芪参益气滴丸含药血清对缺氧/复氧H9C2 心肌细胞KATP 通道开放及PI3K/AKT 信号通路影响的效应研究

何贵新，冯雨菲，秦伟彬，林 琳，胡梦弦，郑国坤，玉黎燕，甲子永，韦 娟，文 琦

（1.广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530022；2.广西中医药大学，广西 南宁 530299）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是全球范围内发病、住院和死亡的最常见原因之一。目前，冠状动脉重建术如经皮冠状动脉介入、冠状动脉旁路手术、经皮穿刺部位的选择和辅助抗栓治疗是提高AMI 临床生存率最有效的策略。然而，再灌注治疗是一把双刃剑，恢复缺血心肌血流的过程可能导致心肌再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury，MIRI），随着氧化应激、心肌细胞凋亡、自噬和炎性细胞因子的释放等多种病理过程相互影响，可进一步加重心肌损害。相关动物模型研究表明，AMI 后的心肌损伤是缺血和再灌注损伤共同引发的，其中再灌注损伤引发的梗死面积占心肌梗死最终大小的50%［1］。故探究心肌缺血再灌注损伤的潜在分子机制，寻找减少最终梗死面积的治疗策略是心血管领域急需解决的问题。近年来，多项研究证实线粒体ATP 敏感性钾通道（mitochondrial ATP-sensitive potassium channel，mitoKATP）的激活在心肌保护中发挥作用，一方面，该通道本身可防止减少钙摄取的驱动力，防止线粒体过渡膜孔（mitochondrial permeability transition pore，MPTP）的形成和活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生以抵抗心肌缺血［2］，另一方面，可影响内源性活性物质及下游信号通路以发挥保护作用［3］。因此，激活mitoKATP 通道是药物改善心肌损伤保护心肌细胞的重要途径。有研究表明，复方制剂芪参益气滴丸具有抗血小板聚集、促进血管新生、抑制炎症反应、稳定斑块和抑制氧化应激等作用，从而发挥其活血化瘀通络的功能，缓解MIRI 后的心肌损伤。笔者团队前期通过动物实验证实参益气滴丸可以激活PI3K/AKT 信号，调控p-AKT 蛋白的表达，对MIRI 的具有改善心脏功能，保护心肌细胞的作用［4，5］。本实验在前期研究的基础上，采用血清药理学方法制备芪参益气滴丸含药血清，体外检测芪参益气滴丸含药血清的心肌细胞的保护作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 细胞株

大鼠H9C2 心肌细胞系购买于浙江美森细胞科技有限公司。

1.2 实验动物

SPF 级雄性SD 大鼠20 只，8～10 周龄，体重220～250 g，实验动物均购自广西中医药大学动物实验中心，动物许可证号：SCXK（湘）2019-0014。饲养条件：温度：（22±2）℃；湿度：40%～60%；光照周期：12 /12 h，普通饲料喂养，自由进食进水；实验流程严格遵循美国卫生机构发布的《实验动物保护和应用指南》，实验操作严格遵守广西中医药大学动物实验管理委员会的相关规定。

1.3 实验药物

芪参益气滴丸（丹参、三七、降香、黄芪，0.5 g/袋；天力士医药公司，国药准字：Z20030319，批号，180615）。

1.4 主要试剂

DMEM 基础培养基、10%胎牛血清（Hyclone），青链双抗（上海生工），H2O2（分析纯，天津市江天化学试剂厂），PI3K/AKT 信号通路阻断剂wort（MCE，HY-10197），mitoKATP 特异性阻断剂5-HD（abcam，ab141672），BCA 蛋白定量试剂盒（Biosharp，BL521A），抗AKT 抗体、抗p-AKT 抗体（美国cell signaling technology 公司），兔抗GAPDH、山羊兔二抗IgG（美国Proteintech 公司），蛋白预染Marker（美国Thermo Scientific 公司），30%丙烯酰胺（29∶1）（Amresco）1.5 mol/L Tris-HCl，pH=8.8 电泳缓冲液、1.0 mol/L Tris-HCl，pH=6.8 电泳缓冲液（无锡菩禾），10% SDS、10%过硫酸铵、丽春红S（国药），TEMED（Sigma），4×蛋白上样缓冲液（无锡菩禾）蛋白预染Marker（Thermo），PVDF 膜（Millipore），5%的BSA（Amresco），PBS 磷酸盐缓冲液（无锡菩禾），Tween-20（Amresco），ECL 发光液（七海生物），HRP 标记二抗（中杉金桥）。

