桥本氏甲状腺炎患者雌激素与淋巴细胞亚群相关性研究

荆 鹤，宋玉国

(北华大学附属医院，吉林 吉林 132011)

桥本氏甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis，HT)是一种由多种淋巴细胞共同参与的疾病，近几年，其发病率呈现逐年递增的趋势，多发于雌激素产生明显变化的围绝经期女性，约为同年龄期男性的5～10倍[1-3].

淋巴细胞亚群是一类具有高度异质性特点的细胞群体，B淋巴细胞的活化发生在淋巴结和脾脏等次级淋巴器官中，HT患者甲状腺组织中的B淋巴细胞间接被激活，并在体外自发分泌抗甲状腺抗体[4].NK细胞以调节ADCC反应为渠道，参与机体内的免疫反应，从而导致甲状腺功能衰竭.有研究[5]表明：NK细胞通过CD40-CD154相互作用的调节途径诱导自体静息状态下的B细胞合成免疫球蛋白，并参与免疫球蛋白同种类型间的相互转化.因此，HT患者血液中B细胞、NK细胞数量的不平衡和细胞活性不稳定等特征对疾病的发展进程产生了一定影响.

1 材料与方法

1.1 材 料

参照《内分泌及代谢性疾病临床诊疗指南》[6]中桥本氏甲状腺炎诊断要点，并排除妊娠、感染等其他影响甲状腺功能的因素，筛选围绝经期女性病例组42例，年龄40～56岁，平均(49.34±3.52)岁.同期健康女性对照组38例，年龄41～52岁，平均(44.72±4.71)岁，其甲状腺功能正常，无其他病史.两组均于空腹状态下抽取静脉血4 mL，分为非抗凝血和抗凝血各2 mL备用.

1.2 方 法

甲状腺激素及相关自身抗体检测：应用科美自动光激化学发光仪(LICA500)检测血清中甲状腺激素、超敏促甲状腺激素、TPO抗体、TG抗体的含量.

雌激素定量检测：应用达成AULIA200全自动化学发光仪检测血清中雌二醇的含量.

T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞亚群检测：每例标本分别标记3个试管，混匀抗凝血后分别向试管中加入50 μL标本全血，向1号试管加入CD3-PC5、CD4-PE、CD8-ECD荧光抗体各10 μL；向2号试管加入CD3-PC5、CD56-PE、CD19-ECD荧光抗体各10 μL；向3号试管加入CD3-PC5、CD4-FITC、CD25-PE荧光抗体各10 μL；分别放置振荡器中混匀15 s，避光状态下室温孵育15 min.在持续振荡下分别再向3个试管加入甲酸600 μL，10 s后加入260 μL碳酸钠、氯化钠、硫酸钠混合溶液，继续振荡10 s.再分别加入0.9%浓度的生理盐水3 mL，1 500 r/min离心5 min，吸弃试管内上清液.依次再加入0.9%生理盐水1 mL，放置混匀10 s.应用Navios流式细胞仪，依次对每个样本的3个标记试管进行测量.

1.3 统计学分析

2 结 果

2.1 甲状腺激素、相关自身抗体及雌二醇检测结果

病例组与健康对照组比较FT4明显降低，TSH、TG-Ab、TPO-Ab以及雌二醇含量均明显升高，两组间检测值比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).见表1.

表1 病例组和对照组甲状腺激素、相关自身抗体及雌二醇临床指标Tab.1 Clinical index of thyroid hormone，related antibody and estradiol in case group and control group

2.2 T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞亚群检测结果

与健康对照组比较，病例组Treg细胞显著降低，B淋巴细胞、NK细胞明显升高，两组检测值比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).见表2、图1～3.

图1 病例组与对照组CD4+CD25+Treg细胞亚群流式细胞检测结果Fig.1 Flow cytometry test results of CD4+ CD25+ Treg cell subsets in case group and control group

图2 病例组与对照组B细胞亚群流式细胞检测结果Fig.2 Flow cytometry test results of B cell subsets in case group and control group

图3 病例组与对照组NK细胞亚群流式细胞检测结果Fig.3 Flow cytometry test results of NK cell subsets in case group and control group

表2 T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞亚群检测结果Tab.2 Test results of T lymphocyte，B lymphocyte and NK cell subsets

2.3 病例组雌二醇含量变化对淋巴细胞亚群的影响

按雌二醇卵泡期正常参考范围值(18.9～276.1 pg/mL)上限与下限之和的平均值(147.5 pg/mL)为分界点，将HT病例组数据分为雌二醇偏高组(n=18)和雌二醇偏低组(n=24)，分析雌二醇含量变化对淋巴细胞亚群的影响.见表3.雌二醇偏高组B细胞检测值为(12.89±4.92)%，对比雌二醇偏低组B细胞检测值(7.66±3.21)%明显偏高，差异具有统计学意义(P<0.01).

