市售葛根配方颗粒与标准汤剂质量比较*

盛晓静，廖立英，张晓云

（江西省九江市食品药品检验所，江西 九江 332000）

葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根，有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒等功效［1］。本研究中拟考察不同厂家葛根配方颗粒的质量，并与标准汤剂比较，探讨市售葛根配方颗粒代替饮片配方的可行性。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AG285 型电子天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；2550 型紫外- 可见分光光度计（日本Shimadzu 公司）；KQ - 600DE 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；1200 Series型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。

1.2 试药

高效预制硅胶G 薄层板（德国Merck 公司，规格为10 cm×20 cm）；葛根对照药材（批号为121551-201805），葛根素对照品（批号为110752-201816，含量为95.4%），均购自中国食品药品检定研究院；样品信息见表1（配方颗粒的规格是指每1 g含药量对应的饮片质量）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

表1 葛根配方颗粒及葛根饮片信息Tab.1 Information of formula granules and decoction pieces of Puerariae Lobatae Radix

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

取配方颗粒样品0.2 g，研细，加甲醇10 mL，超声（频率为40 kHz，功率为600 W）处理2 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，即得配方颗粒供试品溶液；取葛根饮片1.0 g，加水30 mL，煮沸1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10 mL，同法制成标准汤剂供试品溶液；取葛根素对照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的对照品溶液；取葛根对照药材1 g，与葛根饮片同法制成对照药材溶液。按2020 年版《中国药典（四部）》通则0502薄层色谱法试验，吸取上述4 种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水（14∶5∶0.5，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱及对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，详见图1。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件［2-3］

色谱柱：ACES AQ Plus C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇- 水（22∶78，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液制备

取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每1 mL 含40 μg 的溶液，即得对照品溶液。取葛根配方颗粒样品10 g，研细，取约相当于葛根饮片0.2 g，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加入30%乙醇30 mL，振摇提取5 min，加30%乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液Ⅰ。取葛根饮片100 g，精密称定，置2 000 mL 烧杯中，煎煮2 次，第1 次加水900 mL，浸泡30 min，煮沸后煎煮1 h，第2 次加水700 mL，煮沸后煎煮30 min，合并2 次的煎煮液，浓缩至约800 mL，转移至1 000 mL 容量瓶中，加水定容，摇匀，精密吸取2 mL置蒸发皿中，蒸干，残渣用30%乙醇30 mL 转移至50 mL 容量瓶中，振摇提取5 min，加30%乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得供试品溶液Ⅱ［4］。取30%甲醇，作为阴性对照溶液。

1 - 20.供试品溶液 S1.对照品溶液 S2.对照药材溶液A.配方颗粒 B.标准汤剂图1 葛根薄层色谱图1-20.Test solution S1.Reference solution S2.Reference medicinal material solutionA.Formula granules B.Standard decoctionFig.1 TLC chromatograms of Puerariae Lobatae Radix

2.2.3 方法学考察

专属性试验：精密吸取2.2.2 项下供试品溶液Ⅰ、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果供试品溶液Ⅰ色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处有相应吸收峰，阴性对照无干扰。理论板数按葛根素峰计应不低于3 000，分离度大于1.5，基线分离良好。详见图2。

线性关系考察：称取葛根素对照品11.15 mg，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加30%乙醇溶解并定容，摇匀，作为对照品贮备液，精密吸取2，2，2，5，5 mL，分别置50，25，10，10，5 mL 容量瓶中，其中前4 管加30%乙醇定容，第5 管直接使用，制得系列对照品溶液。吸取10 μL，按2.2.1项下色谱条件进样测定。以葛根素对照品的峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X，μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y= 4 713X+ 2.629，r= 0.999 9（n=5）。结果表明，葛根素进样量在0.085 10～2.127 00 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液（42.55 μg/mL）10 μL，按2.2.1 项下色谱条件连续进样测定5 次。结果的RSD为0.072%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取按2.2.2项下方法制备的供试品溶液Ⅰ，室温下分别于0，1，2，4，8，12，24 h 时按2.2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，结果的RSD为0.56%（n=7），表明供试品溶液室温下放置24 h内稳定。

