向日葵叶的生药学研究

孙保中 张家伟 李薪宇 汪小玉 张莲英 税丕先

摘要 [目的]对向日葵叶进行系统的生药学鉴定。[方法]对向日葵叶进行性状、显微鉴别;采用薄层色谱法和HPLC法对所含绿原酸进行鉴别和含量测定;建立小鼠耳肿胀、足肿胀炎症模型，检测向日葵叶醇提物对其耳、足肿胀度及抑制率的影响。[结果]获得向日葵叶的基源、性状、横切面及粉末显微特征，薄层鉴别特性及含量测定结果;向日葵叶醇提物高、中、低剂量组能显著地抑制小鼠耳肿胀及足肿胀，抑制作用呈剂量依赖性。[结论]该研究初步建立了向日葵叶的生药学标准，可为其鉴别及进一步研究提供理论参考。

关键词 向日葵叶;生药学;绿原酸;薄层色谱法;高效液相色谱法

中图分类号 R 282文献标识码 A文章编号 0517-6611（2022）02-0182-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.02.050

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Pharmacognostic Study on the Leaves of Helianthus annuus L.

SUN Bao-zhong1，ZHANG Jia-wei2，LI Xin-yu3 et al

（1.Chongqing Kerui Nanhai Pharmaceutical Co.， Ltd.，Chongqing 409000;2.School of Pharmacy， Southwest Medical University， Luzhou，Sichuan 646000;3. The First People's Hospital of Pidu District， Chengdu， Sichuan 611730）

Abstract [Objective]To conduct systematic pharmacological identification of the leaves of Helianthus annuus. [Method] Carried out the character and microscopic identification of the leaves of Helianthus annuus;thin-layer chromatography and HPLC was used to identify and determine the chlorogenic acid content.A mouse ear swelling and foot swelling inflammation model was established， and the influence of Helianthus annuus leaf alcohol extract on the ear and foot swelling degree and inhibition rate was tested.[Result]Obtained the basic source， traits， cross section and powder microscopic characteristics of the leaves of Helianthus annuus， thin layer identification characteristics and content determination results.The leaves of Helianthus annuus alcohol extract high， medium and low dose groups could significantly inhibit ear swelling and foot swelling in mice， the inhibition effect was dose-dependent. [Conclusion]This study has initially established the pharmacological standard of the leaves of Helianthus annuus， which can provide a theoretical reference for its identification and further research.

Key words Leaves of Helianthus annuus L.;Pharmacognosy;Chlorogenic acid;TLC;HPLC

基金項目 2018年中医药公共卫生服务补助专项“全国中药资源普查项目”（财社〔2018〕43号）。

作者简介 孙保中（1964—），男，重庆人，执业药师，从事药品质量研究。*通信作者，教授，硕士生导师，从事中药资源研究。

收稿日期 2021-05-07

向日葵（Helianthus annuus L.）为菊科（Compositae）向日葵属（Helianthus L.）一年生高大草本植物，于明朝中期传入我国[1]。向日葵根、茎髓、叶、花盘、种子均能入药[2]。向日葵叶可降压、截疙、解毒，主治高血压、疙瘩、疔疮[3]。向日葵作为农业栽培植物，是世界上重要的油料作物[4]，生长周期短，适应环境能力强，在我国农村广泛种植，部分向日葵品种作为观赏植物[5]。向日葵各部位都有较高的药用价值，但向日葵叶在向日葵籽采收后成为废品，大量被焚烧、填埋，造成污染和浪费[6]。因此，充分地开发和利用向日葵叶，探究其药理作用，不仅能一定程度地解决环境污染，提高药用农作物的经济价值，还能扩充中药资源，缓解某些农业资源浪费、缺乏的现状。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 药材。开花期和果实成熟期向日葵叶样品均采自河南省原阳县太平镇，经西南医科大学药学院生药教研室庄元春副教授鉴定为菊科向日葵属植物向日葵（Helianthus annuus L.）的叶。

1.1.2 仪器。Cx40显微镜（宁波舜宇仪器有限公司）;LC-2030高效液相色谱仪（日本岛津）;ZF-20D暗箱式紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）;EYELA N-1300V-W旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）;DSY-9002戴生高速万能粉碎机（山东迈德森万能高速粉碎机厂）;ME155DU电子天平（METTLER TOLEDOHH-6）;恒温水浴锅、TOYN-10A超声波清洗仪（上海乔跃电子有限公司）。

