双醋瑞因胶囊结合艾瑞昔布片对膝骨关节炎患者的治疗效果及对COX-2、Wnt-3α、骨代谢水平的影响

胡 恒，彭 伟，张 忠

(四川省骨科医院药剂科，四川 成都 610041)

膝骨关节炎是一种以多因素导致的关节软骨退行性变继发性骨质增生为诱因的慢性骨关节疾病，以膝关节为主要发病部位[1-2]。以活动受限、关节活动不灵敏、关节单双侧疼痛等为主要临床表现，且常伴继发性滑膜炎，并对滑膜、骨组织等关节周围支持结构造成影响。中老年患者作为主要发病群体，随社会老龄化发展加速，其发病率随之呈逐年递增趋势[3-4]。临床常以西医药物作为膝骨关节炎的治疗手段，但单一使用治疗效果欠佳，因此，寻求更加安全有效的治疗方案显得尤为关键，而有些患者则通过研究膝骨关节炎发病分子机制，以期寻找新的治疗及疗效评估靶点。有研究表示，膝骨关节炎患者环氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)、血清分泌型糖蛋白(serumo sekretorinis glikoproteinas-3α，Wnt-3α)水平出现异常。COX-2能够刺激关节滑液中前列腺素F2(prostaglandin F2，PGF2)水平异常升高，促进软骨基质中Ⅱ型胶原分解，具有抑制合成代谢的作用，从而破坏机体骨组织[5]。Wnt-3α水平的提升能够促进机体关节软骨组织过度分化，与关节炎病情具有密切联系[6]。本研究使用双醋瑞因胶囊联合艾瑞昔布片联合对膝骨关节炎进行治疗，旨在探究该治疗方案对患者COX-2、Wnt-3α及骨代谢指标水平的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年4月—2020年4月在我院收治的膝骨关节炎患者160例为研究对象，根据用药方式不同，分为单药治疗组、联合治疗组，每组各80例。其中Ⅰ级半月板损伤70例、Ⅱ级半月板损伤61例、Ⅲ级半月板损伤29例。两组性别、年龄、病情、体重指数(body mass index，BMI)、凯尔格伦-劳伦斯(Kellgren-Lawrence)分级等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 两组一般资料比较Table 1 Comparison of general data between two groups

1.2纳入标准与排除标准 纳入标准：所有患者均符合中华医学会对膝骨关节炎的诊断标准[7]，且半年内未进行膝骨关节炎相关物理治疗及手术者。自愿参与本研究，患者及家属签署知情同意书，并获得医院伦理委员会批准，批准文号(2018)伦审第(63)号。

排除标准：①病历资料不全者；②合并心肺、肝肾等重要脏器功能不全者；③合并恶性肿瘤者；④患有凝血系统、内分泌系统、胃肠道系统等原发性疾病者；⑤合并类风湿性关节炎、代谢性骨病、化脓性关节炎等或者并发有关节内游立体、急性滑膜炎及严重关节畸形者或者膝关节周围皮肤红肿热痛或皮肤破损者；⑥继发性膝关节骨性关节炎；⑦有酒精、药物滥用病史者；⑧精神疾病、沟通障碍者；⑨妊娠期或哺乳期妇女；⑩研究中所用药物过敏或不耐受者。

1.3方法

1.3.1治疗方法 单药治疗组采用艾瑞昔布片进行治疗。药物使用剂量为0.1 g/次，温水送服，分早晚两次服用。联合治疗组在单药治疗组基础上联合双醋瑞因胶囊进行治疗。药物使用剂量按照50 mg/次，温水送服，1次/d。两组均连续治疗4周。

1.3.2标本采集与检测 分别抽取患者治疗前后静脉血6 mL，要求血液标本无脂血和溶血，置于无抗凝剂血管中，室温条件下凝固，以2 000 r/min离心机离心处理20 min，静置分离上层血清，-70 ℃环境中保存待检。

