全自动快速微生物质谱检测系统在流感嗜血杆菌快速鉴定中的价值分析

秦淑国，许元元，赵萍萍，李慧慧，李振鹏

皖北煤电集团总医院检验科，安徽 宿州 234001

流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae,Hi）属于临床常见的呼吸道感染细菌，主要通过呼吸道传播并造成呼吸道或其他器官病变，多见于体质较弱的儿童和老年人群，同时也是引起儿童社区获得性肺炎的常见致病菌，因此，对Hi的准确检测对疾病的诊断、治疗方案的制定以及预后的评估均具有重要意义[1-2]。然而，早期对Hi的鉴别主要依赖细菌培养，虽然结果较为准确，但耗时较长，使得临床诊断价值大打折扣；同时抗菌药物滥用、疫苗使用、耐药性增加等诸多因素也影响Hi检测准确性[3-4]。全自动快速微生物质谱检测系统（MALDI-TOF）通过质谱技术对Hi进行快速、准确的判断，其高效、简便的操作优势获得了广泛的关注和应用[5-6]。为进一步评价全自动质谱检测系统在鉴定Hi中的应用价值，皖北煤电集团总医院开展了此次研究，现将相关内容总结如下。

1 资料与方法

1.1 资料来源 收集皖北煤电集团总医院2020年7 月至2021 年3 月痰培养标本1 135 份，采用细菌16S rDNA 序列测序方法对标本进行细菌种属鉴定。剔除同一患者重复分离的菌株后得到30 株Hi菌株。

1.2 方法

1.2.1 仪器设备与耗材 Bruker 质谱仪及配套软件（布鲁克公司），三氟乙酸、标准溶剂（乙腈、水和三氟乙酸的比例分别为50%、47.5%和2.5%）、甲酸（Sigma-Aldrich 公司）；全自动细菌鉴定仪Vitek 2 Compact及配套NH鉴定卡片（梅里埃公司）；MH琼脂及X因子、V因子、X+V因子纸片（Oxiod公司）。

1.2.2 检测方法 依据《全国临床检验操作规程》将待测标本接种于Hi培养基上，37 ℃恒温培养24～48 h。分别采用MALDI-TOF、Vitek 及M-H 琼脂药敏试验对所有受检标本进行细菌种属鉴定，记录并比较3种方法下Hi菌株的鉴定结果。

MALDI-TOF：选用Bruker 质谱仪，选取待检单个菌落涂于质谱仪金属靶板上，先后加入甲酸和适量基质液，静置干燥后放于质谱仪中进行检测。

Vitek：采用常规生化反应比色法进行鉴定。

M-H琼脂药敏试验：依据临床检验操作规范行X、V 因子需求试验，选取待测菌落制成0.5 麦氏浊度的菌悬液均匀涂布于M-H琼脂平板上，无菌操作取X、V 及X+V 因子试片进行接种，最后放置于浓度为5%的CO2培育箱中进行连续培养，24 h后判读结果。

1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件进行分析，计数资料采用率（%）表示，检出率的比较使用配对χ2检验；计量资料采用xˉ±s表示；鉴定用时比较采用方差分析进行总体比较，再使用LSD-t检验进行两两比较。以P＜0.05表示具有统计学意义。

2 结 果

2.1 3 种方法对Hi菌株鉴定结果比较 30 株Hi，其中22 株3 种方法均可检出，4 株由MALDI-TOF、Vitek鉴定出来，3株仅有MALDI-TOF鉴定出，另有1 株3 种方法均未检出，具体鉴定结果见表1。MALDI-TOF 对Hi菌株的检出率高达96.67%，其虽高于Vitek的86.67%，但两组差异无统计学意义（χ2=1.333，P=0.248）；Vitek与M-H琼脂试验检出率差异无统计学意义（χ2=2.250，P=0.134）；MALDI-TOF 对Hi菌株的检出率明显高于M-H琼脂试验，差异具有统计学意义（χ2=5.143，P=0.023）。

表1 3种检测方法对Hi菌株鉴定结果比较

2.2 3 种方法对Hi菌株的鉴定用时比较 3 种方法中MALDI-TOF 对Hi菌株的检测用时最短，为（0.15±0.01）h，其次是Vitek，为（17.04±5.93）h，M-H琼脂试验用时最长，为（36.78±9.58）h。3 种方法用时总体存在差异，差异有统计学意义（F=18.258，P＜0.001）。进一步用LSD-t检验做多重比较结果表明，3 种方法的用时两两比较差异均有统计学意义（P均＜0.001）。

3 讨论

Hi对体质较弱的儿童和老年人具有较高的侵袭性，而儿童和老年人一旦感染后，容易对自身机体各系统造成不良影响，从而导致病程迁延，影响儿童的生长发育以及老人的生活质量，因此，近年来Hi的鉴定随着呼吸系统疾病的高发而受到广泛关注[7]。临床实践中发现，由于呼吸道内正常菌群的存在和抗菌药物滥用，传统细菌培养受到了明显干扰，影响诊断结果；此外不同实验室环境、不同操作人员的主观判断能力也会导致诊断结果的差异[4]。因此寻求更为快捷、方便、准确的实验室诊断方法成为临床研究的热点。

MALDI-TOF 及M-H 琼脂试验均操作简便，前者结果为自动显示，耗材成本最低，但需要特殊仪器，后者为肉眼判读，耗材成本高于前者，不要特殊仪器；Vitek操作相对复杂，仪器自动判读结果，耗材成本最高。

MALDI-TOF 技术是根据细菌、真菌的特征性蛋白质指纹图谱进行微生物鉴定，通常只需要几分钟，大大缩短检测时间，可实现微生物的快速鉴定，提高感染性疾病的诊断效率。此次研究结果显示，与Vitek、M-H琼脂试验的检出率相比，MALDI-TOF对Hi菌株的检出率最高。原因在于MALDI-TOF具有广泛的检测范围，其自有的细菌数据库包含了各类细菌的菌谱，能有效提高鉴别准确率；而且通过配套软件优化繁琐的工作流程，有效降低了人为因素造成的误差，同时能够满足大样本量、避免样品交叉污染，大大提高了检测效率和准确性[8]。

研究中MALDI-TOF、Vitek对Hi的检测用时均较M-H 琼脂试验明显缩短，说明MALDI-TOF、Vitek的效率更高[9-10]。虽然M-H琼脂试验对检测设备的要求低，但Hi对培养环境要求高，技术人员的经验和操作水平参差不齐，可能会导致该方法对Hi的检出率低。此外，M-H 琼脂试验操作步骤繁琐、检测时间较长，在此过程中Hi可能因传代次数增加而导致最终的生化反应结果不正确[11]。

综上所述，全自动快速微生物质谱检测系统可对Hi进行有效鉴定，其具有成本低、准确率高、操作简便等优点，在临床Hi的鉴定中具有较高的应用价值。