探讨妊娠糖尿病患者外周血miRNA-21检测的临床应用效果

王 乐,朱琳芳,毕艳平

（1.吉林中西医结合医院检验科;2.吉林中西医结合医院妇产科,吉林吉林 132000）

妊娠糖尿病是指没有糖尿病症状的女性在怀孕时出现高血糖的症状。该病的发生提升了孕妇的临床风险性[1]。孕妇在妊娠过程中发生糖尿病的病因主要对胰岛素产生拮抗作用的激素分泌量呈现出明显增加趋势，同时对胰岛素的敏感度降低[2-3]。明艳等[4]医学者经临床研究证实，妊娠糖尿病患者的外周血miRNA-21表达明显高于正常群体，临床可通过该项指标评价孕妇是否患有妊娠糖尿病，同时评估患者病情程度。分析外周血miRNA-21检测在妊娠糖尿病患者中的表达情况对给予患者及时诊断和针对性治疗具有积极意义。本次研究以妊娠糖尿病患者为对象，分析外周血miRNA-21检测的应用效果。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取吉林中西医结合医院2019年6月至2020年12月期间收治的75例妊娠糖尿病患者作为本次研究观察组，选取同期75例无糖尿病孕妇作为对照组。对照组孕妇年龄为22～38岁，平均年龄（28.18±4.89）岁；产次1～2次，平均产次为（1.18±0.32）次；孕周22～32周，平均孕周为（27.32±1.25）周；观察组孕妇年龄为23～39岁，平均年龄（28.76±4.13）岁；产次1～2次，平均产次为（1.41±0.22）次；孕周21～31周，平均孕周为（27.87±1.12）周。两组患者一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。诊断标准[5]：于孕24～28周行75 g口服葡萄糖耐量实验，达到以下1项或1项以上条件即可确诊：①1 h血糖不低于10.0 mmol/L；②2 h血糖不低于8.5 mmol/L。纳入标准：①处于21-32孕周；②具有完整临床资料；③在近3个月内不存在口服激素类药物和避孕药史；④单胎妊娠产妇。排除标准：①存在子宫内膜异位症；②有卵巢手术史；③存在盆腔结核史；④同时具有其他严重性内分泌疾病。研究取得吉林中西医结合医院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法 于清晨空腹状态下和餐后2 h采集两组孕妇静脉外周血各2 mL，常规方式对两组孕妇血糖水平进行检测。采用TRIzol试剂（北京天根生化科技有限公司，规格：100 mL）移步提取法提取外周血总RNA，于-- 80 ℃环境中对所提取到的总RNA进行冻存处理。采取电泳法检测RNA完整性，采取紫外可见分光光度计（Amer sham，型号：Ultrospec 2100 pro）检测RNA纯度和浓度。

调查孕妇的相关资料，检测孕妇的血糖指标，包括孕妇的孕次、年龄、产次、身高、孕周等各项一般资料，检测并记录两组孕妇的空腹血糖水平（FPG）、餐后2 h血糖水平（2 hPG）和外周血miRNA-21水平。通过qRT-PCR对两组孕妇的miRNA-21表达水平展开检测，选取实时荧光定量PCR仪（北京金诺美生物技术有限公司，国械注准20153220948，型号：GNM-C7-8）实施qRT-PCR。对于cDNA和合成体系来说，其共计含有总RNA20～25 ng，将反应条件设置为42 ℃，1 h；95 ℃，5 min，PCR反应总体积参数为 20 μL。将实时PCR反应条件设置为先于95 ℃展开预变性，时间为 10 min，然后调整为 95 ℃，10 s;60 ℃，1 min，于实时荧光定量PCR仪上展开扩增反应。根据在内参U6的反应体系中获取到的Ct值和niiRNA-21来对两组孕妇的miRNA-21的相对表达水平展开计算。将5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作为miRNA-21的上游引物，将5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作为miRNA-21的下游引物，将5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作为U6上游引物，将5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作为U6下游引物。

1.3 观察指标 ①分析妊娠糖尿病发生的影响因素：包括孕妇年龄超过35岁、产前肥胖、妊娠期营养过度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。其中产前肥胖的判定依据为肥胖度超过10%，肥胖度=（实际体质量-标准体质量）/标准体质量×100%；妊娠期营养过度的判定依据为妊娠前3个月体质量增加超过3 kg，3个月后每个月体质量增加超过0.35 kg；以孕妇主观意愿判定其是否喜食甜食。②对妊娠糖尿病发生展开Logistic多因素分析，包括孕妇年龄超过35岁、产前肥胖、妊娠期营养过度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0软件进行数据分析，计量资料用（±s）表示，行t检验；应用Logistic回归分析，行Waldχ2检验，P＜0.05差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 妊娠糖尿病发生的影响因素分析 对照组孕妇年龄超过35岁、产前肥胖、妊娠期营养过度、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21的占比低于观察组（P＜0.05），见表1。

表1 妊娠糖尿病发生的影响因素分析[例数（%）]

2.2 妊娠糖尿病患者多因素分析 妊娠糖尿病发生的影响因素主要有孕妇年龄超过35岁、产前肥胖、妊娠期营养过度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21，OR值分别为 1.661、0.825、1.467、1.579、0.789和1.657（均P＜0.05），见表2。

表2 分析妊娠糖尿病发生的影响因素

3 讨论

当下，妊娠糖尿病缺乏统一的临床诊断和筛查标准，受该病引发病因具有复杂性影响，该病的发生与环境因素和遗传因素等密切相关，病情监控尚无可靠且明确的生物标志物。miRNA-21来源于长RNA转录物，不存在非编码DNA，是翻译阻遏物起作用的目标mRNA与核苷酸的3'UTR配对[6]。大多数学者认为miRNA-21是生物病理学的重要控制器和基因表达的关键监管者，胰岛β细胞在调节胰岛素过程中，miRNA-21发挥着非常关键的作用[7]。胰岛素抵抗作用的主要过程为激活磷脂酰肌醇-3-激酶和丝裂原活化蛋白激酶，对细胞代谢、生长和凋亡过程起到控制作用[8]。

因miRNA-21能够对妊娠糖尿病的发生起到调控作用，对其表达量进行抑制可以调控患者胰岛素水平，经临床研究推测，miRNA-21能够对妊娠糖尿病患者的信号通路起到明显调控作用，可以从更深层次探索该病的相关分子机制，深入研究miRNA-21功能，有利于为妊娠糖尿病患者的临床诊断和治疗开辟全新的渠道[9]。临床上有关于miRNA-21的研究表明，其作用于基因翻译以后，在修饰调控过程中发挥着重要意义，可以在转录后对靶基因的表达起到负性调控作用，其表达存在较高的特异度，能够在血液检测过程中作为疾病诊断的一项重要标志物。妊娠糖尿病属于一种多因素疾病，主要受环境因素、遗传因素等影响，但是当下临床上尚未给出明确的疾病发生机制，需要展开更深入、更彻底的研究。该项指标在糖尿病患者病情进展中发挥着非常重要的作用，但是其于妊娠糖尿病患者中的具体影响尚不清楚。本次研究结果表明，对照组孕妇年龄超过35岁、产前肥胖、妊娠期营养过度、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21的占比低于观察组（P＜0.05）。妊娠糖尿病发生的危险因素主要有孕妇年龄超过35岁、产前肥胖、妊娠期营养过度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。与张小燕等学者[10]的研究结论具有一致性。

综上所述，给予妊娠糖尿病患者外周血miRNA-21检测能够显著提升患者的诊断效果，可以为患者疾病的诊断与评估工作提供重要依据，具有推广价值。