E-Cad、G-17、HER-2与胃癌术后复发风险的相关性

茆 政，钱增堃，应 斐，王昭俐，肖 群，崔 凡

（芜湖市第一人民医院检验科，安徽 芜湖 241000）

目前，全球胃癌的发病率和死亡率分别居所有肿瘤的第5位和第2位，在我国分别居第2位和第3位[1]。胃癌的治疗主要采取手术及放疗、化疗的方法，但有学者发现，在早期胃癌根治术后仍有一定比例的患者会复发[2]。因此，预测胃癌患者的复发情况，及时调整治疗方案，对于患者的预后具有积极的意义。有研究结果显示，上皮型钙黏蛋白（epithelial cadherin，E-Cad）与肿瘤的迁移、浸润及预后有关[3]。人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）除与肿瘤发生、发展相关外，还是临床治疗、监测及预后评估的指标，与胃癌患者术后的生存时间显著相关[4]。有研究结果显示，HER-2激活可进一步促进肿瘤细胞的分裂及分化，促使肿瘤恶化[5]。胃泌素-17（gastrin-17，G-17）是近年来发现的胃癌的早期筛查指标，可用于反映胃癌细胞的增殖情况和肿瘤负荷状态[6]。本研究拟探讨E-Cad、HER-2、G-17与早期胃癌患者根治术后复发风险的相关性，为胃癌的预后判断提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2015年1月—2016年12月芜湖市第一人民医院行胃癌根治术的患者100例，在术后进行为期5年的随访，有8例患者因联系方式变更等原因失访，失访率为8%；最终入组92例患者（胃癌组），其中男55例、女37例，年龄（50.29±2.59）岁，体质量指数（body mass index，BMI）为（24.55±2.11）kg/m2。以患者复发或随访满5年作为随访终点，随访时间为21～60个月，中位随访时间为38个月。根据有无复发将患者分为复发组（25例）和非复发组（67例）。另选取同期芜湖市第一人民医院胃良性病变患者92例（低级别上皮内瘤变61例，慢性萎缩性胃炎31例）作为对照组，其中男50例、女42例，年龄（50.37±2.46）岁，BMI为（24.61±3.48）kg/m2。2个组之间性别、年龄和BMI差异均无统计学意义（P>0.05）。本研究经芜湖市第一人民医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 纳入和排除标准

1.2.1 纳入标准 （1）符合胃癌的诊断标准[7]；（2）预计生存时间>6个月；（3）卡氏（Karnofsky，KPS）评分[6]均≥70分；（4）患者知情且同意本研究方案。

1.2.2 排除标准 （1）心、肝、肾功能严重不全者；（2）存在交流障碍者；（3）不配合本研究方案者。

1.3 方法

1.3.1 一般资料 收集所有对象性别、年龄、临床分期、分化程度、复发情况等一般资料。

1.3.2 E-Cad、G-17检测 采集所有患者术前清晨空腹静脉血5 mL，1 800×g离心10 min，分离血清，-80 ℃保存待测。采用酶联免疫吸附试验检测血清E-Cad、G-17水平，E-Cad试剂盒购自上海江莱实业股份有限公司，G-17试剂盒购自必欧瀚生物技术（合肥）有限公司，检测仪器为HR801型酶标仪（深圳华科瑞科技有限公司）。严格按仪器和试剂盒说明书操作。

1.3.3 HER-2检测 收集胃癌患者行胃癌根治术时切除的肿瘤组织，胃良性病变患者行胃镜检查时采集的组织样本。采用免疫组化法检测胃组织样本中HER-2的表达量，BenchMark XT免疫组化染色试剂盒购自瑞士罗氏公司，严格按试剂盒说明书进行操作。采用CX43型显微镜（日本奥林巴斯公司）观察5个高倍镜视野，每个高倍镜视野计数100个肿瘤细胞。根据细胞膜着色的肿瘤细胞比例及染色程度进行评分：无染色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜着色，评分为0；>10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜着色，评分为1+；>10%的浸润癌细胞呈现不完整的和/或弱到中等强度的细胞膜着色，或≤10%的浸润癌细胞呈现强的、完整的细胞膜着色，评分为2+；>10%的浸润癌细胞呈现强的、完整的细胞膜着色，评分为3+，见图1。将评分0、1+定义为阴性，评分2+定义为弱阳性，评分3+定义为阳性。

图1 胃癌组织HER-2阳性（3+）（×400）

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析。呈正态分布的计量资料以±s表示，2个组之间比较采用t检验。计数资料以例或率表示，组间比较采用χ2检验。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线评估各项指标判断胃癌复发的效能。采用Cox回归分析评估影响胃癌复发的因素。采用Kaplan-Meier生存曲线评估胃癌患者的5年复发率。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组与对照组血清E-Cad、G-17水平及肿瘤组织HER-2阳性率比较

胃癌组血清G-17水平和肿瘤组织HER-2阳性率均显著高于对照组（P=0.000），血清E-Cad水平显著低于对照组（P=0.000）。见表1。

表1 胃癌组与对照组血清E-Cad、G-17水平及肿瘤组织HER-2阳性率比较

2.2 不同临床病理参数胃癌患者血清E-Cad、G-17水平及肿瘤组织HER-2阳性率比较

血清E-Cad、G-17水平及肿瘤组织HER-2阳性率与胃癌的TNM分期、分化情况及是否复发有关（P＜0.05），与性别无关（P>0.05）。见表2。

表2 不同临床病理参数胃癌患者血清E-Cad、G-17水平及肿瘤组织HER-2阳性率比较

2.3 E-Cad、HER-2、G-17判断胃癌复发的效能

ROC曲线分析结果显示，E-Cad、G-17、HER-2单项检测及3项指标联合检测判断胃癌复发的曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.775、0.822、0.603、0.950。见表3、图2。

