蜂胶提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的应用研究

卢 静 张 环 陈 欣

(重庆登康口腔护理用品股份有限公司,重庆 400025)

牙周炎是一种由牙菌斑引起的慢性感染性疾病，其病程的结果将会导致牙根表面牙周附着丧失和邻近牙槽骨吸收，最终导致牙齿的丧失[1]。目前大多数研究均认为，牙周炎的大多数组织损害，是由于机体对菌斑刺激的防御过度所致，大量证据提示牙周组织中活性氧引起的氧化应激在牙周炎发生发展中起着重要的作用[2,3]。因此，减少牙周局部组织，体内活性氧(Reactive oxygen species, ROS)的产生，促进氧化-抗氧化防御系统的平衡，可能对于牙周炎具有潜在的预防及治疗作用[4]。抗氧化剂可减少牙周组织ROS的产生，对牙周炎具有一定作用。研究发现，配合局部抗氧化的基础治疗效果明显优于单纯牙周基础治疗[5]，提示了抗氧化剂在牙周炎治疗中的应用前景。近些年来，大量学者研究了抗氧化剂与牙周炎之间的关系，结果表明其对牙周炎具有一定的影响作用。

蜂胶是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂，再混以蜜蜂的舌腺、蜡腺等腺体分泌物，经蜜蜂加工转化而成的一种胶状物质，在国外，蜂胶被誉为“紫色黄金”。经科学研究证明，蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质，使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种功能，对人体有着广泛的医疗、保健作用，现已成为各国科学研究的热点，并成为新兴的保健品倍受推崇。

目前蜂胶按提取工艺主要分为两种：蜂胶乙醇提取物和蜂胶超临界提取物。蜂胶乙醇提取物是取蜂胶粉碎，用乙醇浸泡溶解，过滤，滤液回收乙醇，晾干。该工艺处理的蜂胶特点是工艺处理比较简单，但存在高温干燥过程中有效成分损失较大、产品颜色过深、重金属容易超标、造假掺假问题严重等问题。蜂胶超临界提取物是利用超临界二氧化碳萃取分离技术，有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来，然后借助调整温度和压力的方法使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的。用这种方法得到的蜂胶超临界提取物无毒、无残留、安全，萃取条件室温、无氧，避免有效成分高温分解和氧化，抗菌成分最大程度保留。此外，重金属含量在萃取过程中也大幅度降低。

作为一种稳定的自由基，DPPH能在有机溶剂中稳定存在，其醇溶液呈紫色，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示，抑制率越大，抗氧化性越强。

本研究采用DPPH自由基评价两种蜂胶的抗氧化效果差异，同时还研究了两种蜂胶添加到牙膏中的应用情况，初步研究了蜂胶牙膏开发的可行性和相关影响因素。

1 材料和仪器

仪器：UV(北京谱析T9CS)；分析天平(梅特勒-托利多)；电热恒温鼓风干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)。

试剂：蜂胶超临界提取物(东莞波顿香料有限公司)；DPPH(CNW)。

2 方法与结果

2.1 蜂胶提取物的抗氧化活性研究

精确称取DPPH 0.0199g于50ml容量瓶中，用甲醇配成1mmol/L的DPPH溶液，取1mmol/L该溶液5ml用甲醇稀释到50ml即得0.1mmol/L的DPPH溶液，避光备用。将蜂胶提取物用甲醇配置成浓度分别为0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.1mg/ml的样品溶液。不同浓度的待测液各取2ml分别与2ml 0.1mmol/L的DPPH溶液混合均匀，避光反应30min(反应平衡)。2ml 0.1mmol/L的DPPH溶液中加入2ml甲醇作为模型，以甲醇(模型空白)为参比在其最大吸收波长516nm处测定其吸光度Ac。将反应完成的样品在DPPH的最大吸收波长处测定其各自的吸光度Ai，以不同浓度的2ml样品溶液加2ml甲醇为各自的参比Aj(试样空白)。本实验用EC50(该值定义为溶液中DPPH自由基浓度下降为原始浓度的50%时加入的抗氧化剂的量)来衡量蜂胶超临界提取物、醇提蜂胶的自由基清除活性。

DPPH自由基清除率=[1-(Ai-Aj)/Ac]*100%

经过对数拟合得到方程：

Y=0.2745ln(x) + 1.417

R2=0.9564

根据计算蜂胶超临界提取物清除50% DPPH自由基的浓度为35.41μg/mL，即

IC50 =0.0354mg/mL

图1表明，随着蜂胶超临界提取物浓度的增加DPPH自由基清除率也增加，之后随其浓度的增加DPPH 清除率趋于平缓，0.1 mg/ml其清除率可达83.42%。

图1 蜂胶超临界提取物DPPH 自由基清除率

经过对数拟合得到方程：

Y=27.038ln(x)+136.17

R2=0.9629

根据计算醇提蜂胶清除50% DPPH自由基的浓度为41.30μg/mL，即

IC50 =0.0413mg/mL

图2表明，随着醇提蜂胶浓度的增加DPPH自由基清除率也增加，之后随其浓度的增加DPPH清除率趋于平缓，0.1mg/ml其清除率可达77.23%。

图2 蜂胶乙醇提取物DPPH 自由基清除率

从以上实验结果可以看出，超临界提取蜂胶的IC50值低于醇提蜂胶，说明超临界提取蜂胶有更好的抗氧化活性。

2.2 蜂胶牙膏的稳定性研究

为了验证蜂胶提取物加入到牙膏中对膏体稳定性的影响，我们选择一个比较有代表性的基础配方(见表1)进行研究，并添加不同量的蜂胶提取物，分别储存于室温和高温(45℃)进行跟踪测试，观察样品的理化指标、颜色变化、稳定性等，结果详见表2。配方1、2添加的是超临界提取蜂胶，配方3、4添加的是醇提蜂胶。

表1 牙膏配方表

表2 牙膏稳定性观察表

通过对牙膏的稳定性观察结果显示，添加了超临界提取蜂胶的牙膏配方1、2，三个月后均正常，添加了醇提蜂胶的牙膏配方对牙膏本身的影响较大，仅添加0.1%～0.3%就使膏体外观变成黑色，影响膏体的美观效果，不利于观察颜色变化情况。

3 讨论

牙周炎的进展与牙周组织氧化应激水平增加存在密切的关系，可降低氧化应激的抗氧化剂在牙周炎治疗中具有一定的应用前景。蜂胶是天然珍品，可以长期食用，无毒副作用。蜂胶被誉为天然小“药库”，它能预防和治疗疾病，同时无毒无副作用，没有抗药性，温和缓慢，安全可靠，它对人体各脏器都有一个全面调节和修复的作用。早在50年代，国外就应用蜂胶软膏成功地治疗了复发性口疮、口腔糜烂、溃疡等口腔疾病。蜂胶在食品、保健品领域用得比较广泛，但在口腔护理用品领域还未得到很好地推广。本研究初步探讨了蜂胶的抗氧化性能以及在牙膏中的应用，对如何选择蜂胶作为抗氧化剂治疗牙周炎有一定的指导意义，但牙膏的抗氧化效果还有待进一步研究。