1.5 主要仪器

细胞培养箱（Thermo Scientific 8000），光学显微镜（XDS-1A），倒置拍照显微镜（OLYMPUS，IX71），离心机（德国Eppendorf 公司），酶标仪（Thermo，MK3），冷冻离心机（Effendorf），电泳仪（BIORAD，mini protean 3 cell），电转仪（PS-9，大连竞迈科技有限公司），移液器（Thermo），水浴锅（Leica，HI1210），一体式化学发光成像仪（ChemiScope 5300 Pro），膜片钳放大器AXON200B、Pclam6.0 数据采集软件（AXON 公司）。

1.6 方法

1.6.1 含药血清制备 20 只SPF 级雄性SD 大鼠，正常喂养3 d 后按随机数表法分为2 组，即空白血清组及含药血清组。芪参益气滴丸给药剂量参照《中药药理研究方法学》体表面积折算［6］，大鼠和人（人体质量按照70 kg 计算）的等效剂量比值为6.3，成人芪参益气滴丸用法是1 g，tid，根据公式计算出其每日的芪参益气滴丸用量为27 mg/（100 g·d）。按照体重，含药血清组予27 mg/100 g 芪参益气滴丸溶于2 mL/100 g 生理盐水，空白血清组予2 mL/100 g生理盐水，每日早晚各灌胃1 次，连续7 d。末次给药2 h 后，采用腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，室温静置30 min，予3 000 r/min，离心15 min 后取上清液。56 ℃、30 min 水浴灭活，0.22 μm 微孔滤膜滤过除菌，分装，-20 ℃保存备用。

1.6.2 细胞的培养和处理 取出液氮罐中冻存的H9C2 的心肌细胞，置入37 ℃水浴箱迅速摇晃使其溶解，将溶解冻存液中的细胞悬液吸至离心管中，1 200 r/min 离心5 min，弃上清液，用DMEM 培养基清洗1～2 次。将心肌细胞加入完全培养基，置于37 ℃、5% CO2培养箱内培养，1～2 d 换1 次培养基。取对数生长期用于后续实验。

1.6.3 含药血清浓度的确定 待细胞长满后调整细胞浓度为1×105cells/mL，接种于96 孔板，每孔100 μL，培养24 h；将H9C2 心肌细胞随机分为空白血清组、2.5% 含药血清组、5.0% 含药血清组、10.0%含药血清组及15.0%含药血清组，制备的含药血清分别按2.5%、5.0%、10.0%、15.0%的比例与DMEM 高糖培养基混合，分组处理H9C2 细胞，显微镜观察细胞形态变化，确认最佳含药血清浓度。

1.6.4 心肌细胞缺氧/复氧模型制备及分组给药 按参考文献［7］模型制备方法，待细胞长满后调整细胞浓度为1×105cells/mL，接种于96 孔培养板，每孔100 μ L，37 ℃、5% CO2培养箱内培养24 h；将H2O2加入DMEM 高塘培养基中，使其终浓度分别为62.5、125.0、250.0、500.0、1 000.0 μ mol/L，分组处理H9C2 细胞，3、8、16 h 后显微镜观察细胞形态变化，确定H2O2最佳作用浓度和作用时间。

将H9C2 心肌细胞按随机数字表法分为5 组，A：H9C2 细胞组，B：H9C2 细胞+H2O2模型组，C：H9C2 细胞+H2O2模型+芪参益气组，D：H9C2细胞+H2O2模型+芪参益气+PI3K/AKT 信号通路阻断剂（wort）组，E：H9C2 细胞+H2O2模型+芪参益气+mitoKATP 特异性阻断剂（5-HD）组。按照上述分组处理细胞，A 组在空白血清培养液中常规培养32 h，B 组在空白血清培养液中培养24 h 后，在培养液中加入H2O2（250 μmol/L）8 h 后收样进行后续实验；C 组予含药血清处理24 h 后，进行H2O2（250 μmol/L）模型处理，8 h 后收样进行后续实验。其中D 组、E 组在含药血清处理23 h 后，分别向培养基中加入wort、5-HD 使其终浓度为100 nmol/L、100 μmol/L，1 h 后再进行H2O2处理，方法同B 组。

