缺氧缺血性脑病新生儿血清sLOX-1、VILIP-1的变化及临床意义

陈晓玲，陈晓君，杨丽霞，邢舒旺，邱成英

新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxie ischemic encephalopathy，HIE）是因窒息引起的新生儿脑组织缺氧缺血导致的脑部病变［1］。目前，临床主要根据围产期的缺氧病史、患儿的临床表现、影像学检查等来诊断HIE，但部分患儿的临床表现不明显或缺乏特异性，而影像学检查存在一定的滞后性，有漏诊的可能，导致部分患儿错过最佳治疗时间窗，进而影响患儿预后［2］。近年研究显示，钙结合蛋白B 等血清生物标志物可提示早期HIE 疾病，且其与脑损伤的发生、发展有关［3］。可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1（soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1，sLOX-1）可在一定程度上反映机体的血管内皮损伤和炎症反应状态，是急性冠状动脉综合征［4］、急性脑梗死［5］等多种缺血性心脑血管疾病的生物标志物，但其与同样由缺氧缺血引起的HIE 的关系尚不清楚。视椎蛋白样蛋白（visininlike protein，VILIP）-1 是一种在神经系统中高度表达的钙离子结合蛋白，是新兴的脑损伤生物标志物，其表达水平与脑损伤程度关系密切［6］。目前，鲜有sLOX-1、VILIP-1 与HIE 关系的报道。本研究分析了HIE 患儿血清sLOX-1、VILIP-1 的变化及其对HIE 的诊断价值，以期为HIE 的临床诊断提供新的思路。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2018 年1 月—2021 年3 月于四川大学华西三亚医院住院治疗的HIE患儿（HIE组）146例，男76例，女70例，平均胎龄（38.95±1.02）周，平均出生体质量（3.04±0.51）kg；诊断标准参照文献［7］：（1）胎儿宫内窘迫，或者在分娩时有明显窒息史。（2）出生时有重度窒息。（3）新生儿出生后出现神经系统症状，且持续时间超过24 h。（4）排除电解质紊乱等原因引起的抽搐以及宫内感染等原因引起的脑损伤。排除标准：先天发育畸形、先天性心肺疾病患儿；先天性病毒或细菌感染者；染色体异常患儿；胎龄小于36周；自发性颅内出血患儿；有遗传代谢性疾病。将146例患儿分为轻度组（58例）、中度组（52例）和重度组（36例）。另外以同期在我院出生的正常新生儿50例作为对照组，男24例，女26例，平均胎龄（39.23±0.98）周，平均出生体质量（3.11±0.65）kg。2组性别（χ2=0.245）、胎龄（t=1.692）及体质量（t=0.779）比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。本研究经本院伦理委员会批准，新生儿家属均签署知情同意书。

1.2 观察指标 收集所有新生儿的性别、胎龄、出生体质量、5 min Apgar评分，并于出生后24 h进行新生儿行为神经测定（neonatal behavioral neurological assessment，NBNA）［8］，该评分量表共包括行为能力、主动肌张力、被动肌张力、原始反射、一般反应5个方面，满分为40分，＜35分为异常。HIE组分别于出生后24 h（T1）、出生后48 h（T2）、出生后72 h（T3）抽取静脉血3 mL，3 000 r∕min 离心10 min，提取上清液，采用酶联免疫吸附试验检测血清sLOX-1、VILIP-1 的水平，试剂盒购自上海信裕生物科技有限公司。对照组于出生后24 h（T1）抽取静脉血3 mL，由于对照组新生儿不宜反复采血，因此以T1时间点的数据代替48 h（T2）和72 h（T3）数据。

1.3 联合诊断方法 取2 个指标各自的诊断阈值，2 个指标同为阳性则为阳性，同为阴性则为阴性，出现一阴一阳则进行复测。若复测结果不变，则结合专业实践及医师观点进行诊断并侧重考虑：阳性诊断参考敏感度较高指标，阴性诊断参考特异度较高指标。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以±s表示，2 组间比较采用独立样本t检验，多时点观测资料行重复测量方差分析；计数资料以例或例（%）表示，组间比较用χ2检验。相关性分析采用Pearson相关系数。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析T1时间点血清sLOX-1、VILIP-1 对HIE 的诊断价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组5 min Apgar 评分、NBNA 评分比较 与对照组比较，HIE 组5 min Apgar 评分、NBNA 评分均降低（P＜0.01），见表1。

