ADAMDEC1在人结直肠癌组织中的表达及临床意义

王成兴 谭群英 何耀明

中山大学附属江门医院胃肠外科，广东 江门 529000

结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是一种常见的消化道肿瘤，流行病学统计显示，我国CRC的发病率处于消化道恶性肿瘤的第3位［1］。由于CRC在发展初期缺乏典型的症状及体征，导致初诊的CRC多以中晚期为主［2］。因此，寻找新的生物学标志物对CRC进行早期诊断及预后评估具有重要临床意义。ADAMDEC1（A disintegrin and ametalloprotease domain-like decysin 1）是解聚素-金属蛋白酶家族成员之一，具有解聚素和金属蛋白酶两种结构域，一方面通过解聚素功能增加肿瘤细胞的粘附和定植能力，另一方面通过调节金属蛋白酶活性参与细胞因子的加工及胞外基质的降解［3-4］。相关研究表明，ADAMDEC1的表达与肿瘤恶性程度呈正相关，其高表达提示更差预后，具有成为新型肿瘤生物标志物或药物作用靶点的潜力［5-6］。本研究拟通过对我院收治的100例CRC患者进行回顾性分析，检测ADAMDEC1在CRC中的表达情况并分析其与CRC患者临床病理特征的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年12月至2015年12月在江门市中心医院胃肠外科行根治性CRC切除术的患者100例。分别取CRC组织（T）、癌旁2 cm组织（P）及癌旁大于10 cm组织（N），入组患者术前均未接受放化疗，术后组织标本均经病理学确认且各项临床资料完整。本研究经江门市中心医院伦理委员会批准（No.JXY2029）。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色（immunohistochemistry，IHC）取100例T及对应P、N，经石蜡包埋切片、脱蜡水化及高压修复抗原等工序后，予PBS漂洗，加入封闭液室温孵育30 min。滴加兔抗人ADAMDEC1多克隆抗体（1∶100）并4℃孵育过夜。取出后予室温复温60 min，予PBS漂洗后滴加二抗。放置于37℃烤箱孵育30 min，再次PBS漂洗后予二氨基联苯胺显色，进而复染、脱水、透明及封片。结果判定时以细胞质和（或）细胞核出现黄色颗粒为阳性结果，根据阳性结直肠细胞比例及着色强度进行评分。阳性细胞比例<5%为0分，5%~25%为1分，>25%~50%为2分，>50%~75%为3分，>75%为4分；着色强度分为无着色、淡黄色、黄色、棕色，依次为0、1、2、3分。两部分相加，≤3判为阴性，≥4则判为阳性。

1.2.2 Western blot 随机取10例T及对应P、N，分别提取总蛋白并测蛋白浓度，调整样品量后上样，予电泳转移至PVDF膜上。室温下封闭60 min后加入兔抗人ADAMDEC1多克隆抗体（1∶2 000）、GAPDH（1∶5 000）并4℃孵育过夜。洗膜后加入二抗（1∶5 000）再孵育60 min。再次洗膜后滴加ECL试剂在室温下孵育5 min。暗室显影后摄影并保存为电子照片。每例样品均分别进行3次检测，应用image J软件对条带灰度值进行数字化处理，以ADAMDEC1与GAPDH之间的灰度比来表示ADAMDEC1表达水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 25.0软件进行数据分析。各组间ADAMDEC1表达差异分析采用χ2检验；Kaplan-Meier分析方法绘制ADAMDEC1高表达及低表达患者的生存曲线；Log-rank检验比较ADAMDEC1高表达及低表达间生存率的差异；单因素及多因素Cox回归分析临床病理特征及ADAMDEC1表达情况与患者预后的关系。检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 ADAMDEC1在CRC组织中的表达水平

IHC结果显示，入组的100例CRC患者中ADAMDEC1在T中呈高表达84例，低表达12例，不表达4例，在对应的P及N中均呈低表达或不表达。ADAMDEC1高表达患者T中的ADAMDEC1表达量明显高于P及N，差异具有统计学意义（P=0.021，P=0.017）；而P与N之间的ADAMDEC1表达差异无统计学意义（P=0.072）。详见图1。

图1 IHC检测CRC患者不同组织中ADAMDEC1表达量

Western blot结果显示，T中的ADAMDEC1蛋白表达量明显高于P及N，差异有统计学意义（P=0.037）；P及N中的ADAMDEC1蛋白表达量均呈低表达或不表达，两者之间差异无统计学意义（P=0.107）。详见图2。

