密云区1278例患者抗核抗体分析研究

王宁

101500北京市密云区医院，北京

自身免疫性疾病(AID)是一种以对自身抗原产生破坏性免疫反应为特征的多种疾病，针对这些细胞抗原的抗体通常称为抗核抗体(ANA)。自身抗体可以通过激活补体系统，从而介导组织损伤并引发全身炎症[1]。ANA 的存在是许多系统性自身免疫性风湿病的标志和分类标准。ANA 检测通常是作为初步诊断的重要部分，常用于评估人体自身免疫反应的实验室指标。运用间接免疫荧光(IIF)法在基质中包被的人上皮细胞(HEp-2)检测ANA，目前仍被视为检测ANA 的金标准，其可以检测抗体结合到特定的细胞内靶点，导致不同的染色模式及荧光强度。染色模式可分为细胞核、细胞质及有丝分裂亚型。本文分析1 278 例AID患者及78例健康者血清样本，采用IIF法检测ANA阳性率、荧光模型及滴度，现报告如下。

资料与方法

选取2020年1月-2021年1月北京大学密云区医院就诊的患者1 278例，其中男432例，女846例；风湿免疫科AID患者254例。同时选取健康者78例，作为对照。

诊断标准：AID 由本院风湿病专家根据疾病的各种分类标准进行诊断。

纳入标准：健康者排除因不明原因的慢性发热、持续关节疼痛、口腔溃疡、皮疹、其他慢性全身性疾病、其他免疫疾病、妊娠、肿瘤、急慢性感染、家族史等确诊的自身免疫性风湿病或与自身免疫性风湿病相关症状者。

方法：采用免疫荧光显微镜及欧蒙抗核抗体IgG检测试剂盒(间接免疫荧光法)进行检测。①所有患者空腹抽取外周静脉血4 mL，离心后分离血清备用。②血清样本采用磷酸盐缓冲液(PBS 吐温缓冲液)按欧蒙试剂推荐起始稀释度1∶100 稀释后，覆盖于包被HEp-2 细胞和猴肝组织的载片上，室温孵育30 min。③采用PBS吐温缓冲液冲洗载片，并浸泡PBS吐温缓冲液5 min。④再次覆盖于异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG 结合物，室温孵育30 min。⑤然后第二次用PBS吐温缓冲液冲洗载片，并浸泡PBS吐温缓冲液5 min。⑥最后用封片介质进行封片。所有程序均由2 名经验丰富的技术人员按照试剂盒说明书完成，然后由2名专家使用40倍荧光显微镜判读载玻片，如果荧光滴度≥1∶100，则报告为阳性。主要的ANA 荧光模型类型包括核均质型、核颗粒型、胞浆型、核仁型、着丝点型及两种或多种核型并存模型。

统计学处理：数据采用SPSS 18.0 统计学软件分析，计数资料用频数和百分率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

ANA 阳性标本分布情况：1 278 例患者ANA 检测标本中阳性720 例，阳性率为56.34%，其中男203 例(15.88%)，女517 例(40.45%)。ANA 阳性标本中，滴度1∶100 占比64.58%(465/720)，滴度1∶320 占比15.69%(113/720)，滴度≥1∶1 000 占比19.72%(142/720)。荧光模型以颗粒型+胞浆型两种模型并存为主，共418 例，占比32.71%(418/1 278)，在ANA 阳性标本中占比58.06%(418/720)，其中女性颗粒型+胞浆型328 例，男性颗粒型+胞浆型90 例，差异有统计学意义(χ2=21.856，P＜0.01)。见表1。

表1 ANA阳性标本中不同性别颗粒型+胞浆型比较(n)

AID 患者及健康者ANA 阳性分布情况：AID 患者ANA 阳性例数为163例，占比64.17%(163/254)；健康者ANA 阳性例数14 例，占比17.95%(14/78)。AID 患者与健康者ANA 阳性例数比较，差异有统计学意义(χ2=51.228，P＜0.01)。见表2。

AID 患者及健康者荧光模型与滴度分布情况：AID 患者以颗粒型+胞浆型两种模型并存为主，占比53.37%(87/163)；健康者以颗粒型+胞浆型两种模型并存为主，占比57.14%(8/14)。AID 患者ANA 滴度中位数为1∶1 000，健康者为1∶100。