1.7 指标检测

1.7.1 CCK-8 法检测各组细胞活性 将浓度为1×105cells/mL 的心肌细胞接种于96 孔培养板，每孔100 μL，使每孔细胞数目为1×104个，然后将96 孔板放在37 ℃、5% CO2培养箱内培养24 h；将处理后的心肌细胞按照CCK-8 试剂盒的操作说明，斜贴孔壁向孔中加10 μL 的CCK-8 溶液，注意避免产生气泡，将孔板在培养箱内孵育2 h，用酶标仪检测每个孔在450 nm 波长处的OD 值，计算各组的H9C2 细胞存活率。每组设置6 个复孔进行实验。

1.7.2 Western blot 法检测各组H9C2 心肌细胞p-AKT、AKT 的表达水平 收集需要抽提蛋白的细胞用适量预冷的已加PMSF的RIPA裂解液混匀，充分裂解后12 000 r/min离心10 min，收集上清。BCA蛋白定量试剂盒确定蛋白浓度，根据样品浓度确定上样量。制备蛋白样品及聚丙烯酰胺凝胶，装好电泳装置，倒入电泳缓冲液，分别注入蛋白样品和maker，进行SDS-PAGE 电泳。待蛋白分离后，将胶小心的移入转膜缓冲液中，在转膜装置上进行转膜。丽春红染色检测转膜是否成功，将膜用TBST 漂洗3 次，每次5 min，然后用5%的脱脂奶粉37 ℃缓慢震荡2 h。根据说明书，用封闭液稀释AKT，p-AKT 抗体至合适浓度，4 ℃过夜孵育。用TBST 洗涤孵育一抗的膜，3 次，每次5 min。随后根据用量，按照说明书稀释HRP 标记的兔二抗/小鼠二抗，与膜37 ℃孵育1 h。用TBST 洗涤后，一体式化学发光仪检测。

1.7.3 全细胞膜片钳技术测KATP 通道电流

1.7.3.1 溶液配制 记录KATP 通道电流的细胞外液配制（mmol/L）：NaCl 137 g、CaCl 1.2 g、KCl 5.0 g、MgSO41.2 g、NaH2PO40.5 g、葡萄糖 10 g、HEPES 10 g（用NaOH 调节pH 至7.35～7.40）；记录KATP 通道电流的细胞内液配制（mmol/L）：NaCl 10 g、CaCl 1 g、KCl 125 g、MgATP 1 g、HEPES 10 g、EGTA 14 g（用KOH 调节pH 至7.1）。

1.7.3.2 膜片钳全细胞记录 将复钙后的H9C2 心肌细胞悬液滴入灌流槽中，置于倒置显微镜工作台上，待细胞贴壁后使用细胞外液灌流冲洗，在显微镜下选取贴壁牢固，边缘整齐，形态规整、横纹清晰，无自主收缩的细胞进行膜片钳实验；通过注射器给玻璃微电极充灌电极内液，使电极电阻为3～5 Ω。给予适当负压吸引，通过调节显微镜焦距及操作仪使电极与细胞表面不断靠近，最终充分接触，形成高阻封接，电阻值达到GΩ 以上，继续加大负压破膜，给予电容及串联电阻补偿，此时形成全细胞记录模式；将各组干预药物分别加入灌流槽中，待反应10～15 min 后进行电流记录。电流信号经Ag/AgCl 电极引导，由膜片钳AXON 200B 放大器放大，电流的记录采用电压钳制方式，数据的采集及分析处理由Pclamp 6.0 软件完成。

1.8 统计学处理

采用SPSS 25.0 统计软件分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较若方差齐时采用单因素方差分析（ANOVA），方差不齐采用非参数秩和检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 最佳含药血清浓度确定

实验结果显示，当含药血清加入比例为2.5%、5.0%、10.0%时，细胞状态良好，当含药血清浓度为15.0%时，发现细胞状态变差，所以为了保证药效和兼顾细胞状态，所以后期选择10.0%的含药血清浓度用于实验，见图1。

