Ki-67、P16、Pin1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

陈婷婷，任晓燕，杨棹霞，陶玉梅，袁明明，黄国琴

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤，其发展是多步骤的生物过程，由一系列的遗传和转录变化启动[1]。早期的宫颈癌绝大部分经手术、放疗或化疗等综合治疗后预后较好，晚期患者的替代治疗预后较差。因此，早期诊断宫颈癌并及时给予相应治疗可改善患者预后。鳞状细胞癌和腺癌是常见的组织学亚型，分别约占所有宫颈癌的70%和25%[2]。有研究报道，人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要危险因素，而HPV16和HPV18占宫颈癌及癌前病变的70%[3]。HPV的DNA检测敏感度高，但特异度有限，因此临床需要更具特异性的标志物进行宫颈癌筛查。Ki-67是一种与细胞周期有关的核蛋白，在细胞周期的所有活跃期均表达。Ki-67被认为是肿瘤发展的预测因子，其表达水平与多种癌症的不良预后相关，如乳腺癌和非小细胞肺癌。因此，Ki-67表达水平可反映细胞的增殖状态[4]。P16参与调节细胞内活跃的细胞周期蛋白D/CDK的水平，反馈调节微小染色体维持蛋白(MCM)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白E的水平。有研究表明，宫颈癌中P16过度表达是HPV E7蛋白对pRb功能性失活的结果[5]。因此，使用P16免疫细胞化学分析作为传统宫颈癌筛查方案的补充，可能有助于减少假阳性和假阴性结果[6]。脯氨酰异构酶Pin1在许多肿瘤组织中过度表达，对肿瘤的发生和进展有着显著的影响。因此，评估针对Pin1的癌症治疗方案的效果非常重要[7-8]。本研究探讨宫颈癌组织中Ki-67、P16、Pin1的表达及临床意义，旨在为临床早期诊断和治疗提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 选择2018年3月—2021年5月收治的宫颈癌188例。纳入标准：术后病理学检查确诊为宫颈癌；年龄>18岁；经检查无严重内科或外科疾病；临床资料完整。排除标准：入院前3个月内接受过放疗和(或)化疗的患者；妊娠期或哺乳期患者。188例中年龄>45岁85例，≤45岁103例；宫颈鳞状细胞癌163例，宫颈腺癌25例；国际妇产科联盟(FIGO)临床分期：Ⅰ期98例，Ⅱ期64例，Ⅲ期26例；有淋巴结转移117例，无淋巴结转移71例；分化程度：低分化57例，中分化78例，高分化53例。

1.2方法 术中取宫颈癌组织及癌旁正常组织，使用甲醛固定、石蜡包埋，用Leica RM2235全自动轮转式切片机连续切片，约5 μm，常规烘烤脱蜡,最后分别用兔单克隆抗体Ki-67、鼠单克隆抗体P16、兔单克隆抗体Pin1对标本进行免疫组织化学(SP)染色，按照SP检测试剂盒要求进行。兔单克隆抗体Ki-67、鼠单克隆抗体P16、兔单克隆抗体Pin1及SP检测试剂盒均购自广州安必平公司。Ki-67、P16和Pin1主要在细胞核和(或)细胞质中表达，以染色出现棕黄色或棕褐色颗粒判定为阳性细胞。

1.3观察指标 观察Ki-67、P16和Pin1在宫颈癌及癌旁正常组织中的表达情况，并分析阳性表达患者的临床病理特征。分析Ki-67、P16和Pin1阳性表达的相关性。

1.4统计学方法 应用SPSS 20.0进行数据分析，计数资料以率(%)表示，采用χ2检验，等级资料采用秩和检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析。α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1Ki-67、P16和Pin1的表达情况 宫颈癌组织中Ki-67、P16、Pin1阳性表达率均高于癌旁正常组织，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 宫颈癌组织和癌旁正常组织中Ki-67、P16和Pin1的阳性表达情况[例(%)]

2.2Ki-67、P16、Pin1阳性表达与临床病理特征的关系 宫颈癌组织中Ki-67和P16阳性表达与年龄、病理类型、FIGO分期、淋巴结转移和分化程度均无关(P>0.05)；Pin1阳性表达与年龄、FIGO分期、淋巴结转移和分化程度均无关(P>0.05)，与病理类型有关(P<0.05)。见表2。

