miR-98在妊娠期糖尿病患者中的表达及临床意义

寇相欢，郭改利，吴芸

汉中市人民医院妇产科，陕西 汉中 723000

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期特有的疾病类型，主要发生于妊娠20周以后，具有蛋白尿、高血压及水肿等主要临床表现，部分严重患者还存在抽搐、昏迷等，可对母婴结局产生严重影响[1]。截至目前，妊娠期糖尿病的发病机制还有待进一步明确，但多认为与血管内皮损伤、遗传及免疫因素有关，探索其相关机制以预防和改善妊娠期高血压、改善母婴结局已成为现阶段妇科领域的重要课题。

miRNA 是非编码RNA，广泛存在于真核生物中，在与靶基因mRNA 序列特异性结合后可抑制靶基因的降解和翻译RNA，进而介导相关细胞的增殖、凋亡及分化过程。相关研究已证实miR-197、149 等与妊娠期糖尿病的发生、发展具有密切相关性，但关于miR-98的研究资料较少[2-3]。本研究探讨了miR-98在妊娠期糖尿病患者中的表达及其临床意义，旨在为临床妊娠期糖尿病的治疗和预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年1 月至2021 年1 月在汉中市人民医院妇产科产检并分娩的GDM 患者108 例(GDM 组)纳入研究。纳入标准：(1)GDM 诊断符合2010 年国际糖尿病与妊娠研究组制定的诊断标准[4]；(2)单胎初产妇；(3)孕周＞36 周；(4)患者及家属知情同意。排除标准：(1)合并有恶性肿瘤、急慢性严重肝、肾功能障碍等其他疾病；(2)多胎妊娠；(3)合并有其他妊娠期并发症者。同时选取在我院妇产科产检的健康孕产妇100 例作为对照组，两组孕产妇的临床一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，见表1。本研究获得医院伦理委员会批准。

表1 两组孕产妇的一般资料比较()

表1 两组孕产妇的一般资料比较()

1.2 观察指标与检查方法 GDM组产妇分娩新生儿后，留取产妇5 mL 脐血，并且抽取空腹肘静脉血5 mL，4℃条件下3 000 r/min离心10 min，取血清1 mL进行检测。对照组产妇脐血及静脉取血方法同妊娠期糖尿病产妇。(1)miR-98 检测：Trizol 法提取RNA，按照One Step RT-qPCR Kit检测miR-98表达水平，U6基因为内参。miR-98 正向引物：上游5'-AGGGCCTGGTGTGAACTACT-3'，下 游5'-TTCTTTGCTGCTCGCTGA-3'；Mx3005p 仪器计算Real-time PCR，采用Real-time PCR 相对定量法，以2-△△Ct表示miRNA-98水平[5]。(2)实验室指标检测：葡萄糖氧化酶法检测空腹葡萄糖(FPG)，放射免疫法检测空腹胰岛素(FINS)，胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)=(FPG×FINS)/22.5，全自动生化分析仪(美国BD 公司生产，型号AH-800)检测脐血甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

1.3 统计学方法 应用SPSS22.0 软件分析数据，计量资料经Bartlett 方差齐性检验与Kolmogorov-Smirnov正态性检验，均确认具备方差齐性且近似服从正态分布，以均数±标准差(x-±s)表示，组间比较采用t检验；相关性采用Pearson相关分析；采用多元线性回归分析影响血液miR-98表达的因素。检验水准为α=0.05。以P＜0.05差异均有统计学意义。

2 结果

2.1 GDM 组和对照组孕产妇的血液指标比较 GDM 组孕产妇的血液miR-98、HDL-C 明显低于对照组，而FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 GDM组和对照组孕产妇的血液指标比较()

表2 GDM组和对照组孕产妇的血液指标比较()

2.2 GDM组和对照组孕产妇的脐血miR-98及新生儿出生体质量比较 GDM组孕产妇的脐血miR-98相对表达量明显低于对照组，而新生儿出生体质量明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 GDM 组和对照组孕产妇的脐血miR-98 及新生儿出生体质量比较()

表3 GDM 组和对照组孕产妇的脐血miR-98 及新生儿出生体质量比较()

2.3 血清miR-98相对表达量与血清指标的相关性 经Pearson相关性分析结果显示，血液miR-98相对表达量与HDL-C 呈正相关(P＜0.05)，而与FPG、FINS、HOMA-IR、TG和LDL-C呈负相关(P＜0.05)，见表4。

表4 血清miR-98相对表达量与血清指标的相关性

2.4 影响血液miR-98 表达的因素 将HDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 作为自变量，miR-98作为因变量进行多元线性回归分析，结果显示FINS、TG是影响miR-98表达的因素(P＜0.05)，见表5。

2.5 产妇脐血miR-98与新生儿出生体质量的相关性 经Pearson相关分析，GDM组产妇脐血miR-98相对表达量与新生儿出生体质量呈负相关(r=-0.527，P＜0.05)，见图1。

