发酵床模式下保育猪弓形虫病防治效果研究

周明夏 姚志兰 高月秀 蔡梦

摘 要：某发酵床模式自繁自养猪场，仔猪断奶后每批次均有消瘦﹑腹泻﹑呕吐﹑神经症状等临床症状发生，造成了一定的损失。根据临床症状、剖检变化、病原检测以及血清抗体检测，诊断为猪弓形虫感染。通过制定和实施以磺胺类药物为主，辅以加强生物类媒介（猫，狗，鼠）管理，垫料堆积发酵等防治手段，成功控制了疫情。经过为期1年的预防措施的实施，后面批次的保育猪未复发，且母猪和仔猪的猪弓形虫血清抗体阳性率普遍下降，说明制定和实施的发酵床模式下猪弓形虫防治方案合理有效。

关键词：发酵床;猪弓形虫;复方磺胺间甲氧嘧啶;猫;防治

中图分类号 S858.28 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2022）02-0092-04

Abstract： One pig farm is a self-bred pig farm and is fermentation bed model. Every batch of weaned piglets has clinical symptoms such as emaciation， diarrhea， vomiting and neurological symptoms， which cause certain losses. Toxoplasma gondii infection was diagnosed by clinical symptoms， examination， pathogen detection and serum antibody detection. The epidemic was successfully cured by formulating and implementing procedures for the treatment and prevention of sulfonamides， strengthening the management of biological vectors （cats， dogs， mice）， and accumulation and fermentation of pads. After 1 years of preventive measures， there was no recurrence of pigs in the latter batch， and the positive rate of Toxoplasma antibodies in sows and piglets decreased generally. This indicates that the prevention and control plan of Toxoplasma gondii under the fermentation bed mode is reasonable and effective.

Key words： Bio-bed system; Toxoplasma gondii; Sulfamonomethoxine; Cat; Prevention and treatment

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种全球流行的病原体，属于原生动物，其血清阳性率在0～90%[1]。弓形虫有一个间接的、多阶段的生命周期，涉及速殖酸盐，含有囊肿和卵囊的慢殖酸盐。这种寄生虫有着非常广泛的中间宿主，包括几乎所有的温血脊椎动物和人类[2]。弓形虫感染的主要途径是摄入不完全煮熟的含有组织囊肿的肉或被卵囊污染的食物或水以及通过垂直传播[3]。全世界大约30%的人口长期感染弓形虫。一般来说，人类感染是无症状的，但寄生虫可能会在胎儿和免疫功能低下的患者中诱发严重疾病，甚至危及生命[4]。我国已经从猪、牛、羊、鹿、马、猫、兔、鸡、褐家鼠、豚鼠和黄毛鼠等动物分离出弓形虫，其中以猪和猫在弓形虫的传播上具有重要的意义[5]。近年来，猪弓形虫病在全国范围内呈现出一定的流行趋势，局部地区严重暴发，致死率高达30%～40%，有的甚至达到50%以上[6]。华利忠等[7]在东北和华北地区的猪弓形虫血清学调查发现，上述区域母猪弓形虫感染普遍，且随着母猪胎次的增加，阳性率越来越高，从另一个侧面反映出猪弓形虫在养猪业和公共卫生中的危害。因此，加强猪弓形虫的防治具有非常重要的现实意义。为此，本文就1例发酵床养猪模式下保育猪弓形虫病的防治进行分析，以供参考。

1 材料与方法

1.1 材料 检测试剂盒：天净沙系列柱式动物DNAOUT提取试剂盒购自北京天恩泽基因科技有限公司。猪瘟病毒荧光定量检测试剂盒和猪繁殖与呼吸综合征荧光定量检测试剂盒购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司;猪弓形虫抗体测定采用间接ELISA抗体检测试剂盒，购自深圳市绿诗源生物技术有限公司。药物：利好和强力拜固舒：购自拜耳（四川）动物保健有限公司。

1.2 临床症状与剖检变化 江苏某猪场，存栏300头基础母猪，母猪为水泥地面定位栏饲养，产房21日龄断奶，断奶后断奶仔猪进入发酵床饲养，直至出栏。2017年4月，保育猪陆续出现发烧（39.5～42℃）消瘦，背毛粗乱，采食量下降，腹泻等症状，有的猪出现皮肤发红现象，发红集中在耳朵，腹部，股内侧，下肢等部位。少数猪在后期出现神经症状，还有少数发病猪有呕吐现象。发病率40%左右，死亡率约30%。剖检发现淋巴结肿大出血，腹腔积液，肺高度水肿，其他各个脏器不同程度水肿（见图1和2）。

