Hsp90α联合TPA、CRP检测在恶性肿瘤临床诊断中的意义

杜琴，王强，蔡艳娟，杜娟，张茂鑫，郭晓兰

(川北医学院，1.附属医院检验科；2.医学检验系；3.转化医学研究中心，四川 南充 637000)

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的公共卫生问题之一，最新癌症报告显示，我国平均每分钟有8.2个人被确诊，且发病率和死亡率呈持续上升态势。肺癌和消化道肿瘤是我国主要的恶性肿瘤，临床上确诊主要依靠穿刺活检或胃肠镜等侵入性操作[1]，患者体感较差。随着技术的发展，肿瘤标志物在临床应用愈发广泛，组织多肽抗原(tissue polypeptide antigen，TPA)作为一种广谱肿瘤筛查标志物[2]，在恶性肿瘤患者血清中具有较高检出率。有研究[3-4]发现，恶性肿瘤在病理生理上与炎症组织相似，炎症组织损伤可能引起肿瘤的发生。因此，近年C反应蛋白(CRP)在诊断恶性肿瘤方面也逐渐受到重视。热休克蛋白90α(heat shock protein 90α，Hsp90α)是一类具有分子伴侣特性的蛋白，在肿瘤细胞增殖过程中通过保护客户蛋白参与肿瘤的多种行为，且能够帮助肿瘤生长、侵袭和转移[5]。本研究旨在探讨Hsp90α联合TPA、C反应蛋白CRP检测在恶性肿瘤临床诊断中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年2月至2019年6月川北医学院附属医院收治74例术后病理明确诊断的恶性肿瘤患者为肿瘤组，另选48例同期肺部及消化道炎症病变患者为炎症组，49名健康体检者为非炎症组。肿瘤组中，男性52例，女性22例；年龄44～81岁，平均(62.42±9.45)岁；肺癌28例，食管癌22例，消化道肿瘤19例，其他肿瘤5例。炎症组中，男性32例，女性16例；年龄36～83岁，平均(66.42±13.92)岁。非炎症组中，男性32名，女性17名；年龄39～85岁，平均(62.00±12.43)岁。三组对象年龄、性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)。 纳入标准：(1)经术后病理明确诊断为恶性肿瘤者；(2)初次确诊，既往未行手术、放化疗及靶向治疗者。排除标准：(1)存在意识及表达障碍者；(2)中途退出研究者。

1.2 方法

1.2.1 Hsp90α、TPA及CRP检测 采集清晨空腹血4 mL，3 500 rpm离心5 min，采用酶联免疫吸附法测定血浆中Hsp90α浓度(烟台普罗吉生物科技发展有限公司，批号：201809002)；化学发光法测定血清中TPA浓度(意大利索灵公司，批号：17845A)；用速率散射比浊法测定血清中CRP浓度(贝克曼库尔特公司，批号： M909057)。

1.2.2 阳性判断标准 Hsp90α正常参考范围0～82.06 ng/mL，Hsp90α>82.06 ng/mL为阳性；TPA 正常参考范围0～75 ng/mL ，TPA >75 ng/mL为阳性；CRP正常参考范围0～5 mg/mL，CRP>5 mg/mL为阳性[6]。

1.3 观察指标

(1)Hsp90α、TPA和CRP水平；(2)Hsp90α、TPA和CRP单一检测和联合检测对恶性肿瘤的诊断效能。

1.4 统计学分析

采用SPSS19.0软件对数据进行分析与处理。计量资料以[M(Q1,Q3)]表示，采用t检验；诊断效能采用ROC曲线分析，曲线下面积(AUC)曲线下面积(AUC)>0.75，提示诊断价值较高。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组对象Hsp90α、TPA和CRP水平比较

肿瘤组Hsp90α水平均明显高于非炎症组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 Hsp90α、TPA和CRP对炎症性疾病的诊断效能

ROC曲线分析显示， Hsp90α、TPA和CRP的AUC分别为0.608、0.617和0.924，CRP对炎症性疾病的诊断效能最大。见图1。

2.3 Hsp90α、TPA和CRP对非炎症性疾病的诊断效能

ROC曲线分析显示， Hsp90α、TPA和CRP的AUC分别为0.707、0.711和0.560，均小于0.75，表明健康人群外周血Hsp90α、TPA和CRP浓度不高。见图2。

2.4 Hsp90α、TPA和CRP对恶性肿瘤的诊断效能

ROC曲线分析显示， Hsp90α、TPA和CRP的AUC分别为0.593、0.587和0.321，Hsp90α对恶性肿瘤的诊断效能相对较好，但灵敏度和特异性不高，分别仅为62.2%和58.8%。见图3和表2。

