卵巢癌患者组织中SCCA及MTA1表达水平及其与临床特征的关系

张莉，邓姜云，韩林育

1.陕西省第二人民医院妇产科，陕西 西安 710000；2.西安医学院附属宝鸡医院病理科，陕西 宝鸡 721006

卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，早期没有明显病症，当患者出现很明显症状时大多已是晚期，因此卵巢癌5 年内死亡率居高不下[1]。鳞状细胞癌抗原(SCCA)是一种具有高度特异的诊断宫颈鳞状细胞癌的指标，在临床上使用较为广泛[2]。目前少有研究SCCA 蛋白表达可以作为卵巢癌的相关筛查及诊治指标。肿瘤转移相关基因-1(MTA1)作为一种与恶性肿瘤浸润和转移密切相关的基因，已经被大量研究证实在恶性肿瘤组织中呈现高表达[3]。本研究通过检测卵巢癌患者肿瘤组织中SCCA 与MTA-1 蛋白表达水平，分析两者与卵巢癌患者临床病理特征的关系，以期为卵巢癌病理进展、转移情况的诊断提供参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年1月至2018年12月陕西省第二人民医院收治且符合以下纳入和排除标准的120 例卵巢癌患者作为卵巢癌组。纳入标准：①病理学检查确诊为卵巢癌；②确诊前未接受过手术、化疗及放疗；③患者临床资料完整。排除标准：①合并其他类型恶性肿瘤；②合并有严重免疫性疾病者。本研究获得医院伦委会批准。卵巢癌组患者平均(46.78±7.35)岁；浆液性乳头状囊腺癌67例，黏液性囊腺癌33例，子宫内膜样癌20例；病理分级中G1期38例，G2期47例，G3期35例；临床分级中Ⅰ期17例，Ⅱ期45例，Ⅲ期44 例，Ⅳ期14 例；淋巴结转移43 例，无淋巴结转移77 例；肌层浸润程度＜1/2 肌层67 例，≥1/2 肌层53 例。另选取同期在我院经子宫肌瘤切除病理检查确诊为正常卵巢组织的患者56 例作为对照组。对照组患者平均(47.12±6.89)岁。两组患者年龄比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 检测仪器与试剂 免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；SCCA 单克隆抗体和MTA1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，SCCA和MTA1为浓缩液，使用时需分别按1∶125和1∶150比例稀释。

1.3 检测方法 采用免疫组化法检测卵巢组织中SCCA 与MTA-1 蛋白表达水平。先取卵巢癌组及对照组卵巢组织样本用40µg/L 的甲醛进行固定，按相关流程制成4µm厚的切片→脱蜡、水化→磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3 次，5 min/次→滴入3%H2O2，于室温下静置15 min→蒸馏水清洗切片3次，5 min/次→PBS中浸泡5 min，取出后进行高压抗原修复→用蒸馏水清洗3 次，5 min/次→PBS 冲洗3 次，3～4 min/次→滴加50µL 一抗于切片上，在37℃恒温水浴锅中水浴30 min→PBS 洗3 次，5 min/次→滴加50µL 生物素标记二抗于切片上→PBS 洗3 次，5 min/次→利用DAB对切片进行染色操作→洗净DAB 后对切片用苏木素进行复染操作→完成后需要用2%盐酸溶液进行分化→对切片用不同浓度酒精进行梯度脱水及干燥→干燥之后利用二甲苯对切片做透明处理→处理完成后用中性树胶对切片进行封固→将切片放置到光镜下观察染色情况。

1.4 SCCA和MTA1阳性表达判断标准[4-5]根据细胞阳性率和染色强度进行评分：在高倍镜(400×)下，挑选5 个随机且清晰的视野，根据视野中所能观察到的阳性细胞所占比例计分，≤10%计0分，10%～50%计1 分，50%～75%计2 分，＞75%计3 分；根据视野中细胞染色程度进行评分：无色计0 分，淡黄色计1 分，棕黄色计2 分，褐色计3 分。根据两者乘积结果判断结果，≥4分为阳性，＜4为阴性。

1.5 统计学方法 应用SPSS20.0 软件进行数据分析，计量资料符合正态分布，以均数±标准差(x-±s)表示，计数资料比较采用χ2检验，相关性采用Spearman相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的SCCA 和MTA1 阳性表达水平比较 卵巢癌组患者的SCCA和MTA1的阳性表达率明显高于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者的SCCA和MTA1阳性表达水平比较[例(%)]