Tab.1 Comparison of 5 min Apgar score and NBNA score between the two groups表1 HIE组和对照组5 min Apgar评分和NBNA评分比较（分，±s）

Tab.1 Comparison of 5 min Apgar score and NBNA score between the two groups表1 HIE组和对照组5 min Apgar评分和NBNA评分比较（分，±s）

＊＊P＜0.01。

组别对照组HIE组t n 50 146 5 min Apgar评分8.79±1.02 3.83±1.56 20.980＊＊NBNA评分37.61±1.24 32.15±2.48 14.924＊＊

2.2 HIE 组和对照组血清sLOX-1、VILIP-1 水平比较 随时间延续，HIE组血清sLOX-1、VILIP-1水平均降低（P＜0.05）；与对照组比较，HIE 组各时点VILIP-1水平及T1、T2时间点的血清sLOX-1均增高（P＜0.01），见表2。

2.3 不同疾病严重程度的HIE 患儿血清sLOX-1、VILIP-1 水平比较 不同疾病严重程度的HIE 与时间效应对血清sLOX-1 存在交互作用（P＜0.05），对血清VILIP-1 水平无交互作用影响。随时间延续，各组血清sLOX-1、VILIP-1 水平均降低，各时点轻、中及重度组血清sLOX-1、VILIP-1 水平依次升高，见表3。

2.4 HIE 患儿T1 时间点血清sLOX-1、VILIP-1 与5 min Apgar评分、NBNA评分的相关性分析 Pearson分析显示，HIE 患儿血清sLOX-1 与5 min Apgar 评分、NBNA评分均呈负相关（r分别为-0.308、-0.412，P＜0.05），VILIP-1 与5 min Apgar 评分、NBNA 评分均呈负相关（r分别为-0.352、-0.424，P＜0.05）。

2.5 血清sLOX-1、VILIP-1（T1时间）对HIE的诊断价值分析 血清sLOX-1、VILIP-1 对HIE 均有较高的诊断价值，两者联合应用对HIE的诊断效能较优，见表4、图1。

3 讨论

研究显示，亚低温治疗可较好地改善HIE 患儿的预后，但治疗时间窗较短，最适宜在生后6 h 内进行，且越早越好［9-10］。重度HIE在早期就有明显的症状，易于诊断，但轻、中度HIE的早期症状不明显，影像学检查一般在72 h后才能发现脑水肿等颅脑病理改变，存在一定的滞后性［11］。HIE 患儿受损的脑组织可在短时间内分泌特定的生物标志物进入脑脊液或血液，这些标志物通常可在一定程度上反映脑损伤程度，并对疾病的诊断、治疗及预后的评估有一定辅助作用［12］。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1（lectinlike oxidized low density lipoprotein receptor-1，LOX-1）是氧化型低密度脂蛋白的特异性受体，两者结合可引起血管内皮功能障碍，促进动脉粥样硬化的形成［13］。LOX-1 位于胞外近膜区的结构域可以被切割水解成sLOX-1 并释放入血，血中的sLOX-1 水平可反映LOX-1 的表达情况［14］。VILIP-1 在小脑、前脑、尾状核、海马体等脑组织中广泛表达，并参与调控神经细胞的凋亡及修复等［15］。本研究结果显示，与对照组比较，T1、T2时间点的血清sLOX-1以及各时点的VILIP-1在HIE 中表达升高，提示sLOX-1和VILIP-1可能参与了疾病的发生、发展。另一方面，各时点轻、中及重度组血清sLOX-1、VILIP-1水平依次升高，提示sLOX-1和VILIP-1可能与病情严重程度有关，两者有潜力成为HIE 的新型生物标志物。HIE会导致氧自由基增多、氧化应激反应增强，引起体内脂质过氧化水平升高，进而使得氧化型低密度脂蛋白大量产生［16］。Yao 等［17］研究显示，氧化型低密度脂蛋白可促进胞外信号调节激酶磷酸化，上调LOX-1的表达，此外，脂质过氧化水平升高可促进白细胞介素6等炎症因子水平上升，而白细胞介素6浓度依赖性地使LOX-1 的表达上调，这可能是血清sLOX-1在HIE中表达升高的原因。VILIP-1在大脑组织中高度表达，当脑部组织受到缺血缺氧性损伤时，表达VILIP-1 的细胞会因受损而释放大量的VILIP-1到细胞外，进而导致血中的VILIP-1水平上升［18］。相关研究也证实，VILIP-1 在HIE 大鼠模型中呈高表达［19］。本研究还显示，随时间延续，HIE组血清sLOX-1、VILIP-1水平呈降低趋势，提示通过临床干预使得脑组织的缺血、缺氧性损伤得到控制、改善，降低了血清sLOX-1、VILIP-1 水平，尤其是HIE组T3时间点的sLOX-1水平与对照组比较差异无统计学意义，可见随着临床治疗sLOX-1水平的下降速度较快。Apgar评分是反映新生儿窒息情况的评分，而NBNA评分则可反映新生儿行为神经功能。本研究通过相关性分析发现，HIE 患儿血清sLOX-1、VILIP-1 与5 min Apgar 评分、NBNA 评分均呈负相关，这也从侧面证实sLOX-1、VILIP-1的表达与新生儿窒息严重程度和神经功能受损情况有关。

