南海区第五人民医院2014-2019年839株流感嗜血杆菌耐药模式及流行特点研究

孔燕南 林锦喜 王孔专 陈影芳 奚克勤

528231南海区第五人民医院检验科1，广东佛山

528231南海区第五人民医院肾内科2，广东佛山

流感嗜血杆菌(HI)是常见的一类定植菌，主要存在于人体的口咽部、鼻咽部，是儿童社区获得性感染的主要病原菌，主要的感染群体为儿童，可以通过原发和继发感染。流感嗜血杆菌可以造成儿童肺炎、上呼吸道感染，进而引起败血症、脑膜炎，严重威胁儿童的健康。治疗主要以抗菌药物治疗为主，但是由于抗菌药物的广泛应用，导致流感嗜血杆菌的耐药性不断上升，同时对于不同抗菌药物的耐药模式也发生了较大的改变[1]。本研究旨在了解南海区第五人民医院HI 感染及菌株耐药现况，为临床治疗提供依据，并了解其分子流行病学特征，对建立本地区流感嗜血杆菌的流行病学资料、推广疫苗接种，建立流感嗜血杆菌防治的长效机制，形成以预防为主，防治结合的大健康诊疗模式具有重要意义[2]。本文通过对南海区第五人民医院检测出的839 株流感嗜血杆菌进行耐药模式和流行病学特点的研究，为临床诊疗和院内感染防治提供依据，现报告如下。

资料与方法

选取2014年1月-2019年12月南海区第五人民医院检验科检出的流感嗜血杆菌的菌株839株，其中来自男性531株；女性308株。患者年龄12天～106岁，其中≤1个月15株；1个月～11岁688株，＞11岁136株。

标本来源：全部839 株流感嗜血杆菌标本中有834株来自于呼吸道标本，占样本总量的99.40%；来自分泌物培养的标本5株，占样本总量的0.60%。

纳入标准：①患者有明显的呼吸道感染症状，临床诊断支气管炎、肺炎。②患者签署相应的知情同意。③经医院伦理委员会批准，可以开展研究。

排除标准：①合并免疫缺陷、血液系统肿瘤等疾病；②已有明确的细菌、病毒等感染者。

方法：①细菌常规培养鉴定：采集的咽拭子标本或者痰液标本经过处理后接种于血琼脂平板和不加抗生素的巧克力平板，培养在浓度为5%的CO2环境中，保持温度在35℃培养箱中，培养时间为48 h，观察菌落的生长形态和生长特点。根据菌落形态、生长特点及对X 因子、V 因子的需求进行HI 鉴定[3]。②药敏试验：采用琼脂扩散敏感试验(K-B 法)和法国梅里埃嗜血杆菌和布兰汉球菌药敏试剂盒(ATB HAEMO)进行药敏试验(微量稀释法)，分别进行氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢呋辛、头孢噻肟、四环素、氯霉素、复方新诺明、利福平、氧氟沙星等10 种药物的敏感性测定，根据CLIS 规定的试验要求来判定试验结果，采用菌株为ATCC49247 作为质控菌株[4]。③β-内酰胺酶测定：用头孢硝噻吩纸片检测流感嗜血杆菌菌株的β-内酰胺酶产生情况。试纸由淡黄色变成红色，表示为β-内酰胺酶阳性；不变色，则为阴性，在试验中设置阴性对照。

观察指标：比较流感嗜血杆菌在不同季节的分布情况；统计检出的流感嗜血杆菌在不同性别及年龄的分布情况；比较流感嗜血杆菌对常用10 种抗生素的敏感及耐药情况。

统计学方法：数据应用SPSS 20.0 统计学软件分析；计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验；计量资料以(±s)表示，采用t检验；P＜0.05 表示差异有统计学意义。