表3 病例组中雌二醇含量变化对淋巴细胞亚群影响Tab.3 Influence of estradiol content change on lymphocyte subsets in case group

3 讨 论

桥本氏甲状腺炎患者病理生理表现为甲状腺组织被大量淋巴细胞和浆细胞浸润，随着甲状腺滤泡被大量破坏，甲状腺激素随之改变，同时淋巴细胞和浆细胞也将导致甲状腺功能发生障碍.NK细胞作为人体免疫系统的第一道防线，能够在不致敏的情况下发挥免疫学效应，是一类独特的淋巴细胞亚群.同时还可以分泌细胞因子和趋化因子，溶解靶细胞参与特异性免疫系统的调节，是连接自然免疫和获得性免疫的重要桥梁[7].已有实验[8-12]证明：NK细胞通过CD154与B细胞表面CD40相互作用，调节诱导自体静息状态下的B细胞合成免疫球蛋白，并参与B细胞的成熟、免疫球蛋白的分泌和同种类型间的相互转化(如转换为IgG和IgA).NK细胞在自身免疫性疾病中直接破坏靶器官内参与反应的细胞，通过ADCC作用调节并适应机体免疫反应，HT患者甲状腺细胞中存在抗体介导细胞毒性反应，致使甲状腺功能衰竭.本实验针对NK细胞进行了检测分析发现：病例组NK细胞数量高于健康对照组(P<0.01)；HT是一种慢性淋巴细胞性甲状腺疾病，当机体发生免疫应答时，导致外周血中NK细胞不断增加.由此可见，HT患者外周血中NK细胞数量不平衡、细胞活性不稳定等特征，均在疾病的发展进程中发挥重要作用.

B细胞虽然在免疫细胞中是一个独立的细胞群体，但它与T细胞相辅相成，在细胞免疫系统中发挥着重要作用.B细胞表面的免疫球蛋白跨膜受体能够特异性识别抗原，激活并启动机体免疫反应，以主要组织相容性复合体-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子为载体将抗原呈递给T细胞，Th细胞辅助支持B细胞活化，同时诱导被抗原过度刺激的B细胞产生相应的抗体[13-15].相关研究[16]表明：B细胞通过产生IL-10来抑制Th1细胞的免疫反应.B细胞不仅可以辅助T细胞，在甲状腺疾病中也发挥其重要细胞活性，HT患者甲状腺组织中的B细胞被激活后自发分泌相关抗体，ADCC作用是引起甲状腺组织内滤泡细胞破坏及凋亡的重要因素.HT患者B细胞数量增多，在B细胞聚集处可见甲状腺滤泡破坏灶.分析其检测数据，结果显示：病例组B淋巴细胞数量高于对照组，且两组间B细胞数量具有统计学意义(P<0.05).由此可见，探寻B细胞参与机体免疫反应中的细节，可以为B细胞介导免疫应答奠定基础，同时也为HT患者在治疗方面提供新的思路.

HT是一类器官自侵袭性疾病，多发于雌激素产生明显变化的围绝经期女性，且女性患病率要高于同年龄期的男性，男女发病比率可达到1∶(5～10)，可见性别影响桥本氏甲状腺炎的易感性[17-19].同时围绝经期是女性体内雌二醇水平波动时期，针对这类女性患者进行研究[20]，有助于理解雌二醇在HT患者体内所发挥的作用.通过检测42例围绝经期HT女性雌二醇水平，并与38例围绝经期健康女性进行对比发现，病例组雌二醇含量升高，并且雌二醇含量在两组中存在明显统计学意义(P<0.05).雌激素不仅仅在生殖器官中发挥作用，同时也可以作用于机体免疫系统；雌激素刺激机体免疫系统，并参与免疫调节，免疫系统是雌激素直接作用的靶点，雌激素与淋巴细胞内的雌激素受体结合，影响淋巴细胞的免疫功能，同时导致淋巴细胞数量的改变；应用内分泌激素的免疫调节特性，有助于分析雌激素在桥本氏甲状腺炎疾病中所发挥的作用，进而影响桥本氏甲状腺炎的发展及预后[21-25].综合分析HT患者淋巴细胞亚群及雌激素等指标，阐明各检测指标在桥本氏甲状腺炎疾病中的免疫学作用，可为HT的治疗提供新的思路和方法.