图2 Western blot检测CRC患者不同组织中ADAMDEC1表达量

2.2 ADAMDEC1的表达与CRC患者临床病理特征的相关性

ADAMDEC1的高表达与CRC患者肿瘤大小（P=0.003）、TNM分期（P=0.001）及淋巴转移（P=0.001）呈正相关，与年龄（P=0.824）、性别（P=0.148）、远处转移（P=0.284）及家族史（P=0.946）均无相关性。详见表1。

表1 ADAMDEC1表达与CRC患者临床病理特征的相关性

2.3 ADAMDEC1高表达与CRC患者总体生存率的相关分析

随访100例CRC患者术后5年，总生存率为42%（42/100），其中ADAMDEC1高表达患者术后5年生存率为34.52%（29/84）；而ADAMDEC1低表达或不表达者为81.25%（13/16）。两组差异具有统计学意义（P=0.023）。详见图3。

图3 ADAMDEC1表达与CRC患者术后总体生存率的关系

2.4 Cox回归分析CRC的独立危险因素

单因素分析结果显示，肿瘤大小（P=0.008）、TNM分期（P=0.001）、淋巴转移（P=0.001）及ADAMDEC1高表达（P=0.001）与患者的总体生存期显著相关；进而多因素分析显示TNM分期（P=0.001）、淋巴转移（P=0.033）及ADAMDEC1高表达（P=0.018）为CRC的独立危险因素。详见表2。

表2 Cox回归分析ADAMDEC1表达对CRC患者总生存率的预后价值

3 讨 论

CRC作为一种消化道恶性肿瘤，发病率在全球男性恶性肿瘤中排第3位，在女性中排第2位［7］，其病死率位居恶性肿瘤死因的第3位［8］。在我国纳入肿瘤发病率重点监控的5个大城市中，近年来CRC的发病率均有不同程度的上升［9］。针对CRC进行早期诊断及早期治疗是提高患者生存率及生活质量的重要举措。

近年来ADAMDEC1逐渐被发现在多种肿瘤中表达异常，且参与肿瘤的表型调控。Xu等［10］发现ADAMDEC1 mRNA在颅咽管瘤中高表达，而在正常脑组织中无表达。本研究通过IHC对T、P及N进行了ADAMDEC1表达水平的检测，发现ADAMDEC1在T中总体呈高表达，而在P及N中均呈低表达或无表达；Western blot显示CRC患者中ADAMDEC1蛋白的表达情况与IHC趋势一致。本研究中IHC及Western blot显示ADAMDEC1在CRC组织中呈高表达，结果与国内外相关研究类似［10-11］。研究显示，ADAMDEC1具有解聚素、金属蛋白酶活性，参与蛋白水解，负调控细胞附着，破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移过程中具有重要作用［12-13］。Crouser等［14］发现，ADAMDEC1在肺肉瘤组织中呈明显高表达，且表达情况与疾病的严重程度呈正相关，提示其参与了肺组织的损害或改造过程，并具有作为疾病活动判断指标的潜力。Liu等［15］通过体外实验发现下调ADAMDEC1可抑制胶质瘤的发生和进展，推测其可能成为胶质瘤治疗的新靶点。本研究相关性分析显示患者的ADAMDEC1表达水平与肿瘤大小、TNM分期及淋巴转移呈正相关；Kaplan-Meier生存分析进一步显示ADAMDEC1高表达的CRC患者相比低表达或无表达患者具有更低的总体生存期；Cox回归分析中提示ADAMDEC1的表达水平是影响CRC患者术后总体生存率的一个独立危险因素，这提示ADAMDEC1的高表达导致了CRC患者更差的预后，通过对ADAMDEC1表达水平进行检测，可协助医生早期诊断CRC及判断其预后。但当前对ADAMDEC1在CRC发生、发展及侵袭转移等领域的相关研究较少，其生物功能及分子机制仍需要进一步挖掘。

综上所述，ADAMDEC1具有成为一种CRC早期诊断及预后评价的肿瘤生物标志物的潜力。进一步对其作用机制进行深入研究，有助于阐明CRC的发生、发展机制，为临床上CRC的诊疗提供新的靶点。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突