果树木屑对食用菌菌丝生长和原基分化的影响

任军凯，周晓勇，曾智勇，姚祥坦，陈银根

（1.新昌县种植业技术推广中心，浙江，312599；2.新昌县农村经营管理站；3.嘉兴市农业科学研究院）

传统食用菌栽培以阔叶木屑为主要栽培基质，但菇木林资源不足，菌林矛盾突出，因此，新型培养料的探索是确保食用菌产业可持续发展的重要措施[1]。果树木体积大且经济价值低，传统处理方式是用作廉价燃料或长期堆叠放置，而果树木中含有大量的木质素、纤维素等营养成分，可用于栽培食用菌[2]。本研究利用桃树、梨树、葡萄和无花果木屑栽培玉木耳和灰树花2种珍稀食用菌，探究4种果树木屑对菌丝生长和原基形成的影响，初步筛选适合作为玉木耳和灰树花的果树木屑培养料，为进一步利用果树木屑奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

①供试材料 果树木屑包括桃树、梨树、葡萄、无花果，在新昌当地收集。木屑从安徽购入，为食用菌栽培常用的阔叶木屑。将当年采集的4个树种木条晒干，经网孔为8 mm的粉碎机粉碎成木屑备用。

②供试菌种 玉木耳[3]，由丽水市农业科学院提供；灰树花品种庆灰151，购于丽水庆元。

③母种和原种配方 将菌丝从菌种中分离，保存至试管中作为母种，母种培养基配方为马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂18 g，配制成1 L。将母种转接为原种，原种培养基配方为木屑78%、麸皮21%、石膏1%，含水量60%。

④试验设计 试验于2019年10月至2020年4月在嘉兴市农业科学研究院实验室进行。

a.木屑浸出液试验。木屑浸出液的制备：称取20.0 g各类木屑，加入1 L水，煮沸20 min，用纱布过滤掉木屑，收集滤液并加热浓缩至100 mL备用。

木屑浸出液培养基的制备：设置4个木屑浸出液梯度处理，125 mL PDA培养基中分别含有0（对照）、5、20、35 mL木屑浸出液。取12 mL培养基放入90 mm培养皿中备用。

菌龄一致的菌丝块：从母种中取菌丝块，接种至装有PDA培养基的培养皿中央，培养至菌丝刚长满培养皿，用打孔器在菌落最外围取直径8 mm的菌丝块。

接种及菌丝培养：取菌龄一致的菌丝块接种至装有木屑浸出液培养基的培养皿中央。使用恒温培养箱在25℃下培养菌丝，每个处理重复5次，1个培养皿作为1次重复，每个培养皿1块菌丝块。

b.培养料配方试验。木屑培养料配方及菌包的制备：试验设置5个处理，使用葡萄木屑、无花果木屑、梨树木屑、桃树木屑和阔叶木屑（对照）配制培养料，培养料配方为木屑78%、麸皮21%、石膏1%，含水量60%。使用15 cm×30 cm的菌袋装培养料，每袋培养料质量600 g。

1.2 接种及菌丝培养

玉木耳于2019年10月9日接种，灰树花于2019年12月4日接种，取玉木耳和灰树花母种接至PDA培养基中活化菌丝，用打孔器取菌龄一致的菌丝块5块接种至菌棒中，放于25℃培养箱内培养，每个处理重复5次，1个菌棒作为1次重复。试验方法如下。

①培养基菌丝生长速度测量 用打孔器取菌龄一致的菌丝块接种至装有木屑浸出液培养基的培养皿中央，接种后根据菌丝生长速度在相同时间点分2次测量菌丝直径，2次间隔天数根据菌丝生长速度调节，间隔3～5 d，菌丝生长速度计算公式：菌丝生长速度（cm/d）=（第2次测量直径－第1次测量直径）/（生长天数×2）。

②培养料菌丝生长指标测定 菌棒接种后10 d开始测定菌丝生长速度，用油性笔在菌袋上标明菌丝边缘，间隔10 d再用油性笔标明菌丝边缘，用直尺测量10 d的菌丝生长量，菌丝生长速度计算公式：菌丝生长速度（cm/d）=（第2次划线长度-与第1次划线长度）/生长天数。

③菌丝长势的测定 将不同处理的培养皿和菌棒放置在一起，菌丝长势测定参考宋盼盼等[4]的方法。

④原基数量和现蕾率测定待菌丝长满后将菌包移出恒温培养箱，放置在常温下，使其自然产生子实体原基，统计各处理原基数量，玉木耳于2019年11月29日开始统计原基数量和现蕾率，灰树花菌丝长满后温度不适宜出菇，因此于2020年4月20日统计原基数量和现蕾率，现蕾率计算公式：现蕾率（%）=现蕾菌棒数/菌棒总数×100。

⑤化学指标测定 将供试木屑及麸皮烘干后经粉碎机粉碎，过100目筛，混合均匀，各培养料碳氮比按照配方比例计算获得。

总碳含量用重铬酸钾氧化法测定[5]；总氮含量采用全自动凯氏定氮仪测定。

1.3 数据处理

试验数据采用SPSS 20.0统计学软件进行处理，各组间数据采用Duncan's新复极差法进行多重比较（P＜0.05）。采用Personal相关系数进行相关性分析。