酶联免疫吸附法检测骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase，BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate-resistant acid phosphatase 5b，TRACP-5b)、白细胞介素1β(interleukin-1β，IL-1β)、COX-2水平：取50 mm碳酸盐包缓冲液对抗原进行稀释，在聚苯乙烯的反应孔内加入使用50 mm碳酸盐包缓冲液稀释后抗原，进行加盖处理之后存放24 h在摄氏度4 ℃冰箱内，第2日进行3次洗涤，然后抛干，将稀释液[pH值为7.4，0.02 mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(TRIS hydrochloride，Tris-HCl缓冲液)]稀释的待测标本0.1 mL放入每个孔中，同时放入阳性、阴性对照标本，42 ℃下存放1h，移除液体并洗涤3次抛干，将BALP、TRACP-5b、IL-1β、COX-2蛋白抗体0.1 mL分别加入每个孔中，存放60 min，移除液体后。进行3次洗涤并抛干，在每个孔中放入低物液(0.1 mol/L的Na2HPO4，0.05 mol/L的枸橼酸)，混匀加入0.1 mL邻苯二胺，行20 min遮光处理，放入2 mol/L H2SO40.05 mL于每个孔内，终止反应。最后使用酶标仪检测A450值检测BALP、TRACP-5b、IL-1β、COX-2。

1.3.3散射比浊法检测人肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)水平 采用散射比浊法检测炎症因子TNF-α的水平，根据待检验炎症因子TNF-α中提取的血清样品在凝固的过程中发生变化的散射光确定检测，在光探检测器为90 °直角的单色光源中向血清样本加凝血激活剂，在样品凝块的过程中，散射光的强度会慢慢增加，当血清样本完全凝固后，光探测器会发生变化，会送到检测器上处理并且描出凝固曲线后检测炎症因子TNF-α变化。

1.3.4放射免疫法检测骨钙素(osteocalcin，OC)、Wnt-3α水平 加入适量缓冲液、乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA)溶液、标准液和标记物抗血清，震混摇匀在4 ℃下放置24 h。取出后加入免疫分离剂，在4 ℃下放置15 min，离心后弃上清，测沉淀物放射性计数。

1.3.5膝关节功能、疼痛评分 采用骨关节炎西大略湖-麦克马斯特(Western Ontario McMaster，WOMAC)指数评分[8]疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale，VAS)评分)[9]对患者膝关节功能及关节疼痛情况进行评价。WOMAC评分将评估内容分为关节功能、疼痛、僵硬三个维度，分值为0～100分，得分越高，表示关节功能障碍越严重。VAS量表评分总分100分，VAS评分越低指疼痛缓解。

1.3.6治疗有效率 按照显效、有效、无效标准对患者临床治疗效果进行评价。显效：患者膝关节疼痛消失，膝关节功能基本恢复。有效：患者膝关节疼痛情况，减轻膝关节功能好转；无效：膝关节功能未出现好转甚至加重。总有效率=(显效+有效)/总例数。

1.4统计学方法 应用SPSS 21.0统计软件分析数据。计量资料比较采用独立样本的t检验和配对t检验，计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两组血清BALP、TRACP-5b、OC水平比较 治疗前，两组血清BALP、TRACP-5b、OC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组血清BALP、TRACP-5b水平升高，TRACP-5b水平降低，与单药治疗组相比，联合治疗组血清BALP、OC水平升高，TRACP-5b水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组血清BALP、TRACP-5b、OC水平比较Table 2 Comparison of serum levels of BALP, TRACP-5b and OC between two groups

2.2两组炎症因子水平比较 治疗前，两组血清IL-1β、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组血清IL-1β、TNF-α水平均低于治疗前，联合治疗组低于单药治疗组，差异有统计学意义(P<05)，见表3。

表3 两组血清IL-1β、TNF-α水平比较Table 3 Comparison of serum IL-1β and TNF-α levels between two groups

2.3两组血清YKL-40、COX-2、Wnt-3α水平比较 治疗前，两组血清YKL-40、COX-2、Wnt-3α比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组血清YKL-40、COX-2、Wnt-3α水平均低于治疗前，联合治疗组均低于单药治疗组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 两组血清YKL-40、COX-2、Wnt-3α水平比较Table 4 Comparison of serum YKL-40, COX-2 and Wnt-3α levels between two groups

2.4两组膝关节功能、VAS评分比较 治疗前，两组膝关节功能、VAS评分比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，两组膝关节功能、VAS评分均低于治疗前，联合治疗组均低于单药治疗组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

表5 两组膝关节功能、VAS评分比较Table 5 Comparison of knee function and VAS scores between two groups 分)

2.5两组治疗有效率比较 联合治疗组治疗有效率高于单药治疗组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表6。

表6 两组治疗有效率比较Table 6 Comparison of treatment response rates between two groups (n=80，例数，%)