2.5 Hsp90α、TPA和CRP联合检测对恶性肿瘤的诊断效能

ROC曲线分析显示，Hsp90α&TPA、Hsp90α&CRP、TPA&CRP和Hsp90α&TPA&CRP的AUC分别为0.593、0.784、0.679和0.784，Hsp90α&CRP联合检测能提高对恶性肿瘤的诊断效能；而TPA的联合检测，并不能提高恶性肿瘤的检出灵敏度和特异性。见图4。

2.6 Hsp90α和TPA与CRP的比值对恶性肿瘤的诊断效能

ROC曲线分析显示， Hsp90α/CRP、TPA/CRP的AUC分别为0.765和0.742，Hsp90α与CRP进行比值计算后，灵敏性和特异度提高，提高了对恶性肿瘤的诊断效能。见图5。

2.7 Hsp90α、TPA和CRP单独和联合运用对恶性肿瘤的诊断效能

ROC曲线分析显示， Hsp90α对恶性肿瘤的诊断方面较TPA稍具优势(0.593>0.587)，灵敏度达74.3%，但特异性稍显不足，仅为40.2%；其联合CRP检测或通过与CRP比值的计算后，可明显提高对恶性肿瘤的诊断效能，达到0.784或0.765，灵敏度和特异性亦增加。与TPA的联合检测，对恶性肿瘤诊断效能无提高，灵敏度和特异性亦无变化。见表2。

表2 Hsp90α、TPA和CRP单独和联合运用对恶性肿瘤的诊断效能

3 讨论

近年来，恶性肿瘤的发病率逐年上升，多数患者发病早期无典型的临床不适症状或症状轻微，至初次就诊时就已经是晚期。因此，恶性肿瘤的死亡率居高不下，严重威胁着人类健康。自上世纪起，多种肿瘤标志物应用于恶性肿瘤的早期筛查和辅助诊断，但单一肿瘤标志物的检测灵敏度仍然较低，特异性不足，远低于临床预期。目前，更推荐采用肿瘤标志物的联合检测方法，以期提高恶性肿瘤的检出率，增加对恶性肿瘤的诊断特异性[7]。

TPA是一种广谱的肿瘤筛查标志物，与肿瘤细胞的DNA合成相关，在多种肿瘤患者体内均发现增高[8]，但有相当一部分非恶性肿瘤患者外周血TPA亦发现增高，阳性率约为14%～35%，故TPA尚不能很好的区分恶性肿瘤与炎症性疾病；Hsp90α是细胞内一种高度保守蛋白，正常主要辅助蛋白折叠、维持胞内多种信号传导蛋白的稳定性；而在荷瘤条件下，与肿瘤细胞的增殖分化以及各种癌症中凋亡相关分子有关[5]。有研究人员发现Hsp90α能加强DNA聚合酶polη的功能，参与DNA损伤反应和细胞凋亡[9]，Hsp90α还能调节细胞内多种蛋白质的合成和功能，促进肿瘤的发生发展[10]，并与肿瘤的分级分期和侵袭转移有关[11]。本研究发现，TPA和Hsp90α在恶性肿瘤患者体内均增加(P<0.05)，但Hsp90α对恶性肿瘤的诊断性能更胜一筹，但特异性稍显不足，将两者联合检测对恶性肿瘤的诊断价值也未见明显提高(P>0.05)。

1800年前，Galenus发现恶性肿瘤在病理生理上与炎症组织相似，炎症组织损伤可能引起肿瘤的发生[12]。19世纪，学者发现肿瘤细胞内有白细胞的存在，这是癌症与慢性炎症之间存在一定相关性的第一个证据[13]。而慢性炎症诱导肿瘤发生发展的机制十分复杂，可能与局部微环境的反复组织损伤修复，使活化的炎性细胞释放大量炎症因子及介质，致细胞DNA链断裂，诱发基因突变，或引起原癌基因活化和抑癌基因失活，最终导致肿瘤的发生[14-15]。因此，部分学者将肿瘤相关性炎症归于肿瘤的第七大生物学特征。CRP是经典的急性时相反应蛋白，在炎症性疾病体内明显升高。近年来，CRP在诊断恶性肿瘤方面也逐渐受到重视。本研究ROC曲线分析结果发现，Hsp90α和CRP联合检测或计算Hsp90α/CRP比值，可以明显提高诊断效能(P<0.05)。

综上，Hsp90α是一种全新的肿瘤标志物，和CRP的联合检测或通过Hsp90α/CRP比值的计算，可提升恶性肿瘤的检出率，对炎症性疾病和恶性肿瘤的鉴别亦有一定价值。