表3 E-Cad、HER-2、G-17判断胃癌复发的ROC曲线参数

图2 E-Cad、HER-2、G-17判断胃癌复发的ROC曲线

2.4 胃癌患者的5年复发率分析

血清E-Cad、G-17分别以≥15.32 ng/mL、≥22.71 pg/mL为高表达，以＜15.32 ng/mL、＜22.71 pg/mL为低表达；HER-2以弱阳性（2+）和阳性（3+）为高表达，以阴性为低表达。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示，胃癌复发患者E-Cad低表达组复发率高于高表达组（P＜0.05），而G-17低表达组、HER-2低表达组复发率低于G-17高表达组、HER-2高表达组（P＜0.05）。见图3。

图3 胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲线

2.5 影响胃癌复发的单因素分析

将与患者预后可能相关的临床病理因素（年龄、性别、肿瘤大小、分化情况、TNM分期、E-Cad、G-17、HER-2）进行单因素分析。结果显示，年龄、TNM分期、E-Cad、G-17、HER-2与胃癌根治术后患者预后相关。见表4。

表4 影响胃癌复发因素的单因素分析

2.6 影响胃癌复发的多因素分析

将单因素分析有统计学意义的项目纳入多因素Cox回归分析，结果显示，TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、E-Cad水平降低、G-17水平升高、HER-2阳性（2+～3+）均是胃癌复发的危险因素（HR值分别为0.292、0.745、1.997、2.895，95%CI分别为0.139～0.714、0.664～0.985、0.658～4.328、0.548～7.758）。见表5。

表5 影响胃癌复发因素的多因素分析

3 讨论

目前，针对胃癌的治疗主要遵循早发现、早诊断、早治疗的原则，但仍有一部分行胃癌根治术的患者会发生复发。因此，通过分析胃癌患者相关指标的检测结果，寻找复发的危险因素，进而对患者的术后治疗方案进行有针对性的调整，这对胃癌患者的预后具有积极的意义[8]。

本研究结果显示，胃癌患者血清E-Cad水平显著低于胃良性病变患者（P=0.000），复发患者血清E-Cad水平低于未复发患者（P＜0.05）。有研究结果显示，胃癌患者E-Cad水平的降低会进一步促进胃癌细胞的迁移及向周边正常组织侵袭。胃癌主要起源于胃部上皮细胞[9]，E-Cad又被称为上皮细胞黏附因子，是维持细胞完整结构的极性钙依赖性跨膜糖蛋白，在肿瘤发展的早期及迁移过程中有重要作用。有研究发现，胃癌根治术后，因肿瘤以及部分有分泌功能的胃黏膜被切除，正常情况下E-Cad会呈显著上升趋势，但当发生复发或转移后，E-Cad水平会显著下降[10]。张毅等[11]的研究结果显示，E-Cad与胃癌的进展显著相关。本研究结果显示，E-Cad低表达组5年复发率高于E-Cad高表达组（P＜0.05），且E-Cad表达降低是胃癌复发的危险因素（HR=0.835，95%CI为0.767～0.909），与文献报道[12]一致。以往有关E-Cad的研究结论均是基于肿瘤组织得出的，本研究对胃癌患者血清E-Cad水平进行了分析，得出的结论与基于肿瘤组织的研究结论[13]基本一致。

G-17是一种多肽激素，调控了胃酸分泌量的90%。当胃部突变表现为多灶性萎缩，G-17水平明显下调，G-17在一定程度上反映了胃癌患者的肿瘤负荷状态[14]。本研究结果显示，胃癌患者血清G-17水平显著高于胃良性病变患者（P=0.000）；复发患者血清G-17水平高于未复发患者（P=0.000）。有研究显示，胃癌患者G17水平显著升高，可促进癌细胞的生长和增殖[15]。本研究结果显示，G-17高表达组5年复发率高于G-17低表达组（P＜0.05），G-17表达升高是胃癌复发的危险因素（HR=1.568，95%CI为1.292～1.904）。董曲文等[16]的研究结果显示，随着胃癌的进展，患者G-17水平显著升高，与本研究结果一致。

HER-2是一种胞内膜蛋白，具有酪胺酸激活酶活性。在正常情况下，HER-2为非激活状态，而HER-2与特异性配体结合后，可促进肿瘤细胞的有丝分裂及分化，导致肿瘤患者病情恶化[17]。有研究结果显示，胃癌细胞的HER-2阳性表达率为7%～34%[18]。本研究中，胃癌患者肿瘤组织HER-2阳性表达率为29.35%，显著高于胃良性病变患者（5.43%）（P=0.000）。陈玲等[12]的研究结果显示，胃癌患者的肿瘤组织HER-2表达升高与胃癌根治术后复发显著相关。本研究结果显示，HER-2高表达组5年复发率高于HER-2低表达组（P＜0.05），HER-2表达升高是胃癌复发的危险因素（HR=3.981，95%CI为1.504～10.538）。虽然HER-2的阳性表达率与胃癌患者术后生存时间显著相关，但单独采用HER-2评估肿瘤进展有一定的局限性，有研究发现，在不同的研究中，HER-2高表达者的胃癌发病率不同[19]。

本研究ROC曲线分析结果显示，E-Cad、G-17、HER-2单项检测与联合检测判断胃癌复发的AUC分别为0.775、0.822、0.603、0.950，提示3项指标对于胃癌复发的判断均有一定的价值，联合检测的诊断效能更高。

综上所述，E-Cad、G-17、HER-2在胃癌术后复发的预测中具有重要价值。