1.1.3 试剂。绿原酸（成都曼斯特生物科技有限公司，批号MUST-18030620）;硅胶H薄层板（青岛海洋化工，批号20190506）;地塞米松磷酸钠注射液[5 mg/（mL·支），太极西南药业股份有限公司，批号H50021463];角叉菜胶（sigma公司）;二甲苯（成都市科隆化学品有限公司，批号2019080801）;甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 显微鉴别方法。对新鲜并洗净除去杂质的向日葵开花期叶采用石蜡切片法切片，FAA固定液固定，再用番红、固绿染色剂染色，滤纸吸净多余试剂，制成向日葵叶横切面组织装片。将新鲜并洗净除去杂质的向日葵叶干燥，经粉碎机粉碎后，按照2015版中国药典（一部）过四号筛，分别取少量粉末置载玻片上，滴加1～2滴水合氯醛并在酒精灯上加热进行透化1～2次，再滴加1～2滴稀甘油封藏并盖上盖玻片，制成向日葵叶粉末装片[7]。

1.2.2

薄层鉴别方法。称取向日葵開花期叶的粉末1 g，加入甲醇10 mL，超声30 min，过滤，浓缩至1 mL，得供试品溶液。按薄层色谱鉴别法吸取绿原酸对照品溶液、向日葵叶供试品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯∶甲酸∶水∶冰醋酸（21∶12∶7.5∶1）混合液的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。

1.2.3 绿原酸含量的测定方法。称取向日葵叶粉末1 g加入50 mL 70%乙醇溶液，回流提取1 h，过滤，重复1次，合并2次滤液，挥干溶剂，加甲醇定容，备用。按高效液相色谱法，色谱柱为Venusil XBP C 18（L）5 μm，150 A，4.6 mm×250 mm，流动相为乙腈∶0.4%磷酸水溶液=9∶91;流速1 mL/min;检测波长327 nm;柱温30 ℃;进样量10 μL。此色谱条件下，绿原酸对照品及向日葵叶供试品的色谱峰能与其他色谱峰达到较好的基线分离。

1.2.4

向日葵叶醇提物抗炎作用的研究。取向日葵叶粉末（过四号筛）100、200、300 g，分别加入1 000、2 000、3 000 mL 70%乙醇溶液回流提取1 h，过滤，滤渣继续分别加入等量70%乙醇溶液回流提取1 h，过滤，合并2次滤液，挥干溶剂，分别加纯水定容，配制成含生药1、2、3 g/mL的溶液，备用。

取体重为18～22 g的雄性昆明小鼠50只，随机分为5组，每组10只，设空白组、药物组（醇提物低、中、高剂量组）、阳性药物对照组。空白组用纯水灌胃;醇提物低、中、高剂量组按20 mL/kg的剂量分别用1、2、3 g/mL的溶液灌胃;阳性对照组按5 mg/kg的剂量用地塞米松磷酸钠注射液腹腔注射。每天给药1次，连续给药7 d，最后一次给药40 min后，在小鼠右耳正反两面均匀涂布二甲苯20 μL致炎，左耳不做处理，20 min后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，并用8 mm鼠耳打孔器在两只鼠耳同一位置剪下圆片，称定重量，进行小鼠耳肿胀的影响研究。右耳重量减去左耳重量即为肿胀度。抑制率=[（空白组肿胀度平均值-给药组肿胀度平均值）/空白组肿胀度平均值]×100%[8-9]。

右足重量减去足耳重量即为肿胀度，抑制率=[（空白组肿胀度平均值-给药组肿胀度平均值）/空白组肿胀度平均值]×100%[10]。

每天给药1次，连续给药7 d，最后一次给药30 min后，用30 μL 1%角叉菜胶注射小鼠右后足趾部，左足不做处理，4 h后处死小鼠，沿踝关节剪下小鼠左右后足，分别称重，计算肿胀度及抑制率，进行小鼠足肿胀的影响研究。

2结果与分析

2.1 性状鉴别

向日葵叶多皱缩卷曲，有的破碎。展开后，完整的叶呈卵圆形或心状卵圆形，长10～25 cm，宽10～20 cm，有长柄，为5～10 cm;尖端渐间或锐突，基出三脉，边缘有粗锯齿，两面均有白色硬毛;表面磨砂感，质脆，易碎;气微，味淡，微苦。

