增加机体免疫细胞生长及抗体合成,维持机体内外环境平衡[10]。甘草性平,味甘,归心、肺、脾、胃经,具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效[11]。张才等研究发现,甘草提取物能提高肉鸡的生长性能和免疫功能[12]。有研究发现,玉屏风有益于畜禽生长性能、免疫功能和呼吸道疾病[13-14]。但目前的报道并没有研究玉屏风与甘草联合进行动物生长性能和免疫功能研究。因此,本文旨在研究玉屏风和甘草提取物对白羽肉鸡生长性能、脏器指数和抗体水平的影响。
黄芪提取物、白术提取物、防风提取物和甘草提取物均是由湖南某生物资源股份有限公司提供,所有提取物均10∶1浓缩比例,可溶于水。其中常规玉屏风主要是黄芪提取物、白术提取物和防风提取物按照4∶3∶3的比例制成。
试验动物选用1日龄的科宝白羽肉鸡600只,单层笼养饲喂,自由采食和饮水。分组前将每只鸡按照体重进行分类,选取体重38~43 g区间的鸡随机分为3组,每组10个重复,每个重复20只鸡。对照组饲喂基础饲粮,处理组1饲喂添加玉屏风提取物500 mg/kg;处理组2饲喂添加玉屏风提取物500 mg/kg+甘草提取物200 mg/kg。基础饲粮配方参照科宝肉鸡营养需要配制,采用玉米-豆粕型饲粮,基础饲粮配方及营养水平见表1。
表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)
试验在铁骑力士集团花荄实验基地肉鸡试验舍进行,试验前打扫鸡舍,清洗、消毒鸡笼和饮水器,前7 d 室温控制在(33±2)℃,相对湿度控制在60%~70%,自由采食,每日饲喂两次(08:00和18:00),自由饮水。7 d后温度逐渐下降,直到与室温一致,相对湿度控制在40%~60%,光照采取自然光照。试验期间每天观察鸡的饮水、采食量和精神状态,保持鸡舍清洁、干燥、卫生、空气新鲜。肉鸡的免疫程序为第1天进行喷雾免疫新城疫苗C45和传支疫苗H120二联合疫苗,第7天进行新支二联活苗点眼和新支流三联油苗颈部皮下注射,第14 天进行禽流感胸部浅层肌肉注射和鸡痘翼膜刺种,第25 天进行新支妥单苗点眼和新支流三联油苗腋下浅层肌肉注射。
1.4.1 生长性能指标
试验开始前、第21天和第42天08:00 点开始,试验肉鸡进行空腹称重(称重前一晚上结料,空腹12 h),计算各阶段每只鸡的平均日增重。
记录每天的采食量,然后算出各阶段的平均日采食。
根据平均日增重和平均日采食量计算料重比。
1.4.2 血样采集
第0、21天和第42天08:00每个重复选取2只接近平均体重的鸡进行采血,采血后将血液放置在37 ℃水浴锅水浴30 min,待血液析出上清液后,3 500 r/min离心10 min,分离血清,最后分别测定血清新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(H5-11、H5-12、H9 和H7)病原的抗体效价。
1.4.3 免疫器官指数
第21、42 天时,每个重复选取接近平均体重的2 只鸡进行屠宰,称量每只鸡的体重,取出心脏、肝脏、脾脏、法氏囊、胰腺称重。
免疫器官指数(g/kg)=免疫器官重(g)/体重(kg)
数据先采用Excel 2016进行整理,通过SAS 8.1软件GLM模型对数据进行单因素方差分析,每个指标以每个重复为统计单位,差异显著再进行Duncan’s多重比较,以P<0.05为差异显著,结果以“平均值±标准差”表示。
表2 玉屏风和甘草提取物对白羽肉鸡生长性能的影响(n=10)
由表2可知,与对照组相比,处理组1可以显著提高22-42 d 的平均日增重和全期的平均日增重(P<0.05)。与对照组比较,处理组2可以显著提高第21天和第42 天的末重(P<0.05),可以显著提高0-21、22-42 d和全期的平均日增重和平均日采食量(P<0.05)。
由表3可知,与对照组相比,处理组1可以显著提高第42天白羽肉鸡中血清的H5-11、H7和NDV 的抗体水平(P<0.05)。与对照组比较,处理组2 可以显著提高白羽肉鸡第21 天血清中的H7 和NDV 抗体水平(P<0.05)和第42 天血清中的H5-11、H9、H7 和NDV抗体水平(P<0.05)。