图1 不同浓度含药血清对细胞形态的影响Fig 1 Effects of different concentrations of drug-containing serum on cell morphology

2.2 心肌细胞缺氧/复氧模型制备中最佳H2O2 浓度及作用时间确定

实验结果显示，当H2O2只作用3 h 时，不管何种浓度对细胞均没有显著性的氧化损伤；作用8 h，当浓度为250 μmol/L时，对H9C2 细胞有显著的氧化损伤作用，当浓度增加或者作用时间延长至16 h时，细胞状态很差，不适合用于后期实验，所以选择250 μ mol/L的H2O2作用8 h 用于后期的实验，见图2。

图2 不同浓度及作用时间的H2O2对H9C2 心肌细胞的氧化损伤作用Fig 2 Oxidative damage of H2O2 at different concentrations and time of action on H9C2 cardiomyocytes

2.3 各组H9C2 心肌细胞活性的变化

CCK-8 结果显示，与A 组相比，B 组心肌细胞活性明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.001）；与B组心肌细胞相比，加入芪参益气滴丸的C 组心肌细胞活性增加，差异具有统计学意义（P＜0.001）；与C组相比，D 组和E 组心肌细胞活性明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 各组心肌细胞活性（n=6，±s）Tab 1 Myocardial cell activity in each group（n=6，±s）

表1 各组心肌细胞活性（n=6，±s）Tab 1 Myocardial cell activity in each group（n=6，±s）

注：与A 组相比，**P＜0.001；与B 组相比，◆◆P＜0.001；与C 组相比，▲P＜0.01，▲▲P＜0.001。

OD 值0.935±0.047 0.375±0.075**0.743±0.051◆◆0.529±0.068▲▲0.625±0.033▲83.609＜0.001组别A:H9C2 组B:H9C2+H2O2模型组C:H9C2+H2O2模型组+芪参益气组D:H9C2+H2O2模型组+芪参益气+wort 组E:H9C2+H2O2模型组+芪参益气+5-HD 组FP

2.4 各组H9C2 心肌细胞p-AKT、AKT 的表达水平

Western blot 结果表示各组间AKT 蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）；与A 组相比，B、C、D、E组p-AKT 蛋白表达显著降低，组间差异具有统计学意义（P＜0.001）；而与B 组相比，C、D、E 组p-AKT蛋白表达显著升高，组间差异具有统计学意义（P＜0.001）。见图3，表2。

表2 各组心肌细胞AKT 及p-AKT 蛋白相对表达量比较（n=3，±s）Tab 2 Comparison of the relative expression levels of AKT and p-Akt protein in cardiomyocytes of each group（n=3，±s）

注：与A 组比较,**P＜0.001;与B 组比较，##P＜0.001。

组别A：H9C2 组B：H9C2+H2O2模型组C：H9C2+H2O2模型+芪参益气组D：H9C2+H2O2模型+芪参益气+wort 组E：H9C2+H2O2模型+芪参益气+5-HD 组FP p-AKT 1.00±0.37 0.24±0.03**0.62±0.01**##0.40±0.01**##0.58±0.35**##306.165＜0.001 AKT 1.00±0.02 1.03±0.05 1.01±0.05 1.02±0.03 0.99±0.05 0.53 0.72

2.5 全细胞膜片钳实验

正常状态下，H9C2 心肌细胞KATP 通道是不开放的，因此，将细胞膜电位钳置于-40 mV，给予从-80～60 mV 的斜坡刺激诱发背景电流。在0 mV 测试电压下，与A 组心肌细胞相比，B 组心肌细胞外向电流显著增加，组间差异具有统计学意义（P＜0.001）；而与B 组比较，C 组电流有进一步的增加趋势，组间差异具有统计学意义（P＜0.001），表明氧化损伤心肌细胞经芪参益气干预后，呈现明显增强的外向电流。与C 组相比，D 组和E 组电流明显降低，组间具有统计学意义（P＜0.001）。提示PI3K/AKT 特异性阻断剂和mitoKATP 特异性阻断剂，均能不同程度地阻断这部分电流。见表3。

表3 电压0 mV 时各组心肌细胞mitoKATP 通道电流（n=10，±s）Tab 3 mitoKATP channel current of myocardial cells in each group at 0 mV voltage（n=10，±s）

