外周血miR-155表达对急性心肌梗死患者术后发生左心室重构的预测效果

急性心肌梗死（AMI）是一种常见急危重症。受人口老龄化、生活饮食习惯改变以及社会、心理等因素的影响，我国AMI的发病率逐年上升，且死亡率较高。经皮冠状动脉介入术（PCI）是治疗AMI的重要手段，能够快速有效恢复缺血心肌的血供。但研究发现，部分患者PCI 术后发生左心室重构（LVR）导致心力衰竭，影响患者临床结局

。因此，早期预测LVR有助于AMI患者预后的改善。由于微小RNAs（miRNAs）在心血管疾病的发展过程中发挥着功能性作用，因此对其表达和活性的调节成为控制心血管疾病发展的一个潜在治疗靶点

。然而，miRNAs在AMI发生后的预后价值较少受到关注。近年研究发现miR-155与小鼠AMI后LVR及心功能有关

。本研究旨在探讨外周血miR-155表达对AMI患者术后发生LVR的预测效果。

今年10月31日，中共中央政治局就人工智能发展现状和趋势举行第九次集体学习。高文院士对相关问题作了讲解，并谈了意见和建议。习近平总书记在学习中指出，加快发展新一代人工智能是我们赢得全球科技竞争主动权的重要战略抓手，要以更大的决心、更有力的措施，打造多种形式的高层次人才培养平台，加强后备人才培养力度，为科技和产业发展提供更加充分的人才支撑。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2019年1月至2020年1月在郑州人民医院行PCI的AMI患者142例。本研究经我院伦理委员会批准（2018-016）。

1.2 选取标准 纳入标准：符合《急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南》

中相关诊断标准；发病24 h内行PCI；病历资料完整；患者及家属对本研究内容知情同意。排除标准：术后生存时间少于1年；合并自身免疫性疾病、心肌及心瓣膜疾病、恶性肿瘤、严重肝肾功能障碍、严重感染性疾病等；未能完成随访者。

1.3 方法

张仲平松了一口气，再次紧张地看了一眼手机上的时间。他不知道楼上的情况到底怎么样了。他朝自己的车子走去，偶一回头，却发现曾真拿着相机回身又向胜利大厦里面走去。

2.2 两组患者实验室指标比较 LVR组miR-155相对表达量、NT-proBNP、cTnI及hs-CRP水平均高于非LVR组，差异有统计学意义（

＜0.05），见表2。

2.4 miR-155对AMI患者术后1年发生LVR的预测效果 以miR-155相对表达的均值1.54为界，142例患者分为低表达组（

＝68）和高表达组（

＝74）。miR-155高表达组LVR发生率为32.43%（24/74），高于低表达组的13.24%（9/68），差异有统计学意义（χ

＝7.321，

＜0.05）。ROC曲线显示，miR-155预测AMI 患者术后1 年发生LVR 的AUC 为0.864（0.808，0.916）， 最佳阈值为1.71， 灵敏度为82.43%，特异度为86.02%，见图1。

心室重构是心肌细胞凋亡、心肌肥厚和心肌纤维化的复杂病理过程，常由高血压、AMI、心力衰竭等多种心血管疾病引起。PCI术后发生LVR是导致AMI患者死亡的重要危险因素之一。虽然超声检测能够准确诊断PCI术后发生LVR，但缺乏对疾病的预测价值，不具有临床早期指导意义。因此，寻找可以预测LVR的生化指标具有重要的临床价值。

1.3.1 资料收集 收集患者姓名、年龄、性别、既往病史、罪犯血管类型、病变支数、支架类型、术后用药情况等临床资料。

2 结果

2.1 两组患者临床资料比较 复查超声心动图发现，142例患者中术后1年内发生LVR 33例，发生率为23.24%。LVR 组和非LVR组性别、年龄、既往病史等临床资料比较，差异均无统计学意义（

＞0.05），见表1。

1.3.2 外周血miR-155的检测 试剂及仪器：人淋巴细胞分离液购自美国GE公司；miRNA提取试剂盒购自赛默飞世尔科技有限公司；引物由广州锐博生物科技有限公司合成；TaqMan microRNA反转录试剂盒及实时定量PCR仪（7300型）购自美国应用生物系统公司；紫外分光光度计购自日本Shimadzu公司。于术后7 d，采集患者空腹静脉血6 mL，采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMC。根据试剂盒说明书，使用TRIzol LS试剂从PBMCs细胞中提取总RNA，－80 ℃储存待测。用紫外分光光度计检查RNA浓度和质量，采用TaqMan microRNA反转录试剂盒逆转录合成cDNA，用于TaqMan micro RNA 分析的引物为：对照U6 引物，上游为5′-GCTTCGGCAGCATATATATATAAAT-3′，下游为5′-CGCTTCACGAATTGTCAT-3′，扩增长度94 bp。miR-155 引 物， 上 游 5′ -GGAGGTTAATGCTAATCGTGATAG-3′，下游5′-GTGCAGGTCCGAGGT-3′，扩增长度60 bp。使用实时定量PCR仪，以小分子RNAU6为内参，将PCR反应体系（20 μL）用于RT-qPCR测定，反应条件如下：95 ℃10 s，95 ℃15 s，60 ℃60 s，循环40次。根据荧光曲线和循环阈值判断结果，以2

表示miR-155的相对表达量。1.3.3 超声心动图检查 所有患者于术后7 d行胸超声心动图检查，由经验丰富的检验科医师操作，超声心动图仪为飞利浦iE33型，心脏探头S5-1，频率1～5 MHz。行左心室造影，取心尖部四腔及二腔心切面的视图，通过双平面Simpson法测量左室舒张末期容积（LVEDV）、左室收缩末期容积（LVESV）、左心室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期内径（LVEDd）。术后1年复查超声心动图，若LVEDV值较初次测量时增加≥20%则为LVR