3 讨 论

膝骨关节炎以膝关节软骨破坏、变形、关节表面骨赘为主要临床体现，属于临床常见进展性、退化性、慢性关节疾病[10]。据流行病学数据统计显示，50岁以上人群发病率在55%，发病率较高，且受人口老龄化加重，其发病率呈逐年上升趋势。且随病情发展，均出现不同程度的膝关节功能障碍，严重威胁患者日常生活，且存在较大致残风险[11-12]。相关资料显示，关节附属结构的综合病理变化为膝骨关节炎的主要病理特征。但其发病机制较为复杂，临床尚无有效根治手段，以缓解、控制病情发展为主要治疗基础。目前，临床治疗中通过患者病情不同采取不用治疗手段，包括药物治疗、手术治疗等，但单一药物治疗，效果并不理想[13-14]。

双醋瑞因是蒽醌衍生物的一种，属于软骨保护剂，对肿瘤坏死因子具有明显抑制作用[15]。相关研究证实，双醋瑞因对软骨基质物质形成具有刺激作用，对软骨修复产生促进效果，从而改善患者关节功能[16]。艾瑞昔布作为选择性COX-2抑制剂，对细胞中COX-2 mRNA表达具有抑制效果，从而减轻机体炎症反应，达到消炎止痛的效果。但其只能减轻病情症状，无法阻止病情发展，且长期服用会出现消化道溃疡、心血管疾病等不良事件[17]。

有研究表示，膝骨关节炎患者骨代谢状况出现明显异常。BALP、OC、TRACP-5b为常用的评价骨代谢状况的指标。由成骨细胞分泌的BALP可局部提高磷酸含量，能够对成骨细胞活性作出直观反应。由破骨细胞分泌的TRACP-5b，可对破骨细胞及骨吸收能力进行准确评估。OC由多种细胞分泌合成，在骨吸收、骨形成收耦联时，对骨形成可进行有效反映[18-19]。本研究结果显示，采用双醋瑞因胶囊联合艾瑞昔布片对膝骨关节炎进行治疗，血清BALP、OC水平升高，TRACP-5b水平降低，与上述内容一致，由此证实，二者联合治疗可有效促进骨代谢水平，改善患者膝关节功能。

研究表明，炎症因子是引起疼痛肿胀、破坏关节软骨的重要因素，在疾病的发生发展中发挥重要作用[20]。IL-1β可促进关节软骨分解，相关研究表明，IL-1β对软骨细胞基质金属蛋白酶的分泌具有促进效果，且不受其抑制剂无影响，导致软骨细胞基质降解，造成软骨受损[21]。TNF-α作为常见炎症因子，对软骨细胞、滑膜细胞分泌炎性递质具有刺激作用，并降解关节软骨、胶原，造成边缘骨质受损，导致患者病情加重[22]。本研究结果显示，采用双醋瑞因胶囊联合艾瑞昔布片对膝骨关节炎进行治疗，有效降低血清IL-1β、TNF-α水平，使机体炎症因子水平降低，减轻机体炎症反应，治疗效果显著。

相关研究显示，关节液作为生物标志物，能够对病变病理过程直接进行提示[23]。YKL-40属于糖蛋白类属壳质酶蛋白，由软骨细胞、巨噬细胞等多种细胞分泌生成，对软骨细胞增殖具有促进作用，并具有保护作用。另有研究证实，YKL-40水平异常升高，提示患者病情加重[24]。诱导酶COX-2，在炎症反应过程中发挥重要作用，在生理状态下呈低表达，当其受到刺激时其水平呈异常高表达。相关研究显示，COX-2对软骨细胞转化具有促进作用，使其分泌的胶原酶、PGE2含量增加，加速软骨基质分解，增强关节软骨免疫反应，对软骨组织造成破坏[25]。本研究显示，采用双醋瑞因胶囊联合艾瑞昔布片对膝骨关节炎进行治疗，患者血清YKL-40、COX-2、Wnt-3α水平明显降低，研究结果与上述内容一致。由此证实，二者联合治疗可有效抑制YKL-40、COX-2、Wnt-3α，缓解患者疼痛，降低关节软骨损伤，提高膝关节功能。

综上所述，通过双醋瑞因胶囊联合艾瑞昔布片对膝骨关节炎进行治疗，有效缓解疼痛，有效提高骨代谢水平，减轻机体炎症反应，降低关节软骨损伤，提高膝关节功能。为临床治疗膝骨关节炎提供一定参考依据。