重复性试验：取葛根配方颗粒样品（编号4）约0.02 g，平行6份，分别依法制备供试品溶液1，按2.2.1项下色谱条件进样，记录峰面积并计算样品含量。结果配方颗粒供试品平均含量为7.074%，RSD为0.25%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的葛根配方颗粒样品6份，精密称定，分别精密添加葛根素对照品适量，按2.2.2项下方法制成供试品溶液Ⅰ，精密吸取10 μL，按2.2.1 项下色谱条件进样测定，并计算回收率，结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取各批葛根配方颗粒、标准汤剂，按2.2.1 项下色谱条件进样测定葛根素的含量［以相当于1 g 葛根药材（干燥品）计算］。结果配方颗粒及标准汤剂中葛根素平均含量分别为11.27 mg/g和33.90 mg/g，详见表3。

表3 样品中葛根素含量测定结果（mg/g）Tab.3 Results of content determination of puerarin in the samples（mg/g）

2.3 干浸膏出膏率考察［5］

精密吸取2.2.2项下供试品溶液Ⅱ制备过程中“定容至1 000 mL 的水煎液”20 mL，置已预先干燥至恒重的蒸发皿中蒸干，在105 ℃条件下干燥至恒重，计算饮片（干燥品）的干浸膏出膏率，与配方颗粒按规格换算的出膏率进行比较，结果配方颗粒与标准汤剂的平均出膏率分别为14.84%和32.87%，详见表4。

表4 样品中葛根干浸膏出膏率（%）Tab.4 Dry extract yield of Puerariae Lobatae Radix samples（%）

1.葛根素A.对照品溶液 B.供试品溶液Ⅰ C.阴性对照溶液图2 高效液相色谱图1.PuerarinA.Reference solution B.Test solution Ⅰ C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

3 讨论

预试验中，在测定葛根素含量时，分别考察了不同色谱柱的分离效果［6-10］，当流动相为甲醇-水（17∶83，V/V）时，使用Waters Symmetry ShieldTM柱可达到基线分离，相对保留时间为36.26 min，当流动相为甲醇-水（22 ∶78，V/V）时，使用ACES C18AQ Plus 柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）可达到基线分离，相对保留时间16.58 min。在达到有效分离的条件下，选用ACES C18AQ Plus 柱可节省测试时间。还考察了供试品加30%乙醇30 mL 振摇提取2，5 min 及超声（功率为600 W，频率为28 kHz）处理5 min 的提取效果［11-15］，结果振摇提取5 min 或超声（功率为600 W，频率为28 kHz）处理5 min 均能完全提取待测成分，考虑到节能和方法的简便，选择提取方法为振摇提取5 min。

试验结果显示，配方颗粒及标准汤剂均能在薄层色谱鉴别中检出葛根素及葛根药材的特征斑点，但按相同的葛根当量比较，配方颗粒中的葛根素含量均明显低于标准汤剂，多数配方颗粒的干浸膏出膏率不及标准汤剂的40%，反映了市售葛根配方颗粒的生产工艺有待优化，配方颗粒的质量亟待提升。

此外，经测定用于生产标准汤剂的10批葛根饮片及相应的标准汤剂的葛根素含量，计算葛根素平均转移率为71.07%。2020年版《中国药典（一部）》规定，葛根按干燥品计算，含葛根素不得少于2.4%。因此，相当于1 g葛根药材（干燥品）的葛根配方颗粒，按平均转移率的70%计算，葛根素含量应不得少于11.94 mg。10 批葛根标准汤剂的干浸膏平均出膏率为32.87%，按平均出膏率的70%～130%计算出膏率的范围应为23.01%～42.73%，即每1 g配方颗粒相当于饮片2.34～4.35 g。

综上所述，市售葛根配方颗粒的生产工艺有待规范，质量亟待提升。