。根据复查结果，将患者分为LVR组和非LVR组。

用电子天平精确称取叶黄素标品5mg置于50mL棕色容量瓶中，用色谱级甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配置成浓度为50μg/mL的标准溶液。精密 移 取 0.5mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL 溶 液至50mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度并摇匀，制得浓度分别为 0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL 的标准溶液，充氮备用。操作在昏暗条件下进行[20]，每个系列浓度进样三次，按照上述色谱条件测定标准叶黄素的峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），质量浓度（μg/mL）为横坐标（X）绘制标准曲线。

1.3.4 其他实验室指标 于术后7 d采用免疫荧光法检测所有患者的血清氨基末端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平，试剂盒购自Biomerieux公司；采用免疫化学发光法检测肌钙蛋白I（cTnI）水平，免疫比浊法检测超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平，试剂盒购自Beckman公司。

3 讨论

2.3 AMI患者术后1年发生LVR的多因素Logistics回归分析 以miR-155、NT-proBNP、cTnI、hs-CRP为自变量，LVR为因变量（是＝1，否＝0），多因素Logistics回归分析显示，miR-155为AMI患者术后1年发生LVR的独立危险因素（

＜0.05），见表3。

价格折扣是生鲜农产品行业中供应商通常采取的加大对生鲜农产品销售的手段，一般对大批量采购会存在相应的价格折扣，而对小批量订货则有可能会收取其他费用，从而产生企业的价格折扣成本。

AMI后发生LVR与心肌细胞的凋亡、细胞因子释放、神经内分泌系统激活、免疫系统活化、相关信号通路激活和基因的异常表达等有关，但具体机制尚未明确。较多研究发现AMI发生后，心肌缺血会改变心脏结构，使心功能下降和心室壁张力增高，导致NT-proBNP的分泌增加

。cTnI是一种特有的心肌结构蛋白，是心肌损伤高灵敏度和特异度标志物，在心肌细胞缺血性损伤中显著上升。陶逸菁等

研究发现，心肌梗死急性期cTnI水平与左心室几何结构改变和重构有关，可能有助于预测随后的心脏功能。AMI发生后数小时炎症因子被释放或表达增加，Garc a等

研究分析认为炎症反应与LVR相关。hs-CRP是一种反映非特异性炎症反应的指标之一，可能参与心室重构和心力衰竭。miRNAs 是一类具有调节功能的内源性非编码RNA，长度为20～25个核苷酸，由RNA聚合酶Ⅱ转录的初级聚合酶产生。一个miRNA可以作用于多个靶mRNA，多个miRNA也可以作为一个功能簇来协调特定基因的表达，参与细胞增殖、分化、凋亡和血管生成等。miRNA在心肌梗死、肥大、纤维化、心力衰竭等心血管疾病的病理生理学中起着至关重要的作用。miR-155是miRNAs中的一员，最初发现于儿童Burkitt淋巴瘤中。随后越来越多的证据表明，miR-155是一种细胞内稳态的重要多效性调节因子和典型的多功能miRNA，在免疫、炎症、病毒感染和心血管疾病中调节多种病理生理途径。有研究报道，miR-155可通过转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad2信号通路参与调节心脏纤维化

。本研究结果发现，LVR组miR-155相对表达量、NT-proBNP、cTnI及hs-CRP水平均高于非LVR组，说明miR-155、NT-proBNP、cTnI及hs-CRP均参与了心室重构，与上述研究报道

结果一致。

“国无德不兴，人无德不立。”“爱国是核心理念和永恒主题，敬业是立身之基，诚信是处世之本，友善是行事之道。”

目前，NT-proBNP广泛用于判断左心室功能和患者预后，但NT-proBNP对LVR的预测价值的研究存在不同结果。此外，虽然cTnI和hs-CRP可预测LVR，但受较多客观因素的影响，预测能力有限。本研究经多因素Logistics回归分析发现NT-proBNP、cTnI、hs-CRP对LVR没有独立预测价值，与殷云杰等人

研究结论一致。而王中良

研究发现，患者发病后24 h的血浆NT-ProBNP水平可较好预测AMI患者发生LVR；白洁等人

研究发现，术后24 h的cTnI、hs-CRP对预测AMI患者术后发生LVR有一定价值。究其原因，可能与指标测量时间及临床干预措施不同有关。miRNA能在组织、血清和血浆等标本中稳定存在，这个特性使其有望成为一种新型分子标志物，为AMI患者预后预测提高新的研究方向

。本研究以miR-155相对表达的均值1.54为界，将142例患者分为低表达组和高表达组，结果发现miR-155高表达组LVR发生率高于低表达组。经多因素Logistics 回归分析miR-155 对LVR有预测价值，且ROC曲线分析显示，miR-155预测AMI患者术后1年发生LVR的灵敏度、特异度较高，进一步表明miR-155与左心室不良重构有关。有报道称

，miR-155的过度表达导致细胞因子信号抑制分子1（SOCS1）水平降低和促纤维化TGF-β1/Smad3信号过度激活，从而导致过度纤维化和不良心室重构。Ren等

研究证明抑制心肌成纤维细胞中miR-155的表达可以通过靶向调节肿瘤蛋白P53诱导核蛋白1（TP53INP1），改善左心室功能、减少梗死面积并减弱胶原沉积，进而改善心室重构。上述例子提供了将来利用miR-155作为新靶点开发心血管疾病有效治疗策略的可能性。

综上所述，PCI术后7 d外周血miR-155是1年内发生LVR的独立预测因子，有望成为预测LVR的生物标志物。

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