表3 电压0 mV 时各组心肌细胞mitoKATP 通道电流（n=10，±s）Tab 3 mitoKATP channel current of myocardial cells in each group at 0 mV voltage（n=10，±s）

注：与A 组相比，**P＜0.001；与B 组相比，◆◆P＜0.001；与C 组相比，▲▲P＜0.001。

0 mV (pA)73.35±8.16 226.30±22.70**332.8±10.46◆◆176.88±15.85▲▲141.23±10.63▲▲449.63＜0.001组别A:H9C2 组B:H9C2+H2O2模型组C:H9C2+H2O2模型组+芪参益气组D:H9C2+H2O2模型组+芪参益气+wort 组E:H9C2+H2O2模型组+芪参益气+5-HD 组FP

以电流对电压作图，可得到心肌细胞KATP的电流-电压关系曲线（Ⅰ～Ⅴ）。在0～20 mV 测试电压范围内，外向电流显著增强，各组电流曲线中后段抬高，与背景电流比较，高出的部分即为开放的KATP 通道电流。见图4。

图4 各组心肌细胞KATP 通道电流图Fig 4 KATP channel currents of cardiomyocytes in each group

3 讨论

目前，再灌注已被确定为缺血性心脏病的可行治疗策略。然而，心肌组织供血不足后血流量的恢复通常导致心肌损伤的进一步加重。更严重的是，心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）可能产生严重的病理效应，如ROS、氮类物质过度生成，炎症介质释放和招募增加，免疫细胞活化，引起心肌细胞凋亡或坏死，最终导致心肌损伤和功能障碍［8，9］。作为介入术后面临的一种常见且不可避免的病理生理变化，MIRI 可导致心律失常、梗死面积扩大，是一种高发病率、高死亡率的疾病，且在年轻人中发病率呈上升趋势。因此，如何减轻MIRI 造成的损害问题引起了心血管领域学者的关注。尽管既往的研究部分揭示了MIRI 的分子机制，但MIRI 的具体机制仍不够明确，有效防治迫在眉睫。

中国古籍中并无对缺血再灌注损伤的描述，可以认为MIRI 是现代医学发展下的产物。根据再灌注治疗后产生一系列心肌损伤的临床表现，可将其归纳为“胸痹”“真心痛”范畴。目前，有关MIRI 的病因病机及辨证论治尚未形成统一的专家共识。李辉等［10］认为MIRI 的发生以痰瘀痹阻心脉为基础，阳衰阴盛，浊毒内生，心之体络受损为关键。何星灵等［11］认为再灌注治疗可复通血管，以活血化瘀通络为主，当属“祛邪”治标之法，然而“本虚”症状如短气、乏力、眩晕等仍存在。曹蛟等［12］则强调MIRI 以阳气亏虚为本，痰浊瘀血为标，温阳化气，痰瘀同治则阳气可复，脉道通畅。芪参益气滴丸由黄芪、丹参、三七、降香组成，是治疗气虚血瘀型胸痹的中药复方制剂，广泛用于临床治疗缺血性心衰、心绞痛等心血管疾病，以及心肌梗死的二级预防［13，14］。动物实验表明，芪参益气滴丸对CHF 大鼠有明显的心肌保护作用，可能通过抑制TGF-β1/Smads 通路，增强心肌纤维化程度；同时抑制caspase-3 信号通路，改善心肌细胞凋亡，从而起到保护心肌的作用［15］。此外，芪参益气滴丸可部分激活PI3K/Akt 信号通路，从而保护H9C2 细胞免受高糖诱导的系列损伤［16］。临床实验证实芪参益气滴丸能够有效保护AMI 患者PCI 术后血管内皮功能，减轻机体炎性反应，有助于提高心脏功能，且安全性较高［17］。作为多通路、多靶点的中药复方制剂，芪参益气滴丸包含有机酸类、黄酮类、醌类、皂苷类、氨基酸以及其他类化合物共53 种化学成分，各种不同类别的药物活性成分可通过协同作用共同对缺血/再灌注的心肌细胞起到保护作用。