2.2 显微鉴别

2.2.1

叶组织横切面显微特征。向日葵叶上下表皮均为一层细胞，长方形，排列紧密，下表皮较上表皮小，上下表皮均可见非腺毛、气孔分布，但下表皮气孔较多;栅栏细胞1列，位于上表皮下方，长条状，占整个叶肉组织的50%左右;海绵组织为薄壁细胞构成，排列疏松，有丰富的细胞间隙，占整个叶肉组织的50%左右;主叶脉维管束外韧型，导管放射状排成多列;靠近叶柄表皮处可见厚角细胞。详见图1。

2.2.2

叶粉末显微特征。向日葵叶粉末深绿色。非腺毛通常由3～8个细胞组成，直径30～70 μm;腺毛多细胞，通常为6～9个细胞组成，内含分泌物;螺纹及环纹导管易见，5～55 μm;厚角细胞长条形，细胞壁增厚;上下表皮细胞表面观呈不规则形，细胞壁波状弯曲，上下表皮均有气孔，为不定式气孔，副卫细胞常3～4个。详见图2。

2.3 薄层鉴别 按“1.2.2”的薄层鉴别方法，向日葵叶在对照品相应位置有相同的荧光斑点，见图3。

2.4 绿原酸含量的测定

按“1.2.3”高效液相色谱法测定，向日葵叶色谱图见图4。通过该色谱条件测得开花期、果实成熟期向日葵叶中绿原酸含量分别为1.25和2.34 mg/g。

2.5 向日葵叶醇提物抗炎作用研究

2.5.1 向日葵叶醇提物对小鼠耳肿胀的影响。

按“1.2.4”方法将小鼠分组给药，向日葵叶醇提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响如图5和表1所示。结果显示，向日葵叶醇提物高、中、低剂量组对二甲苯致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用（P<0.01），向日葵叶醇提物高、中、低剂量组和阳性对照组（地塞米松磷酸钠注射液组）与空白对照组比较，小鼠耳肿胀程度减小，且肿胀程度与剂量呈依赖关系。

2.5.2 向日葵叶醇提物对小鼠足肿胀的影响。

按“1.2.4”方法将小鼠分组给药，向日葵叶醇提物对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响如图6和表2所示。结果显示，向日葵叶醇提物高、中、低剂量组对角叉菜胶致小鼠足肿胀有明显的抑制效果（P<0.01），向日葵叶醇提物高、中、低剂量组和阳性对照组与空白对照组比较，小鼠足肿胀程度减小，且肿胀程度与剂量呈依赖关系。

3 结论与讨论

向日葵叶的鉴别研究表明，叶横切面可以腺毛、非腺毛、维管束排列类型作为鉴别特征，粉末可以表皮细胞、气孔、腺毛、非腺毛等作为鉴别特征。以乙酸丁酯-甲酸-水-冰醋酸（21∶12∶7.5∶1）为展开剂的薄层色谱结果显示向日葵叶与绿原酸在同一位置有一致的荧光斑点，证明向日葵叶中存在绿原酸。目前向日葵的价值主要集中在果实上，对向日葵叶的利用极低，向日葵叶又是其主要部位，以高效液相色谱法测定处于开花期和果实成熟期的向日葵叶中绿原酸含量，分别为1.25、2.34 mg/g。向日葵叶醇提物高、中、低剂量组对角叉菜胶致小鼠足肿胀有明显的抑制效果，对二甲苯致小鼠耳肿胀也有显著的抑制作用（P<0.01），且都存在剂量依赖性，因此能证明向日葵叶醇提物具有良好的抗炎效果。可以该研究为基础研发相关产品，使向日葵得到充分的利用，提高其经济价值。

向日葵作为药食两用植物，在农村范围广泛种植，不仅廉价易得，且便于储存，目前主要以种子食用。向日葵作为一种新兴的药用植物，不仅疗效显著，并且安全无毒，具有良好的开发前景，在中药资源紧缺的情况下，对向日葵药用价值进行研究，为中药资源开发提供依据，有利于实现中药资源的可持续发展，促进农村农业经济发展。

参考文献

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