结果

流感嗜血杆菌在不同季节的分布情况比较：在2014年1月-2019年12月连续6年，按照月份分布，流感嗜血杆菌3～5月分离菌株数最多，共410 株(48.87%)。不同月份流感嗜血杆菌分离菌株数见图1。按季节分布，春季(3～5月)最多，共410 株(48.87%)，其次为冬季(12月，1月，2月)和夏季(6～8月)，分别为139 株(16.56%)和187 株(22.29%)，而秋季最少，为103株(12.28%)。

图1 流感嗜血杆菌月份分布图

性别及年龄分布比较：检出的流感嗜血杆菌的菌株839 株，其中来自男性531 株，占63.29%；女性308 株，占36.71%。患者年龄12 天～106 岁，以儿童感染者居多，共703 例，占83.79%，其中≤1 个月15株，占1.79%，1 个月～11 岁688 株，占98.21%，＞11岁136株，占16.21%[5-6]。

流感嗜血杆菌对常用10 种抗生素的敏感及耐药情况：在所检测的10 种抗生素中，根据CLIS 规定的试验要求来判定试验结果，结果利福平、氯霉素和阿莫西林/克拉维酸、四环素、头孢噻肟、氧氟沙星、头孢呋辛的敏感度较高外，其他抗生素有较大程度的耐药性。氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢克洛、头孢呋辛、头孢噻肟、四环素、氯霉素、复方新诺明、利福平、氧氟沙星等10种药物[7]。见表1。

表1 流感嗜血杆菌对常用10种抗生素的敏感率和耐药情况比较[n(%)]

讨论

流感嗜血杆菌寄居于人类上呼吸道黏膜，往往引起呼吸道感染、肺炎，严重的还会引起脑膜炎，甚至败血症等严重疾病，特别是免疫系统未发育完全的婴幼儿和免疫力低下的成年人更易感染。除了引起呼吸道本身感染以外，还可能感染骨骼、循环系统、结膜、脑膜等，引起局部和全身的感染。同时，由于近几年环境污染加剧，以及抗菌药物的滥用，导致流感嗜血杆菌的感染率耐药率亦逐年上升，给临床治疗带来难度，严重威胁人民群众的身体健康[8]。

季节分布显示，春季(3～4月)是流感嗜血杆菌感染的高发季节，其中3月和4月是春季发病的高峰月份，这与国内其他地区的研究结果相似，均好发于春季。但与其他地区6年来流感嗜血杆菌高发的月份比较，存在提前或推后的现象，考虑可能是不同地区和不同年份的气候变化有一定关系，同时还由于研究的样本大小不同，对结果也会产生一定影响。同时，欧美一些国家，包括澳大利亚在内的南半球国家的研究显示，流感嗜血杆菌的发病高发季节均为春季或冬季，与本研究基本一致。

本组HI菌株来源男性患者的比例明显高于女性，与国内其他地区和国外的研究结果类似，但是目前无相应研究对其发生机制进行阐述。

传统的诊疗规范对于流感嗜血杆菌的感染治疗首选的药物是氨苄西林。近几年，随着抗生素的使用强度不断增加，流感嗜血杆菌对耐氨苄西林耐药率逐渐上升，耐药程度不容忽视。

β 内酰胺酶阳性的流感嗜血杆菌，对头孢菌素类仍然有很强的敏感性。尽管第二代头孢菌素头孢克洛耐药性较高，但头孢呋辛仍然有较高的敏感率，其毒性小、经济可作为治疗流感嗜血杆菌感染的首选。第三代头孢菌毒素头孢噻肟和含酶抑制剂阿莫西林/克拉维酸有很高的敏感率，临床应根据药敏结果合理使用抗生素[9-10]。

综上所述，南海区第五人民医院2014-2019年839 株流感嗜血杆菌耐药模式及流行特点研究表明，流感嗜血杆菌主要的发病季节为春季，发病人群年龄集中于儿童。对其进行药敏试验，表明传统的氨苄西林耐药性不断升高，耐药模式的试验表明，二代头孢菌素仍然具有较高的药物敏感度，可作为临床治疗的首选药物。