蛋鸡大肠杆菌病的临床诊断及药敏检测

文│刘娇娇（北京市密云区农业农村局东邵渠所）

大肠埃希菌（Escherichia coli）俗称大肠杆菌，属于肠杆菌科大肠埃希菌属（Escherichia），是一种条件致病菌。目前在养禽生产过程中，不良的卫生条件会造成大肠杆菌病的发生，导致局部或全身感染。致病性大肠杆菌在自然界中广泛存在，凡有哺乳动物和禽类活动的环境，其空气、水源和土壤中均含有该菌。该病可经过消化道、呼吸道、生殖道等途径进行水平传播，还可通过种蛋垂直传播。

大肠杆菌除了是引起该病的病原体外，还会造成免疫抑制状态，它们的存在往往会加重病原体本身的致病作用。单独的大肠杆菌感染只会产生轻微症状或无症状，但当大肠杆菌和其他病原体混合感染，临床症状显著加重。笔者对蛋鸡大肠杆菌病的临床诊断及药敏检测试验进行讨论。

一、试验材料与方法

1.试验材料。来自某商品蛋鸡养殖场的病鸡。

2.试验试剂。普通琼脂培养基、麦康凯培养基、SS营养琼脂培养基、LB肉汤、大豆酪蛋白琼脂培养基，生理盐水、氢氧化钠试剂、MR、VP、吲哚试验所用试剂、五糖(葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、乳糖）、枸橼酸盐。

3.试验药品。含乳酸环丙沙星、盐酸环丙沙星、克林霉素、硫酸阿米卡星等药物的纸片。

4.仪器设备。恒温培养箱、干燥灭菌器、高压蒸馏灭菌器、电泳箱、超净工作台。

5.试验方法。本试验首先通过临床症状观察、病理变化观察做出初步诊断，然后根据临床症状和病理变化进行试验室检测。

（1）临床症状观察。病例送检后，首先对病鸡进行临床检查，主要观察病鸡的精神状态、食欲、活动、行为变化、呼吸系统变化及粪便情况。

（2）病理剖检变化观察。首先对病鸡心脏采血，离心后分离得到血清备用，处死病鸡，在超净台无菌环境中解剖病死鸡。把鸡在消毒液中浸泡后，用灭菌的剪刀剪开皮肤，打开胸腔、腹腔，观察腹膜变化。观察心包有无增厚、出血点、坏死等病理变化。观察肝、脾、肺、肾、胰腺有无肿胀出血等病理变化。剪开鸡的腺胃、十二指肠及直肠，观察病鸡消化系统的病理变化。剪开病鸡肿胀的关节，观察鸡关节的病理变化。根据本批病例的临床症状和病理变化，推测该商品蛋鸡有感染大肠杆菌的可能。对可疑病原体进行分离鉴定。

（3）药物敏感试验用药敏纸片。参照《兽医卫生物及免疫学技术》中平板的制作方法。

（4）大肠杆菌的分离。剖开鸡腹腔后，对存在明显病变的实质器官（心、肝、脾）在病变交界处用烧红的铁片烧烙表面，再在烧烙过的部位用灭菌的接种环采取病料，直接接种在培养基上，把培养基置于37℃温箱中培养18～24小时，观察结果。

（5）大肠杆菌的纯化。从经过24小时培养的麦糠凯琼脂平板上用灭菌接种环挑取光滑型、边缘整齐、微隆起红色菌落的一半，接种到普通琼脂斜面上进行纯培养（37℃、24小时）。

（6）大肠杆菌的保存。将分离到的大肠杆菌菌株经普通斜面培养基37℃、24小时传代后，置于室温下保存，以便做进一步的鉴定。

（7）形态与染色特性。被检菌为革兰氏阴性小杆菌，短棒状，两端钝圆，成对或散在。

（8）生化试验。把分离纯化的细菌分别做五糖发酵试验、MR试验、VP试验、吲哚试验和枸橼酸盐试验，观察并记录结果。

（9）药敏试验。用灭菌接种环挑取24小时内纯培养在普通琼脂斜面上的待检菌于琼脂平板上划线培养，并用灭菌的玻璃棒涂抹均匀，待菌液稍干，用无菌眼科镊将不同浓度的药敏纸片平放在平板上，轻压使其紧贴在平板上。药敏片一旦接触平板就不要再移动，置于37℃恒温培养箱中培养16～24小时。

二、试验结果

1.临床症状。病鸡有轻微的呼吸道症状（声音嘶哑），精神状态不佳、嗜睡。病鸡关节明显肿胀变形，走路姿势异常、行动困难、不愿走动，病鸡拉黄绿色稀粪。

2.病理剖检变化。病鸡肾肿胀出血，胰腺出血，腺胃基底膜出血。十二指肠点状出血，直肠黏膜出血且肠中有黄绿色稀粪。剖检气管可发现气管轻微出血，气管内有浓稠的黏液。关节有干酪样物质渗出，关节腔内有浓汁。其他病鸡关节有豆腐渣样渗出物，病变不明显的鸡关节有少许血凝块。