讨 论

AID 是指对特定的自身蛋白失去免疫耐受，表达这些蛋白的器官因免疫系统失调而受到损伤，身体任何器官均可能成为自身免疫的目标。ANA 检测通常是诊断风湿病和非风湿病的第一步检查[2]。有报告评估自身抗体的效价和荧光模式对于指导临床诊断均有价值[3]。此外，有研究报告认为ANA 测试结果可广泛用于自身免疫性疾病的鉴别诊断，因此该测试结果可用于排除全身AID(阴性预测值)，从而更好地为临床诊疗提供依据[4]。本研究通过分析AID 患者ANA 荧光模型和滴度的差异以及健康者ANA 检测情况，结果显示1 278例患者ANA的阳性率为56.34%(720/1 278)，其中以核颗粒型+胞浆型两种模型并存为主占58.06%，这与Sharmin 等[2]报告的结果相近。核颗粒型即HEP-2 细胞表现为间期细胞核呈颗粒样荧光，核仁阴性；分裂期细胞浓缩染色体阴性，染色体周围呈颗粒样荧光。猴肝组织表现为肝细胞呈颗粒样荧光，核仁阴性，荧光强度与HEP-2 细胞基本一致。胞浆型即分裂间期细胞胞质荧光阳性。本研究荧光模型为核颗粒型+胞浆型两种模型并存阳性标本中，女性占比显著高于男性(P＜0.05)。有研究报告显示，性别的免疫系统差异可能进一步导致性别特异的发病率易感性[5]。性激素不仅控制生殖系统，而且还调节免疫反应的发育和功能。女性自身免疫中的性别依赖偏差不仅取决于X染色体，还取决于性激素对免疫系统和靶器官的广泛影响。雌激素一般被认为具有免疫刺激作用，因此在AID中具有致病性。例如系统性红斑狼疮(SLE)会在怀孕期间恶化。虽然雌激素如何调节免疫系统的确切分子机制尚未完全阐明，但研究表明其控制T 和B 淋巴细胞的发育、内稳态、基因表达和信号转导过程，从而影响细胞功能。而雄激素则被认为具有免疫抑制作用[6]。先天和适应性免疫因子在整个生命过程中因性别而异，导致对自身免疫疾病、癌症和传染病的性别特异易感性。

ANA 是一种对DNA 和其他核抗原具有自我反应性的标记物，不仅存在于多种AID 中，同时在无AID的健康人中也能观察到。本研究结果显示，17.95%(14/78)的健康人ANA 阳性，这与Mariz 等[7]在2011年的报告结果相近。可见如果没有AID临床指征，而进行ANA 检测，可能会引起一部分ANA 阳性的健康人群产生不必要的担忧和焦虑。而本研究中AID 患者ANA 阳性率显著高于健康人(P＜0.01)，这与Mariz等[7]的研究结果一致。本研究通过分析发现，健康人群虽然存在ANA 阳性，但ANA 滴度多较低，中位数为1∶100，而AID 患者ANA 滴度中位数为1∶1 000。一般认为，没有AID的个体其血清自身抗体水平低于具有AID 的个体[8]。但我们发现有少数健康人的ANA滴度达到1∶320，因数量有限，未能深入展开研究。AID 患者HEP-2 细胞以颗粒型+胞浆型两种模型并存为主，占53.37%(87/163)，但也有核均质型、核仁型、着丝点型、核模型的出现。健康人群HEP-2 细胞虽然也以颗粒型+胞浆型两种模型并存为主，占57.14%(8/14)，但没有出现核均质型、核仁型、着丝点型、核模型。本研究结果表明，ANA 的HEP-2 细胞出现颗粒型+胞浆型两种模型并存时，鉴别ANA 阳性的AID 患者及健康人时参数有限，所以还应结合ANA 的HEP-2 细胞滴度进行综合分析。而对于核均质型、核仁型、着丝点型、核模型等特殊核型的出现，ANA 的模型似乎更有临床观察价值。可见在临床工作中，虽然因间接免疫荧光法其高灵敏度而被认为是ANA 筛查检测的金标准，但如果检测ANA 滴度较低，则不能将其作为独立的AID 诊断指标。可见ANA 滴度对于进行准确的诊断非常重要[9]。但是本研究有一定的局限性，首先没有对患者及健康人的自身抗体进行随访，未能够评估在多年后，健康人群ANA 阳性个体是否出现AID 的体征和症状，其ANA的滴度是否上升、ANA 核型是否出现变化等指标，以及对于AID患者应对治疗后自身抗体的变化值进行相应观察。其次，本研究仅纳入1年患者，样本量少，未能将AID患者进行再次细化分组分析，且未能将患者进行年龄分组研究，因此需要更大样本量检测ANA，可能有助于得出更可靠的结论。