1.3 猪弓形虫病原检测 采集血液，肝脏和肾脏，采用天净沙系列柱式动物DNAOUT提取试剂盒按说明书提取DNA。所提取的DNA按照张云峰等[8]建立的方法进行猪弓形虫PCR检测，其引物序列为F：5′-gatttgcattcaagaagcgtgatagtat-3′;R：5′-agtttaggaagcaatctgaaagcacatc-3′。采用25μL反应体系（2.5μL 10×PCR Buffer，2μL Mgcl2;2μL dNTP;上下游引物：各0.2μL;0.2μL TaqDNA聚合酶;模板DNA：1μL;ddH2O：16.9μL）進行PCR扩增，其目的条带为302bp。扩增完后1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。同时，采集了肺脏，淋巴结，提取RNA。所提取的RNA采用北京世纪元亨的荧光定量PCR检测试剂盒进行猪瘟病毒（CSFV）和猪呼吸与繁殖综合征病毒（PRRSV）的荧光定量PCR检测。

1.4 治疗前后猪弓形虫血清抗体检测 采集母猪和发病保育猪血清进行血清弓形虫检测。其中母猪根据胎次不同分别采集8～10个样本，分为后备猪（G），1胎次（S1），2胎次（S2），3～5胎次（S3～5），6胎次及以上（S6+）5个类别。分离血清后采用绿诗源生物技术有限公司猪弓形虫检测试剂盒检测血清抗体。间接ELISA的操作方法及结果判定参照试剂盒说明书进行，判定方法：COV值=阴性对照OD平均值*2.1（阴性对照小于0.08按0.08计算），OD值<临界值（COV），判为血清弓形虫抗体阴性;OD值>2COV，判为血清弓形虫抗体阳性;COV≤OD值≤2COV，判为血清弓形虫抗体可疑。

1.5 处置方案 根据临床症状，剖检变化及实验室检测，发病保育猪确诊为猪弓形虫感染。制定以下治疗和防控方案：

（1）种猪用药：加药保健：拌料利好（复方磺胺间甲氧嘧啶可溶性粉）1.5kg/T，强力拜固舒1kg/T，连续使用30d，停10d，再连续使用30d。之后利好1.5kg/T，每月1次，连用7～10d/月。

（2）断奶猪保健：发病猪治疗：拌料利好1.5kg/T，强力拜固舒1kg/T，连用2周，饮水中添加葡萄糖2kg/T。后面每批次断奶猪拌料保健：利好1.5kg/T，强力拜固舒0.5kg/T。

（3）灭鼠灭猫：制定灭鼠流程，请专业灭鼠队，每季度灭鼠1次。转移场内的家猫和饲养的狗，并发动饲养员和技术员，清除场内野猫和野狗，堵上围墙漏洞。今后一旦发现野猫和野狗进入场内，直接驱赶出场，堵住漏洞。

（4）发酵床管理：发病栋的发酵床床体深翻1次，待本批次猪转移出去后堆积发酵，2个月，每15d翻1次。之后重新喷洒发酵床菌种铺床。引入后一批断奶仔猪。今后，每15d深翻发酵床床体1次，利用发酵床本身的热，杀灭有可能污染进发酵床床体的卵囊。

（5）在实施方案后的半年后及1年后，按治疗前的采血方案进行血清采集，测定猪弓形虫血清抗体，对比治疗前后猪弓形虫血清抗体的变化，已验证疗效。

2 结果与分析

2.1 猪弓形虫病原检测结果 根据临床症状和剖检变化以及流行病学规律，初步判断为猪弓形虫感染，采集6头发病猪的肝脏和肾脏，进行猪弓形虫PCR检测，结果见图3。由图3可知，6头发病猪弓形虫PCR检测皆为阳性，证实该发病猪普遍感染猪弓形虫。为验证该病例是否存在混合感染，同时所采集的淋巴结和肺脏进行了猪瘟病毒和猪呼吸与繁殖综合征病毒的荧光定量PCR检测，结果显示CSFV和PRRSV皆为阴性。初步判定本批次发病猪为猪弓形虫感染。

2.2 治疗前后猪弓形虫血清抗体检测结果 分别在用药前，用药半年后和用药1年后，分别采集母猪、发病保育猪的血清，进行猪弓形虫血清抗体检测，其结果见表1。由表1可知，在保育猪发病时，保育猪的弓形虫抗体阳性率达到30%，而治疗半年和1年后保育猪血清抗体阳性率均为0。在发病时，母猪阳性率随着胎次的增加逐渐升高，从后备猪的20%阳性率上升到高胎次的100%，说明该猪场母猪弓形虫的感染强度较大。而用药保健半年和1年后，后备猪和头胎母猪的阳性率下降到0。用药保健半年后3～5胎次以及6胎次以上的母猪阳性率下降到50%，1年后分别下降到33%、44%，说明所使用的猪弓形虫保健方案有效。

2.3 转归情况 通过以上方案处置，原来的发病保育猪在用药14d后基本恢复，不再有新增病例，但有少量僵猪存在。该猪场以周生产批次安排生产，14d过后，后面的断奶猪未出现类似临床症状。

