三种国产化学发光免疫分析仪在性激素检测中的应用价值

石燕，魏衍财，郑维玲，杨辰

南京医科大学附属苏州医院（江苏苏州 215000）

国内实验室检测性激素六项[包括孕酮（progesterone，P）、雌二醇（estradiol，E2）、促黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、卵泡刺激素（follicle stimulating hormone，FSH）、泌乳素（prolactin，PRL）和睾酮（testosterone，T）]的方法主要是化学发光免疫分析法，使用的多为进口设备，国产化学发光免疫分析仪的占比较小。作为高端医疗设备的化学发光免疫分析仪，在过去十几年中，几乎被进口品牌所垄断。近年来，随着国产医疗行业的快速发展，国产化学发光免疫分析仪逐渐进入三级医院检验科及大型第三方检验中心等机构。在新型冠状病毒肺炎疫情下，国家大力加强基层公共卫生体系建设，部分基层医院的临床实验室引入了国产化学发光免疫分析仪。在部分国外进口试剂断供时有发生的情况下，国产厂家积极恢复试剂生产，为临床诊疗提供了快捷、方便的服务。鉴于国产仪器上市时间短，目前见诸报道的国产化学发光免疫分析仪的检测性能评价多为不同实验室对某品牌或单个项目的验证，本研究是在2016年由固定人员在同时间、同环境条件下，同时对多个品牌配套的多个检测项目进行的性能验证评价，旨在尽可能客观地对市面上的国产化学发光免疫分析仪在性激素检测中的应用价值进行评价，给其他实验室在选择和使用国产化学发光免疫分析仪时提供参考。

1 材料和方法

1.1 样本来源

选取2016年1—10月我院门诊和住院患者检测后剩余的无溶血、黄疸和脂浊血的新鲜血清样本，共计600份。所有样本分装后集中保存于-80 ℃冰箱内。

1.2 仪器和试剂

三种国产化学发光免疫分析仪（深圳新产业MAGLUMI 4000、深圳迈瑞CL-2000i、郑州安图A2000）及其配套试剂和本实验室在用进口仪器（Beckman Coulter DXI800）及其配套试剂，三种国产仪器随机标为A、B、C；质控品使用美国伯乐公司免疫分析质控（批号40321、40322、40323）。

1.3 精密度验证

参考CLSI EP15-A2[1]文件设计验证方案，血清浓度与厂家进行精密度评价所选浓度尽可能保持一致，同时要尽量保证浓度水平和医学决定水平处的浓度相一致。需要注意的是，每批样本检测前均需进行室内质控样本检测，合格后才可进行后续的样本检测；对于不同批次不同浓度的样本，需要每天分别检测3次，共检测5 d；记录检测结果，计算批内和总不精密度，不精密度以变异系数CV表示，具体CV值计算公式参考WS/T 492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》[2]。以批内不精密度≤1/4 TEa（±6.25%）、总不精密度≤1/3 TEa（±8.33%）（TEa 取值为国家卫生健康委临床检验中心室间质评允许总误差）为可接受标准。

1.4 方法学比对

依据CLSI EP9-A3[3]文件设计验证方案，血清浓度应尽可能在检测范围内均匀分布，标本数量至少40份，同时采用三种国产仪器和进口仪器进行检测，单次样本是在40份样本中随机选取的，同时对检测结果进行记录。在检测开始之前，确保所用仪器正常，室内质控结果合格。标本中若存在离群值（具体参考EP9-A3文件），则需要剔除后补充对应浓度的标本。通过偏差图进行初步偏移评估，根据分析方法间散点图和偏差图所呈现的潜在特征，选择最佳回归模型对各比对系统结果进行拟合分析，并计算医学决定水平处的偏移，以百分偏移≤1/2 TEa（±12.5%）为可接受标准。

1.5 分析测量范围验证

依据CLSI EP-6A[4]和WS/T 408-2012[5]设计验证方案，选取待验证线性范围高限（H）附近和低限（L）附近的样本，按H、3H+L、2H+3L、H+3L、L的比例两两混合，配置5个浓度样品；对各浓度样本在三种国产仪器上进行重复检测，每种仪器每个浓度水平检测3次，记录检测结果；剔除离群值，之后进行多元线性回归，将结果拟合成一阶、二阶或三阶多项式进行评价。

1.6 参考范围验证

参考CLSI C28-A3c[6]并查阅试剂说明书，按照纳入标准选出20名表观健康人（常规体检项目均正常）进行体检。受试验条件限制，其中P、E2、LH、FSH 只验证男性参考范围，PRL 和T 分别验证男性和女性参考范围。

1.7 统计学处理

采用Microsoft Excel 2007、SPSS 16.0软件和MedCalc软件进行统计学分析。不同比对系统偏移和回归分析选取最合适的回归模型进行计算，正态分布检验采用1-sampleK-S检验，如为正态分布，采用Pearson相关分析；如为非正态分布，用Wilcoxon符号秩检验，采用Spearman相关分析，各比对系统回归分析选取最佳回归模型进行计算。

