四川不同产地何首乌中二苯乙烯苷和游离蒽醌含量的比较研究

姜建辉，夏 清，汤丹丹，张志强

（四川中医药高等专科学校，四川 绵阳 621000）

何首乌为蓼科植物何首乌（polygonum multiflorum thunb）的干燥块根，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便的功效[1]。现代研究表明，何首乌有增强免疫能力、抗肿瘤和抗衰老等多种药理作用，主要与其中含有的二苯乙烯苷、大黄素以及大黄素甲醚等多种活性成分有关，是中医临床常用的药材之一[2-4]。四川作为何首乌的主要产区之一，最早记载于清·雍正《叙州府志》：“药材有何首乌”[5]。何首乌在川内各个地区均有分布，其中成都金堂、雅安、泸州、乐山、凉山州和遂宁等地是四川何首乌的主要产区[6]。然而，对四川何首乌的品质比较研究鲜有报道。本研究主要以四川五个产地不同产地何首乌中二苯乙烯苷和游离蒽醌的含量为指标，初步评价四川5 个产地何首乌的质量，以期对何首乌的开发利用提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

1260 液相色谱仪系统，安捷伦科技（中国）有限公司；SENCOR-201 旋转蒸发器，上海申顺生物科技有限公司；DV215CD 电子天平，美国奥豪斯有限公司；SHZ-Ⅲ型循环水真空泵，上海亚荣生化仪器厂。

1.2 试剂与药材

二苯乙烯苷对照品，批号：110844，纯度≥98.0%；大黄素对照品，批号：110756，纯度≥98.0%；大黄素甲醚对照品，批号：110758，纯度≥98.0%；色谱甲醇，飞世耳股份有限公司，美国；水为超纯水。其他试剂均为分析纯。

何首乌来源见表1。经鉴定为何首乌的干根，是由四川中医学院药用植物教研室王华东主任主持鉴定。

表1 药材来源

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：ZPRBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B），为流动相梯度洗脱，见第7 页表2，检测波长：254 nm；流速：1 mL/min-1；柱温：25 ℃。进样量：20 μL。二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的HPLC 图见第7 页图1。

图1 混合对照品（A）和样品（B）HPLC 图

表2 梯度洗脱条件表

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取二苯乙烯苷对照品10.75 mg、大黄素对照品4.68 mg、大黄素甲醚对照品4.08 mg，共同置于50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度线，制成质量浓度分别为43 μg·L-1、93.6 μg·L-1和91.6 μg·L-1的储备液备用。

2.3 样品溶液的制备

取本品粉末（过4 号筛）约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定质量，加热回流30 min，冷却，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静置，上清液滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系

将储备液加甲醇稀释，制得二苯乙烯苷的质量浓度分别为8.6、17.2、43、107.5、215 μg·L-1；制得大黄素的质量浓度分别为9.36、18.72、37.44、46.8、93.6 μg·L-1；制得大黄素甲醚的质量浓度分别为4.08、8.16、16.32、40.8 μg·L-1、81.6 μg·L-1。分别进样后，以二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚的质量浓度为横坐标，以各自的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。二苯乙烯苷的标准曲线为Y=3.2287X-5.8358，r=0.9998；大黄素的标准曲线为Y=19.259X-20.515，r=0.9999；大黄素甲醚的标准曲线为Y=6.9715X-2.0021，r=0.9997。结果表明，二苯乙烯苷在8.6μg·L-1～215 μg·L-1的范围内线性关系良好；大黄素在9.36 μg·L-1～93.6 μg·L-1的范围内线性关系良好；大黄素甲醚在4.08 μg·L-1～81.6μg·L-1的范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验

取适量三者混合对照品溶液，按上述色谱条件连续测定6 次，计算得二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚峰面积的RSD 分别为4.63%、1.06%和1.34%，表明该仪器精密度良好。

2.6 重复性实验

取成都金堂产何首乌样品，按供试品溶液制备方法，制备6 份样品，按上述色谱条件测定6 份样品的峰面积，计算得二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚含量的RSD 分别为3.96%、0.92%和1.31%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性实验

取成都金堂产何首乌样品，按供试品溶液制备方法，分别于1、2、4、8、12、24 h 进样，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算得二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚峰面积的RSD 分别为4.27%、1.00%和1.59%，表明样品在24 h 内稳定性良好。

2.8 加标回收实验

精密称取已知含量的成都金堂产何首乌样品1.0 g，平行6 份，加入为已知含量样品中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚含量80%、100%、120%的对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算加标回收率。结果表明，二苯乙烯苷的平均回收率为101.75%，大黄素的平均回收率为102.38%，大黄素甲醚的平均回收率为102.45%，RSD 分别为2.54%、2.19%、2.47%。

2.9 样品测定

取不同产地何首乌样品，按“2.3”项下样品制备方法制备后进行含量测定，分别计算3 种成分的含量，其结果见表3。并用t 检验分别比较各产地的二苯乙烯苷、大黄素和大黄素甲醚含量的差异，结果见第8 页表4。

表3 何首乌不同产地含量测定结果（x±SD，n=3）

3 结果讨论

3.1 不同产地何首乌中二苯乙烯苷含量的比较

由表4 可知，何首乌中二苯乙烯苷含量，成都金堂显著高于遂宁和乐山，与雅安和西昌的没有显著差异；西昌和雅安、乐山的没有显著性差异；雅安显著高于乐山。可知，成都金堂、雅安和西昌三地产的何首乌中二苯乙烯苷含量较高。

表4 各产地二苯乙烯苷、游离蒽醌（大黄素和大黄素甲醚含量之和）的t 检验结果

3.2 不同产地何首乌中游离蒽醌含量的比较

何首乌中游离蒽醌含量，成都金堂显著高于西昌、乐山和雅安，和遂宁没有显著性差异。遂宁含量显著性高于西昌、乐山和雅安；西昌、乐山和雅安没有显著的差异。可知，成都金堂和遂宁产的何首乌中游离蒽醌含量较高。