3 讨论

20世纪60年代末，大量暴发的猪弓形虫病曾被称为“无名高热”，临床上保育猪感染猪弓形虫主要以高热、呼吸困难和神经症状为特征，与目前流行的一些猪主要疫病，如PRRSV等有相似之处[9]，必要时需要进行实验室诊断。在本病例中，通过临床症状观察，剖检变化以及病原检测，确定该疫情是由猪弓形虫引起的。为进一步调查该场弓形虫感染的强度，采集母猪和发病猪的血清，进行猪弓形虫血清抗体检测。检测结果显示，母猪弓形虫的阳性率极高，头胎母猪的阳性率高达50%，在3～5胎次阳性率达80%，高胎次的母猪甚至达100%，说明该猪场的弓形虫感染非常普遍，这与邱美珍等[10]2018年调查发现规模猪场母猪群弓形虫感染率为58.7%的数据比较吻合。而发病保育猪的血清抗体阳性率达30%，这一数据普遍高于其他已发表的流行病学数据。如：杨晓伟[11]等调查了重庆不同阶段猪弓形虫血清学规律，发现母猪﹑育肥猪和哺乳仔猪的弓形虫血清抗体阳性率分别在7.55%～23.08%﹑1.92%～22.45%以及0～5.81%，Ichikawa-Seki M[12]等进行了印度尼西亚爪哇岛猪的弓形虫血清学调查，发现猪阳性率仅为14.6%。这些结果普遍低于本案例同样类型和日龄生猪的数据，进一步说明本案例弓形虫感染的严重程度。

猫和猫科动物是猪弓形虫终末宿主，也是唯一能够从粪便中排出弓形虫卵囊的宿主，在弓形虫传播过程中，起着至关重要的作用[13]。在猪场内，被感染的猫被认为是猪场中猪弓形虫感染的主要来源[14]。发酵床养猪技术（breeding pig on litter）是一种新型的生态环保养猪技术，可以有效解决生猪生产中的粪便处理和环境污染问题[15]。但由于其不用清粪的特性，一旦有被弓形虫污染的粪便，饲料等进入发酵床，很容易被猪误食而造成感染。在本案例中，发病场为发酵床养殖模式，排泄物管理不善，环境条件较差，湿度大，饲料管理不当，围墙有很多破损的地方，場内老鼠众多，但全年没有灭鼠，还有野猫野狗，且人为饲养了2只猫和和3条狗，这可能是该猪场造成弓形虫传播感染的主要因素。因此，转移走或扑杀所有的猫和狗（包括野猫和野狗），堵住围墙漏洞，并每季度灭1次鼠，断绝弓形虫在终末宿主和中间宿主之间的传播，是切断弓形虫在场内循环传播的关键措施。

在猪弓形虫治疗药物方面，自1942年Sabin等发现磺胺嘧啶的抗弓形虫作用，及1953年Eyles等报道的乙胺嘧啶的增效作用以来，联合使用这两个药物一直是弓形虫病的标准治疗方案[16]。目前弓形虫的防治，复合磺胺类药物较为有效。磺胺间甲氧嘧啶通过竞争二氢叶酸酶，抑制二氢叶酸的合成;甲氧苄啶通过抑制二氢叶酸还原酶，使二氢叶酸不能还原成四氢叶酸。袁铭雅[17]在治疗一例仔猪弓形虫病时（200头存栏）的用药方案为：磺胺-6-甲氧嘧啶（SMM）粉，按0.02%标准拌饲，对全群猪连续饲喂5d。全群猪测体温2次/d，体温在40℃以上的，按体重注射磺胺嘧啶钠70mg/次，1次/d，连续5d，结果成功治愈了该病例，无复发。本案例使用是拜耳的复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉（商品名：利好）。该产品在防控猪弓形虫方面较为有效。解明华等[18]在治疗弓形虫病时，所用方案为：拌料复方磺胺间甲氧嘧啶钠可溶性粉1500g/t，氨苄西林可溶性粉1000g/t，连用7～10d，停药10d后再用7～10d。对于个体治疗，所用治疗方案为：盐酸吖啶黄注射液，静脉缓慢注射，3mg/kg，1次/d，磺胺6-甲氧嘧啶（SMM），静脉注射，60mg/kg，用注射用水配制成10%的溶液，1～2次/d，连用3～5d，结果非常有效。

在本案例中，为了根治猪场的弓形虫病，一方面从发病猪着手，优先将发病猪群治愈，另一方面，为了避免下一批次的仔猪仍然会发病，在制定控制计划时直接从母猪开始用药，联合消灭生物媒介措施，饲料和粪便管理等措施，希望从源头切断猪场的弓形虫。结果用药14d，发病猪群即康复，没有新增病例，往后的新上保育猪批次未再发病，说明制定的措施在防治保育猪发弓形虫病有很好的作用。从母猪角度出发，发现制定的后期保健措施在1年之后极大地降低了场内母猪弓形虫血清抗体的阳性率，说明所制定的措施能有效降低母猪的感染率，从而降低了保育猪发弓形虫病的风险。

参考文献

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（责编：张宏民）