循环肿瘤细胞检测对于结肠癌患者的临床意义分析

陈 维 李苏卿 朱 玮 吕成余

南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院)普外科，江苏省南京市 210006

随着我国饮食结构的变化，结肠癌发病率逐年增高，对结肠癌相关检测的深入研究非常必要。循环肿瘤细胞(Circulating tumor cells，CTCs)检测是近年来开展的一种新型检测技术，是目前三种热门非侵入性液体活检方法中的一种，对肿瘤的诊断和预后有重要的参考价值。随着检测技术的发展，目前CTCs的检测已经可以达到十分精确的水准[1]，其临床价值也日益受到重视。对于结肠癌与CTCs关系的文献目前尚不多，本文拟对结肠癌患者CTCs与病理及预后之间的关联进行探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2017年2月—2018年2月在我院普外科住院并接受手术的62例结肠癌患者，其中男39例，女23例，年龄39～81岁。纳入标准：(1)经肠镜及活检病理学确诊；(2)排除其他肿瘤史；(3)入院前未接受过任何肿瘤相关治疗；(4)预计生存期至少半年以上。以上患者均接受结肠癌根治术，切除标本均行常规病理学检查。

1.2 CTCs检测 以上患者均于术前应用专用的Cellsave管采集肘正中静脉血7.5ml。试剂及检测：人外周血白细胞去除试剂盒(江苏莱尔生物医药科技有限公司)，荧光原位杂交样品处理试剂盒(江苏莱尔生物医药科技有限公司)。CTC检测采用莱尔染色体扩增型CTC检测SOP技术。阳性标准：CTC细胞≥2即为阳性，<2为阴性，见图1。

图1 循环肿瘤细胞(CTCs)镜下表现

1.3 术后随访 对所有患者进行术后随访跟踪，除死亡随访终止外，随访期36个月。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0数据统计分析软件完成，计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CTCs检测结果与临床病理的相关性 患者CTCs阳性与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关(P>0.05)，与病理T分期、淋巴转移及脉管侵犯有关(P<0.05)，见表1。

表1 CTCs结果与临床病理的相关性

2.2 CTCs检测结果与术后转移复发的相关性 CTCs阴性患者术后36个月随访时间内1例出现术后复发，无死亡。CTCs阳性患者出现复发或转移9例，死亡7例。两者比较有统计学差异(χ2=4.142，P=0.042<0.05)，见图2。

图2 两组生存曲线

3 讨论

目前CTCs的检测方法较多，但每种方法均有局限性。笔者选取的莱尔染色体扩增型CTC检测是基于染色体扩增平台的Cyttel-CTC检测技术，通过对不同实体瘤选择不同标志物进行相对特异性的检测，实现了高灵敏性的检出，在早期患者中，同样有较高检出率。

进入血液循环中的肿瘤细胞大部分被免疫系统吞噬或被血液中调节细胞消灭[2]，有极少数能逃避免疫侵蚀，并且在特定条件下离开血液循环，侵入原发或远处器官，即临床出现复发或远处转移[3]。目前已在乳癌、胃癌、胰腺癌及肝癌等多种恶性肿瘤中发现了CTCs 存在的证据[4-7]。研究显示，CTCs 能有效预测多种肿瘤的复发转移及预后，同时可以作为预测相关辅助治疗疗效的评价标准[8-11]。

本文结果发现，结肠癌患者CTCs的出现与性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关，而与病理T分期、淋巴转移及脉管侵犯有关。据此可以推测出在结肠癌的发生发展过程中，肿瘤侵犯基底膜后，进而肿瘤细胞进入血液循环及淋巴循环，导致循环肿瘤细胞的出现。CTCs的发生和肿瘤浸润局部毛细血管及毛细淋巴管密切相关。CTCs阳性的患者，即使手术能达到R0切除，体内依然有存在肿瘤细胞的可能，因此肿瘤复发的风险大大增加。对两组患者进行36个月的随访，证实了 CTCs阳性患者的肿瘤复发率明显高于CTCs阴性的患者。由此可见CTCs检测对结肠癌的预后有相当重要的意义。

因此临床上对于术前 CTCs阳性的结肠癌患者，即使行R0切除，或者术后病理分期较早，仍然要考虑到预后不佳的可能，可适当加强术后全身性辅助治疗的时间及强度，缩短术后复查周期。有研究发现CTC 检测可以一定程度反映转移灶肿瘤细胞对化疗药物的敏感性[12]，因此在辅助治疗期间也可行多次CTC检测，从细胞水平对化疗方案或药物疗效进行评价。由于 CTCs的出现和局部毛细血管及毛细淋巴管的浸润密切相关，而肿瘤患者外周血中的CTCs半衰期为1～2.4h[13]，存活时间短，假阴性的可能性增大。因此对于术前CTCs阴性的患者，如果术后病理有脉管侵犯，也应该作为预后不佳的考虑因素。

综上所述，循环肿瘤细胞检测作为一种新型检测技术，其结果与结肠癌术后病理分期及预后有相关性，CTCs阳性患者预后较阴性患者差。