3.细菌学检测。

（1）细菌的分离。分离的菌株在麦康凯培养基上形成红色菌落，在TSA培养基上形成白色菌落。纯培养的菌落在SS培养基上形成红色菌落。

（2）细菌鉴定。拉丝试验的结果为阳性，能拉出黏丝，分离到的细菌为革兰氏阴性菌。生化试验结果如表1。

表1 生化试验结果

在TSA培养基上长出白色菌落，麦康凯培养基上形成红色菌落，圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑、湿润。在SS培养基上呈红色菌落。细菌在鉴别培养基上生长和生化特性结果完全符合大肠杆菌特性，判定分离细菌为大肠杆菌。

（3）药敏试验结果。根据NCCLS标准判断目的菌对各种药物的敏感程度，如表2。

表2 分离大肠杆菌药敏试验结果

由表2可知，从病例身上分离得到的大肠杆菌对粘菌素、安普霉素、阿米卡星等药物敏感。因此，临床上可用以上药物搭配使用治疗大肠杆菌感染。

三、讨论

1.临床诊断。鸡大肠杆菌病是养鸡业中比较常见的一种病，该批病鸡最终确诊为大肠杆菌病。关节炎型大肠杆菌病主要侵害病鸡附关节，关节肿胀、跛行，关节液有脓性渗出物或干酪样渗出物，并伴有腱鞘炎。大肠杆菌病常继发其他病，或与其他病原体混合感染。使得该病的诊治变得复杂。首先，发病率高，且此病使鸡发育不良、抵抗力下降，引起病鸡死亡，造成经济损失。其次，该病鸡在临床症状和病理变化上都变得复杂，比单一感染某种病更难以诊断，需要通过一定的实验室检测手段进行确诊。混合感染不能仅通过抗生素的方法治疗，抗生素运用不当反而会使细菌产生耐药性。

2.药敏试验指导临床的意义。药敏试验结果为临床合理用药提供了可靠依据。药敏试验结果证明，本次分离到的大肠杆菌对某些药物如阿米卡星具有很强的敏感性。药敏试验研究了临床常见的几种药物对大肠杆菌的抗菌效果，并为有效防治该病提供了科学依据和有利条件，对指导养殖生产具有重要意义和应用价值。

近年来，由于抗菌药物使用不规范，以及许多耐药性质粒在细菌之间转移，造成大肠杆菌耐药性增强，产生越来越多的耐药菌株。不同地方分离到的大肠杆菌对抗生素的敏感性存在很大的差异，因此，很难确定一个能普遍适用的药物敏感谱。因此，药敏试验能为大肠杆菌的感染提供合理的治疗药物，防止滥用抗生素造成大肠杆菌耐药性的增加，同时有效用药也节约了不必要的开支。在本次试验研究中，患病商品蛋鸡感染的大肠杆菌对粘菌素、阿米卡星等高度敏感，合理利用这些抗生素，采取轮换用药、配合用药的方法。药物治疗的同时还应加强鸡群的饲养管理。

3.防治措施。该病应做好预防工作，由于该病的发生有明显诱因，因此，预防工作显得更为重要。在预防工作中，最为重要的是提高饲养管理水平。夏天做好鸡舍通风换气工作，冬天做好防寒保暖工作，使鸡舍温、湿度适宜。及时清理鸡粪，进行带鸡消毒，每天1次，连续消毒1周；对用具、食槽、水槽、接触病鸡的人员、污染场地严格消毒，给鸡创造一个良好的生存条件，更能增强鸡体抵抗力。从动物试验可以看出，该病的感染途径主要是经过消化系统，因此要更加重视对食槽、水槽的消毒。

为了防止该病的继发感染，可适当投药加以控制。根据药敏试验结果，运用对该种大肠杆菌敏感的药物进行治疗，如粘菌素、阿米卡星等药物，为了提高治疗效果，避免药物产生耐药性，可采取轮换用药和配合用药。还应加强商品蛋鸡各种营养的补充，配合补液、收敛等对症治疗，增强效果。疾病重在预防，应控制好传染源，切断传播途径，保护易感动物，才能从根本上控制该病的发生与传播。

四、结论

根据临床症状、病理剖检变化，再结合细菌培养特性、形态特征、生化试验等结果，初步鉴定分离的细菌为关节型大肠杆菌。通过药敏试验可知，该大肠杆菌对粘菌素、阿米卡星等高度敏感。