表3 玉屏风和甘草提取物对白羽肉鸡抗体水平的影响(log2,n=20)
表4 玉屏风和甘草提取物对白羽肉鸡器官指数的影响(g/kg,n=20)
由表4可知,与对照组相比,处理组2 可以显著提高白羽肉鸡第42 天肝脏和脾脏器官指数(P<0.05)。而处理组1对免疫器官指数无显著影响(P>0.05)。
中草药中的活性成分中的多糖、黄酮等,能够提高机体的免疫力,促进动物的生长性能。在本试验中,与对照组相比,饲喂玉屏风提取物对0-21日龄肉鸡的生长性能无显著影响,但是饲喂玉屏风提取物和甘草提取物有显著影响,有可能是甘草提取物增加玉屏风提取物的效用。吴华等[15]研究发现饲粮中添加甘草药渣可以显著提高肉鸡的日增重。本试验开展日期正值四川高温,而甘草具有清热解毒和润肺止咳的功效[16]。因此,在饲粮中加入甘草能有效减少因天气炎热动物食欲下降的影响。冯淇元等[17]研究发现在饲粮中加入甘草和茯苓可以显著提高施氏鲟热应激耐受能力,这与本试验结果相一致。在本试验后期,仅饲喂玉屏风提取物也可以显著提高肉鸡的生长性能,这与邓缘等[18]、龚泽修等[19]和周巍[20]的研究结果相一致。Bai等[21]研究发现给肉鸡饲喂黄芪提取物在试验前期鸡群无明显增重,但是试验全期的日增重和肉鸡末重是有显著提高的,这与本试验的结果相一致。但近年来也有研究发现中药提取物对动物的生长性能无影响[22]。Chen等[23]也发现饲粮中添加黄芪提取物对肉鸡的日增重、日采食和耗料增重比无影响。这些结果的不一致有可能是中药成分和添加量不一致,还有部分原因是中草药单一使用效果没有组合使用效果佳。Yin等[13]研究结果发现饲粮中添加500 mg/kg玉屏风多糖可以显著提高肉鸡的生长性能。Bai等[21]将黄芪提取物和柴胡提取物混合饲喂肉鸡的效果明显优于单独饲喂的效果。本试验中,在玉屏风的基础上添加了甘草提取物的效果也明显优于传统的玉屏风。
免疫增强剂是一种非特异性方式单独使用或者其他抗原联合使用来增强机体免疫功能的药物,可以减轻环境压力引起的免疫紊乱,帮助预防和治疗传染性和免疫性疾病。体液免疫是一种通过B 细胞产生抗体来保护自身的免疫机制。因此,血清抗体水平是评价免疫状态的主要指标之一。近年来,大量的研究发现中草药能够提高动物机体的免疫功能[24-26],其中黄芪或以黄芪作为核心的组方研究较多且效果较佳[27]。Chen等[28]研究发现黄芪可以增强接种新城疫疫苗的鸡T淋巴细胞和B细胞增殖从而提高疫苗的活性,提高机体抗体水平,这与本试验的研究结果相一致。黄芪提取物还被用作免疫佐剂用于制备针对法氏囊病毒(IB⁃DV)、新城疫病毒(NDV)和感染性滑囊炎的疫苗[29]。早有研究表明玉屏风散配方中的黄芪作用最为全面,对免疫功能、肠道菌群和呼吸道均有显著的改善作用,配方中防风对肠道和呼吸道有显著改善,但对细胞免疫无影响,配方中白术对于各项指标不明显,但是三种中草药的组合效果最佳[13]。最近的研究结果发现将甘草和黄芪按照1∶1 的比例混合使用比单独添加其中一个效果更佳,可以显著的提高黄鲈鱼的免疫调节功能[30]。该研究证实了甘草和黄芪具有复配效果。
肝脏、脾脏和法氏囊是家禽重要的免疫器官,免疫器官的发育状态能很好地反映家禽免疫能力和抵御疾病能力[31]。免疫器官指数在一定程度上反映其相应机能状态,是一项重要的生物学指标,可用来判断机体的营养、生长和病变的状态[32]。在本试验中发现添加玉屏风和甘草提取物可以显著提高肝脏和脾脏的脏器指数。仅添加玉屏风提取物能提高肝脏和脾脏的脏器指数但并不显著。免疫器官指数的改善能很好地反映出添加玉屏风和甘草提取物对鸡群免疫功能的影响,这与玉屏风+甘草提取物组抗体水平提高结果相对应。同时大量的研究也证明了在家禽饲粮中添加中草药可以显著提高家禽免疫器官指数[33-35],与本研究的结果相一致。
①饲料中添加玉屏风提取物可显著提高白羽肉鸡后期的平均日增重和抗体水平。
②饲料中添加玉屏风和甘草提取物可显著提高白羽肉鸡全期的平均日增重、平均日采食量、免疫器官指数和抗体水平。