2 结果与分析

2.1 果树木屑浸出液对菌丝生长速度的影响

如表1所示，随着葡萄和无花果木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌丝生长速度逐渐提高，至含量到达35 mL时，玉木耳菌丝生长速度分别较对照（0 mL）提高35.3%和17.3%；玉木耳菌丝在桃树木屑浸出液培养基中生长速度先加快后减弱，20 mL处理较35 mL处理菌丝生长速度减慢12.5%；不同含量的梨树木屑和阔叶木屑浸出液对玉木耳菌丝生长速度没有显著影响。

表1 果树木屑浸出液对菌丝生长速度的影响

不同含量的桃树木屑浸出液会显著降低灰树花菌丝生长速度；高含量（20 mL和35 mL）的葡萄、梨树木屑浸出液同样显著降低灰树花菌丝生长速度；不同含量的无花果木屑浸出液和阔叶木屑浸出液处理下灰树花菌丝生长速度与对照差异不显著。

2.2 果树木屑浸出液对菌丝长势的影响

各类木屑浸出液对菌丝长势有一定影响，由表2可见，随着木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌丝长势在桃树、梨树和阔叶木屑浸出液的培养基中变强，在无花果木屑浸出液的培养基中变弱，在葡萄木屑浸出液中长势无明显变化。

表2 果树木屑浸出液对菌丝长势的影响

随着木屑浸出液含量的增加，灰树花菌丝在葡萄、无花果和阔叶木屑浸出液的培养基中长势变强，在梨树、桃树木屑浸出液中无明显变化。

2.3 果树木屑培养料对菌丝生长和长势的影响

如表3所示，将各类木屑配制成培养料，以阔叶木屑配方的碳氮比最高，达到40.88，梨树木屑配方碳氮比最低，仅25.35。玉木耳在阔叶木屑培养料中生长速度最快，在无花果木屑培养料中不生长；灰树花在阔叶木屑培养料中生长速度最快，在无花果木屑培养料中生长速度最慢。不同培养料对灰树花菌丝长势的影响较小，而葡萄木屑和桃树木屑的会减弱玉木耳菌丝长势。

表3 果树木屑培养料对菌丝生长速度和长势的影响

2.4 果树木屑培养料对现蕾率原基发生的影响

由表4可知，梨树木屑培养料和阔叶木屑培养料下的玉木耳现蕾率为100%，但梨树木屑培养料下的原基数量较少；葡萄木屑培养料下的玉木耳现蕾率较低，为20%，原基数量较少；而无花果木屑培养料和桃树木屑培养料下的玉木耳现蕾率为0。使用葡萄、桃树和梨树木屑培养料下的灰树花现蕾率较高，分别是80%、80%和100%，较阔叶木屑培养料的现蕾率高，但梨树木屑培养料中灰树花原基颜色呈白色，桃树木屑因为是从外地购入，成本相对较高，葡萄木屑相对更适宜作为灰树花的培养料。

表4 果树木屑培养料对现蕾率和原基发生的影响

3 讨论与结论

研究表明，菌丝生长速度与菌丝呼吸消耗呈正相关[6]，而培养料的碳氮比也影响菌丝生长速度[7]，灰树花菌丝生长最佳培养基碳氮比为30∶1[8]，而玉木耳菌丝生长的最佳碳氮比尚未有研究。葡萄木屑浸出液对灰树花菌丝生长有抑制作用，但葡萄木屑制作成培养料后的碳氮比较合适灰树花，这可能是灰树花菌丝在葡萄木屑培养料中的生长速度稍快于其他木屑培养料的原因。

本试验在菌丝培养过程中发现，使用阔叶木屑栽培的玉木耳菌丝最早出现原基分化，然后是梨树木屑。葡萄和桃树木屑培养的玉木耳菌丝仅在接种口附近出现原基，其原基出现位置还需进一步研究；灰树花原基均出现在接种口，葡萄、桃树和梨树培养料的原基出现时间均早于阔叶木屑培养料，梨树木屑培养料中灰树花子实体原基为白色，无花果木屑培养料内菌丝颜色变黄，并且无原基出现，目前尚未有对子实体原基颜色进行研究的文献，果树木屑对灰树花子实体原基颜色的影响还需进一步验证。

玉木耳菌丝在无花果木屑浸出液中生长良好，但在无花果木屑培养料中无法生长，可能是由于无花果树汁液中含有许多药用成分，例如黄酮类物质[9]，它在植物抗菌防病等方面起着重要的作用[10]，而黄酮类物质难溶于水，导致菌丝在木屑浸出液培养基中生长良好，而将花果树木屑制作为培养料后菌丝生长受到抑制。

本研究结果表明，葡萄、无花果木屑浸出液能加快玉木耳菌丝生长速度，梨树和桃树木屑浸出液能增强玉木耳菌丝长势。葡萄、梨树、桃树木屑浸出液则会减慢灰树花的菌丝生长速度，葡萄和无花果木屑浸出液对菌丝长势有促进作用。果树木屑作为培养料会减慢2种食用菌的菌丝生长速度，玉木耳菌丝在梨树木屑培养料中生长速度较快，灰树花菌丝在葡萄木屑培养料中生长速度较快。2种食用菌在梨树木屑培养料中的现蕾率较高。

综合多项因素，下一步研究可尝试使用梨树木屑栽培玉木耳，使用葡萄木屑栽培灰树花。