图1 产妇脐血miR-98与新生儿出生体质量的相关性分析图

3 讨论

妊娠期糖尿病发病率为孕妇总数的5%左右，是孕产妇和胎儿死亡的重要原因[6]。最新的临床研究提示部分妊娠糖尿病患者若能够有效控制血压，可以改善妊娠结局，不必终止妊娠，但现阶段关于妊娠期糖尿病的相关机制尚未完全明晰，母婴结局与血糖控制的关系尚存在分歧[7-9]。

miRNA 长19～22 nt，属于非编码RNA，可通过与靶基因3'端的完全或不完全互补结合而抑制目的基因的翻译及表达，并参与个体发育、细胞分化、增殖、代谢、凋亡、迁移和转移等细胞生物学过程[10-11]。大量研究发现miRNA在不同的疾病中呈均现不同的表达谱，并有文献提示着miRNA 与妊娠期糖尿病具有密切关系，但具体机制还有待进一步明确[12-14]。本研究发现GDM 组孕产妇的血液miR-98、HDL-C 明显低于对照组，而FPG、FINS、HOMA-IR、TG 和LDL-C 明显高于对照组，该结果提示GDM 孕妇存在显著的糖脂代谢异常和miR-98异常表达。相关机制研究提示miR-98可通过抑制妊娠糖尿病小鼠的脂肪特征蛋白基因从而调控磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B 通路减轻胰岛素抵抗和肝糖异生，还可介导炎症反应，致使血管内皮功能障碍，诱发动脉粥样硬化和糖尿病等[15]，为探讨妊娠期糖尿病疾病发展奠定了理论基础，这也与本研究结果具有一致性。

进一步研究发现GDM 组孕产妇的脐血miR-98相对表达量明显低于对照组，新生儿出生体质量明显高于对照组，这可能是因为miR-98 能通过相关通路影响胰岛β细胞功能，降低胰岛素转录因子水平，调节胰岛素合成和分泌，进而影响糖脂代谢和新生儿体质量；此外，骨骼肌是代谢和利用的主要组织之一，其能够通过胰岛素介导葡萄糖摄取，而骨骼肌葡萄糖摄取能力下降是骨骼肌胰岛素抵抗的表现形式，进而影响新生儿体质量[16]。

血液指标相关性分析结果显示孕产妇的血液miR-98 相对表达量与HDL-C 呈正相关，而与FPG、FINS、HOMA-IR、TG和LDL-C呈负相关；多元线性回归分析结果显示：FINS、TG 是miR-98 的影响因素。该结果提示GDM患者血液miR-98与糖脂代谢有关，miR-98 可能参与了妊娠期高血压患者的糖脂代谢异常的进程，同时胰岛素抵抗及血脂异常状态可能影响了miR-98的表达。miR-98表达下降抑制p65蛋白巯基亚硝基化作用及内皮型一氧化氮合酶而降低一氧化氮生物活性，也可能激活核因子κB表达介导血管内皮损伤，影响血管内皮功能，诱发妊娠期高血压[17]。此外，相关研究提示miRNAs 主要通过抑制靶基因的特殊位点降解靶mRNA和抑制靶mRNA的翻译，进而对靶基因负性调控，发挥肿瘤转移和生长的作用，还可介导血管炎症反应，引起血管内皮功能障碍，进而引发糖脂代谢紊乱[18]。

孕产妇的脐血miR-98 与新生儿体质量的相关性结果显示GDM 组脐血miR-98 相对表达量与新生儿出生体质量呈负相关。妊娠期糖尿病孕妇脂肪组织中miR-98 异常表达，可能与miR-98 降低胰岛素敏感性的作用相关。妊娠期糖尿病孕妇血糖高水平使葡萄糖通过胎盘转运进入胎儿体内，刺激胎儿β胰岛细胞肥大、增生，刺激胰岛素分泌增加，抑制脂解作用并促进糖原、蛋白质、脂肪合成和，继而发生高胰岛素血症，使胎儿体质量升高。但也有研究提示妊娠期糖尿病孕妇胎儿娩出后却容易发生新生儿低血糖，这可能与妊娠期糖尿病孕妇脐血中miR-98 低表达密切相关，而miR-98 在外周血及脐血中具有不同的表达模式，可能与孕妇及新生儿不同的血糖改变相关，这也说明了miR-98 参与了妊娠期糖尿病的发生、发展过程[19-20]。

本研究针对GDM 患者血液及脐血miR-98 表达对机体影响的相关机制进行了分析，尝试对糖脂代谢的介导途径进行了探索，具有一定的创新性和临床参考价值，但具体的相关信号通路还有待明确和研究。综上所述，GDM 患者血液及产妇脐血miR-98 表达下调，血液miR-98 与糖脂代谢有关，同时产妇脐血miR-98与新生儿出生体质量有关。