2 结果

2.1 精密度验证

A仪器的P、E2、LH、FSH、PRL 和T，B 仪器的LH、FSH 和PRL，C仪器的 E2、LH 和PRL项目的精密度验证结果符合要求，见表1。

表1 三种国产化学发光免疫分析仪的性激素六项精密度验证结果（%）

2.2 方法学比对

A、B、C 仪器与进口仪器的检测结果之间的相关系数分别为0.76～0.99、0.89～0.99、0.82～0.98，P＜0.05；三种国产仪器的性激素六项在医学决定水平处的百分偏移可接受率均为22%，见表2。

（续表）

2.3 分析测量范围验证

三种仪器的分析测量范围验证结果均符合要求；A 仪器有4项为线性；B、C 仪器5项为线性，见表3。

表3 三种国产化学发光免疫分析仪的分析测量范围验证结果

2.4 参考范围验证

A、C 仪器的P、E2、LH、FSH、PRL（女）、T的参考范围验证通过，B 仪器的P、E2、LH、FSH、T 的参考范围验证通过，见表4。

表4 三种国产化学发光免疫分析仪的参考范围验证结果

3 讨论

近年来，国内检验机构关于国产化学发光免疫分析仪性能验证的文献报道日渐增加，一方面显示了各级检验机构对于检验质量的要求越发规范，另一方面证明了国产仪器逐渐被引入实验室。仪器性能验证要求对检测项目进行精密度、线性范围、参考区间等验证，同一实验室有多个检测系统检测同一项目时需要开展不同仪器间的方法学比对，以评估各仪器间结果的一致性；性能验证涉及的国产品牌项目主要集中在肿瘤标志物、甲状腺相关激素、心肌标志物、感染类标志物等方面[7-14]。随着国产品牌的不断发展，对国产仪器与进口仪器检测结果的一致性进行验证就显得尤为重要。本研究通过对三种国产化学发光免疫分析仪进行性能评价，来评估国产仪器是否可满足临床使用需求，为国产仪器的引入、普及提供数据支持和临床使用建议；作为参考系统的进口仪器为Beckman Coulter DXI800，该仪器所有项目均参加了国家卫生健康委临床检验中心组织的能力验证，全部能力验证结果均满意，并且全部项目通过了ISO 15189认可。

本研究参考CLSI EP15-A2文件进行精密度验证，三种国产仪器的性激素六项精密度验证中，除C 仪器的P 和T 外，其余项目均能达到各自厂家的声明标准；其中A 仪器的试剂盒精密度水平最高，验证结果可以达到甚至超过进口仪器厂家所声明的性能指标；B 仪器性激素六项的精密度水平一般，部分试剂盒的稳定性有待提高；C 仪器的精密度略差，试剂盒的批间差较大，生产工艺和质检有待进一步优化。

本研究涉及的性激素六项检测目前无参考检测程序，也无国际公认的有证参考物质。参照EP9-A3文件，我们将本实验室所用的进口仪器作为参考系统，将三种国产仪器的性激素六项检测结果分别与之进行比对，结果显示，三种国产仪器的性激素六项检测结果与进口仪器的相关性显著（P＜0.05），相关系数在0.76～0.99之间。虽然国产仪器与进口仪器间的相关性显著，但临床决定水平处的偏倚可接受性差，这可能是由于不同厂家的抗体来源、包被方式、发光原理等差异使得不同系统间的检测结果不尽相同。有研究显示，不同厂家的进口仪器之间比对结果亦存在相关性尚可但系统偏差较大的现象[14-15]。

参考范围验证时，因部分性激素项目涉及排卵期、黄体期、绝经期等特殊时间段，验证难度较大，故P、E2、LH、FSH 4项只验证了男性参考范围，PRL 和T 则分别验证了男性和女性的参考范围。本研究结果显示，三种国产仪器的性激素六项分析测量范围验证结果均能够符合本实验室质量控制要求；A、C 仪器的P、E2、LH、FSH、PRL（女）、T的参考范围验证通过，B 仪器的P、E2、LH、FSH、T 的参考范围验证通过，三种国产仪器的男性PRL参考范围验证全部未通过，这可能与抽样有关（本研究无法做到全面调研所选样本的背景情况，不能确保被取样的人群均处于完全健康状态，也不能保证这些检测指标的参考区间完全适合临床实验室使用），也可能与本实验的环境与厂家确认参考范围时的环境差异较大有关。

综上所述，三种国产仪器的部分性激素六项性能验证结果可以满足本实验室的质量要求，其中部分性能指标与进口仪器无明显差异，这说明了国产化学发光免疫设备技术已达到一定水平，但仍存在很大的提升空间；三种国产仪器性激素六项的参考范围除PRL 外，其余项目均与厂家说明书一致，且国产仪器与进口仪器的检测结果之间存在一定偏移，因此临床上应该建立不同仪器的参考范围，实验室应综合考虑检验结果在不同仪器间的可比性及不同仪器间结果的差异，以避免不同仪器检测的值不同带来的误诊，厂家应从原料、方法学、溯源系统等方面进行不断优化，从而尽量缩小与进口仪器在临床样本检测结果方面的差异性，实验室和厂家应共同提高性激素检测项目的标准化，为临床提供准确可靠的检测结果，