2.2 不同临床病理特征卵巢癌组织中的SCCA阳性表达水平比较 临床分期Ⅲ/Ⅳ期、肿瘤分级G3、淋巴转移N1/N2及肌层浸润程度≥1/2患者卵巢癌组织中SCCA阳性表达水平高于临床分期Ⅰ/Ⅱ期、肿瘤分级G1/G2、淋巴转移N0及肌层浸润程度＜1/2患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 不同临床病理特征卵巢癌组织中的SCCA 阳性表达水平比较[例(%)]

2.3 不同临床病理特征卵巢癌组织的MTA1 阳性表达水平比较 临床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴转移N1/N2及肌层浸润程度≥1/2 患者卵巢癌组织中MTA1 阳性表达水平高于临床分期Ⅰ/Ⅱ期、淋巴转移N0及肌层浸润程度＜1/2患者，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 不同临床病理特征卵巢癌组织中MTA1阳性表达水平比较[例(%)]

2.4 卵巢癌组织中SCCA 与MTA1 蛋白表达的相关性 120 例卵巢癌患者中有44 例患者瘤组织中SCCA 和MTA1呈现共同阳性表达，经Spearman 相关系数分析发现，两者呈正相关(r=0.409，P＜0.05)，见表4。

表4 卵巢癌组织中SCCA与MTA1蛋白表达的关系

3 讨论

目前临床上将血清SCCA 水平检测用于宫颈、头颈部、食管、肺和气管、泌尿生殖道和肛管部位等鳞癌的预后、病情检测、疗效评估等[6-8]。相关研究指出，SCCA 水平与患者的肿瘤分级、瘤体的大小、肌层侵袭程度和淋巴结转移情况密切相关，同时SCCA 水平高的患者放化疗后的生存率显著降低，其复发率显著提高[9]。王微微等[10]研究了SCCA 在各类妇科肿瘤中的表达差异，发现宫颈鳞状细胞癌患者SCCA 表达水平和阳性率显著高于其它妇科恶性肿瘤和良性肿瘤患者。本研究经免疫组学检验发现，SCCA 蛋白在卵巢癌组织中阳性表达例数较正常卵巢组织升高，临床分期越高的患者阳性表达率越高，存在淋巴转移情况患者中显著高于无淋巴转移情况患者，肌层浸润程度深的患者显著高于浅的患者。表明卵巢癌患者组织病变时会诱导SCCA 蛋白的表达，并且SCCA 会参与到卵巢癌肿瘤发生、发展、转移及浸润过程中。这主要是因为SCCA 主要存在于鳞状细胞的胞质中，患者肿瘤处细胞破裂使SCCA 释放到血清中，进而可导致血清中的SCCA 水平升高，另外，此外像宫颈息肉、宫颈赘生物等都可能导致SCCA的升高[11-12]。

既往研究表明，MTA1 上调表达的瘤组织更容易发生浸润和淋巴转移，在宫颈癌中，MTA1较正常组织会呈现高表达，并且沉默MTA1 基因会表现出宫颈癌细胞的恶性发展[13]。田晓芳等[14]和郭玲等[15]研究发现，子宫内膜癌组织中MTA1 蛋白阳性表达率与正常子宫内膜和非典型子宫内膜增生等相比显著升高，达到78.57%，且MTA1蛋白阳性表达会随着子宫内膜癌的侵袭和转移程度而显著升高，因此把MTA1 表达情况作为子宫内膜癌临床分期和有无淋巴转移的参考指标。本研究结果显示，MTA1 蛋白在卵巢癌组织中阳性表达较正常卵巢组织显著升高，临床分期越高的患者阳性表达率越高，存在淋巴转移情况患者中显著高于无淋巴转移情况患者，肌层浸润程度深的患者显著高于浅的患者。其原因在于，MTA1 是一种癌转移基因，当卵巢癌肿瘤发生、发展、转移及浸润过程时，会诱导MTA1蛋白的合成，对其下游靶蛋白行使其功能，因此临床分期越靠后，发生明显淋巴转移和浸润层度加深，其阳性表达率越高[16]。因此在临床上将MTA1作为一种卵巢癌早期诊断肿瘤标志物具有可行性，但是对于MTA1 的具体分子生物学功能及其作用机制仍需要进一步的研究。通过对SCCA和MTA1在卵巢癌患者中的表达关系发现，两者呈正相关，这说明SCCA和MTA1蛋白表达升高与患者肿瘤发展过程有显著相关性，两者可能在卵巢癌的侵袭转移过程中有着协同作用。

综上所述，SCCA 和MTA1 蛋白表达在卵巢癌患者中都显著上调，且阳性表达率随着卵巢癌侵袭转移程度呈上升趋势，两者在卵巢癌的发展中均有一定作用，但SCCA 与MTA1 参与调控卵巢癌的具体机制还需要继续研究。