表2 Ki-67、P16、Pin1阳性表达与宫颈癌临床病理特征的关系[例(%)]

2.3Ki-67、P16和Pin1表达的相关性 宫颈癌组织中Ki-67阳性表达与P16表达呈中等正相关(r=0.541，P<0.05)；Ki-67阳性表达与Pin1表达呈较弱正相关(r=0.368，P<0.05)；P16阳性表达与Pin1表达呈中等正相关(r=0.680，P<0.05)。

3 讨论

宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的常见恶性肿瘤，且在世界范围内有较高的病死率[9-12]，通过改进临床筛查和诊断方法，其病死率在发达国家下降了约75%[13]。宫颈活组织检查为诊断宫颈癌的金标准，然而由于宫颈细胞变异性极高，因此对宫颈癌患者进行准确的临床诊断和进展风险的预测非常重要[14-16]。

Ki-67是一种只存在于细胞核内的蛋白质，可用于判断细胞的增殖活性，其位于宫颈上皮内瘤变基底层和副基底层，在具有典型细胞核的细胞中呈阳性表达，随着宫颈上皮内瘤变程度的增加，其阳性表达水平也随之升高[17]。本研究结果显示，宫颈癌组织中Ki-67阳性表达率高于癌旁正常组织，且Ki-67阳性表达与年龄、病理类型、FIGO分期、淋巴结转移和分化程度均无关。提示Ki-67可作为反映病变程度的敏感生物标志物，与之前的研究结果一致[18]。

P16是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，通过作用于细胞周期的G1检查点来调节细胞的增殖。宫颈病变组织中P16的上调与HPV16和18基因的表达有关，表明了P16的上调可引发HPV感染，导致宫颈癌[19]。本研究结果显示，宫颈癌组织中P16阳性表达率高于癌旁正常组织，P16的阳性表达与年龄、病理类型、FIGO分期、淋巴结转移和分化程度均无关，表明P16过度表达是一种有用的标志物。有研究表明，P16在宫颈癌细胞系中表现出致癌活性,表明P16不仅是宫颈肿瘤形成的诊断标志物，也是宫颈癌细胞存活所必需的蛋白[20]。FU等[21]报道P16的消耗可以促进HeLa细胞的化学和放射抗性；ZHANG等[22]发现敲低P16会抑制SiHa和HeLa细胞系中的细胞增殖、迁移和侵袭；MENDAZA等[23]研究报道，探索P16的亚细胞位置可以提供比P16整体表达检测更有用的抗肿瘤活性信息。

Pin1是肿瘤进展的关键催化剂，涉及脯氨酸介导的磷酸化[24]。Pin1通过破坏癌基因和肿瘤抑制基因之间的平衡来促进肿瘤发生，并激活许多癌症驱动途径[7]。敲低Pin1基因可减少许多肿瘤生长和转移，如乳腺癌、肺癌和肝癌[25]。本研究结果显示，宫颈癌组织中Pin1阳性表达率高于癌旁正常组织，Pin1阳性表达与年龄、FIGO分期、淋巴结转移和分化程度均无关，与病理类型有关。提示Pin1在宫颈癌中有重要作用,且鳞状细胞癌Pin1阳性表达率低于腺癌，可能与癌细胞的类型不同有关。有研究报道，Pin1抑制剂具有肿瘤抑制作用[26-27]。Pin1抑制剂和激动剂在其他相关疾病中的应用研究有限，需要对Pin1进行更详细的临床研究。

已经有研究证明，P16/Ki-67双染色可提高组织病理学的诊断准确性[27]，但Ki-67、P16和Pin1间的相关性研究报道较少。本研究结果显示，宫颈癌组织中Ki-67阳性表达与P16和Pin1表达呈正相关，P16阳性表达与Pin1表达呈正相关，推测Ki-67、P16和Pin1可以作为评估宫颈癌病情的生物标志物，并可能存在协同作用。

综上所述，Ki-67、P16和Pin1在宫颈癌组织中表达上调，可作为宫颈癌诊断的重要生物标志物。