本研究以芪参益气滴丸为代表方，采用血清药理学实验方法，进一步探讨中药复方对MIRI 作用效果及可能机制。实验通过SD 大鼠口服芪参益气滴丸制备不同浓度的含药血清，过观察其对心肌细胞形态变化以确定最佳浓度，结果显示10%为最佳含药血清浓度。此外，以体外培养的H9C2心肌细胞为实验对象，根据心脏在氧化损伤过程中氧化增强反应的原理，选用H2O2诱导细胞损伤，以模拟缺氧/复氧病理模型。本实验观察结果提示250 μmol/L 的H2O2预处理8 h 后，损伤作用作用最显著，可用于后期细胞实验。

MIRI 是多因素参与的复杂病理生理过程，涉及多种机制及信号通路，其中细胞调亡是心肌损伤的关键因素，决定心功能和预后。本研究采用CCK-8法检测心肌细胞存活率，结果提示芪参益气滴丸含药血清可显著提高氧化损伤后H9C2 心肌细胞的存活率，具有一定的心肌细胞保护作用。PI3K 及其下游靶丝氨酸/苏氨酸激酶AKT 属于一个保守的信号转导酶家族，参与多种细胞生物学过程［18］。PI3K/AKT 信号通路被认为是一种内源性负反馈调节机制，在应对有害的外部刺激时促进细胞存活，在MIRI 的病理进展中发挥关键作用［19］。其中，AKT 的活化形式，即p-AKT 可调节大量凋亡相关介质，例如，当p-AKT 被激活时，p-AKT 通过Bcl2家族成员（Bcl2，Bclxl，Bax 和Bad）作用于固有的细胞死亡通路，以及通过caspase 家族成员（cleaved caspase 3，caspase 8 和caspase 9）作用于外部的细胞死亡通路［20］。本研究结果提示，芪参益气滴丸含药血清明显激活氧化损伤心肌细胞中p-AKT 蛋白的表达，而加入PI3K/AKT 抑制剂的心肌细胞中，p-AKT 蛋白表达下降，同时心肌细胞的活性也相对减少，表明芪参益气滴丸可干预PI3K/AKT 信号通路中p-AKT 蛋白的表达，同时增加心肌细胞活性。

ATP 敏感性钾通道（KATP 通道）是一种由细胞内ATP 浓度所调控的内向整流钾离子通道［21］。Tinker 等［22］研究发现KATP 通道大量存在于心房、心室、房室传导系统等心脏组织当中，其不仅能够改善心肌细胞的缺血预适应，也在心肌细胞的信号转导途径中发挥作用，在抵抗MIRI 的过程中扮演着十分重要的角色。Penna 等［23］认为，激活KATP通道能够减少心肌细胞在各种应激状态下的损伤和凋亡。KATP 通道的活力由细胞内的KATP 通道数量和开放程度共同决定，其活动与细胞代谢密切相关，并受到细胞内ATP 浓度的调节：在生理情况下，ATP 在细胞内具有较高浓度，此时KATP 通道受到抑制而关闭；而当心肌细胞受到缺血、再灌注损伤和细胞凋亡等病理刺激时，细胞内的ATP 会被消耗，浓度降低，此时KATP 通道不再受到抑制，导致ATP 通道开放，钾离子外流，细胞膜的静息电位降低，动作电位缩短，钙离子的内流减少，心肌细胞的钙超载减轻［24］，从而降低心肌细胞的耗能，增加其应激耐受性，起到保护心肌的作用［25］。本研究发现，当细胞受到氧化损伤后，细胞外向电流显著增加，从而产生应激的心肌保护作用；在氧化损伤的基础上给予芪参益气干预后，心肌细胞电流明显增加，与模型组相比具有统计学意义。当加入mito-KATP 特异性阻断剂5-HD 后，电流被部分阻断，表明该电流的产生与mitoKATP 通道激活密切相关，推测芪参益气滴丸可能具有KATP 通道开放剂样作用。此外，加入阻断剂的心肌细胞活性较芪参益气滴丸干预组显著下降，表明mitoKATP 通道的开放可能对心肌细胞的具有保护作用。

综上所述，本实验证实芪参益气滴丸通过激活H9C2 心肌细胞中p-AKT 蛋白的表达及KATP 通道的开放，从而对心肌细胞起到保护作用。但芪参益气滴丸的具体机制及相关联级反应尚未探讨，需要进行进一步的实验以明确其机制。