Tab.2 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the two groups表2 2组血清sLOX-1、VILIP-1比较 （±s）

Tab.2 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the two groups表2 2组血清sLOX-1、VILIP-1比较 （±s）

＊＊P＜0.01；A与T1比较，B与T2比较，P＜0.05。

组别对照组HIE组t n 50 146 sLOX-1（ng∕L）T1 398.38±106.82 846.51±252.85 12.150＊＊T2 398.38±106.82 484.56±148.22A 3.786＊＊T3 398.38±106.82 373.59±98.66AB 1.501 F-279.441＊＊VILIP-1（µg∕L）T1 0.36±0.12 0.88±0.19 18.136＊＊T2 0.36±0.12 0.74±0.15A 16.215＊＊T3 0.36±0.12 0.54±0.14AB 8.123＊＊F-166.951＊＊

Tab.3 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the three groups of HIE children表3 按临床分度的3组HIE患儿血清sLOX-1、VILIP-1比较 （±s）

Tab.3 Comparison of serum levels of sLOX-1 and VILIP-1 between the three groups of HIE children表3 按临床分度的3组HIE患儿血清sLOX-1、VILIP-1比较 （±s）

＊＊P＜0.01；a与轻度组比较，b与中度组比较，A与T1比较，B与T2比较，P＜0.05。

组别轻度组中度组重度组F交互∕F组间∕F时间n 58 52 36 T1 465.74±136.53 912.08±353.60a 1 371.12±588.52ab 25.637＊＊∕135.434＊＊∕25.637＊＊sLOX-1（ng∕L）T2 355.32±98.24A 524.79±157.26aA 644.25±190.76abA T3 269.39±65.73AB 394.59±85.91aAB 510.77±91.10abAB T1 0.74±0.14 0.87±0.17a 1.12±0.24ab 1.629∕156.809＊＊∕173.922＊＊VILIP-1（µg∕L）T2 0.62±0.12A 0.71±0.13aA 0.97±0.20abA T3 0.44±0.11AB 0.52±0.14aAB 0.71±0.18abAB

Tab.4 ROC analysis of serum sLOX-1 and VILIP-1 in the diagnosis of HIE表4 血清sLOX-1、VILIP-1诊断HIE的ROC分析

Fig.1 ROC curves of serum sLOX-1 and VILIP-1 in the diagnosis of HIE图1 血清sLOX-1、VILIP-1诊断HIE的ROC曲线

临床上，新生儿出生24 h（T1）时是最重要的常规观测时点，且HIE 患儿和正常新生儿血清sLOX-1、VILIP-1 两个指标数据差别明显，故本研究采用T1 时点的sLOX-1、VILIP-1 资料。经ROC 分析发现，血清sLOX-1、VILIP-1对HIE均有较高的诊断价值，均AUC＞0.75，两者联合诊断时敏感度和约登指数均有明显提升，诊断价值有进一步的提高。

综上所述，HIE患者血清sLOX-1、VILIP-1表达水平升高，且其表达水平与病情严重程度和神经功能受损情况有关，两者联合对HIE 有较高的诊断价值。监测血清sLOX-1、VILIP-1 水平对HIE 的早期诊断、病情评估具有重要意义。