小麦中呕吐毒素检测方法的研究

马宏伟，刘永智

（1.鞍山市粮油质量卫生监测站，辽宁鞍山 114000；2.丹东市粮食质量监测站，辽宁丹东 118000）

1 呕吐毒素的危害与最高限值

1.1 呕吐毒素的危害

从化学性质分析来看，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），又称呕吐毒素，其之所以被称为呕吐毒素是因为人及其他动物在大量食用该物质后，会引发机体呕吐反应。结合毒理学研究结果，发现呕吐毒素具备免疫毒性、细胞毒性、神经毒性等毒性，当人及动物摄入一定量的DON后，轻则出现呕吐、乏力、头晕，重则引起腹泻、脏器损伤、免疫功能障碍等急性中毒症状，因此，关于呕吐毒素的研究已成为业内乃至社会广泛关注的热点，尤其是国家食品卫生安全监督部门，都迫切希望能找到一种快速、高效、便捷、准确度高的检测方法，确保超标呕吐毒素的作物及其制品的检出，保障人们的食品卫生安全[1]。

1.2 呕吐毒素限量标准

伴随着相关机构对呕吐毒素研究工作的进一步深入，以及人们对食品卫生安全标准的进一步提高，人们对小麦、大豆、玉米等作物及其制品的真菌毒素限量标准的要求较高。当前，世界上已有37个国家与组织对小麦及其制品呕吐毒素设定了最高限值标准，例如，欧盟规定未加工硬质小麦呕吐毒素＜1 750 μg/kg，由于我国居民膳食结构与欧盟人不同，小麦食品摄入量较大，因此，在小麦呕吐毒素限量标准上，比欧盟等各国要求更加严格，《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）规定中国小麦呕吐毒素限量为≤1 000 μg/kg，这一标准限值也成为中国各级政府、质检机构监管食品中真菌毒素的唯一标准，更是中国小麦及其制品生产、仓储、进出口质检中对于呕吐毒素控制的重要指标，一旦检出小麦呕吐毒素添加量超过此限值，可直接勒令其丢弃，并查明毒素来源，加强防控，从源头上解决小麦呕吐毒素污染超标问题[2]。

2 小麦中呕吐毒素检测方法的研究

2.1 高效液相色谱法

称取小麦样品25 g，研碎置于250 mL三角瓶中，并加入HO(CH2CH2O)nH 5 g、水100 mL，混合均匀，静置 20 min,过滤后用免疫亲和柱净化，同时用高效液相色谱-紫外检测器进行测定。以此方法测定结果为认定值，并用酶联免疫测定法检测，对比两种检测法的测定结果。

2.2 酶联免疫测定法

（1）同一批试验样品小麦称取5.0 g，置于具塞三角瓶中，同时加入60%甲醇水溶液25.0 mL，缓慢振荡20 min后，用定性滤纸进行过滤；取过滤液1 mL，加水4 mL，摇匀待检测。将试剂置于室温（20～25 ℃）1 h以上，注意，此过程中每种液体试剂需在使用前摇匀，严格控制温度（20～25 ℃）。

（2）将样本与标准品对应微孔平行排放，并按序编号，同时准确记录标准孔和样本孔所在位置，取标准品或样本50 μL到对应的微孔中，同时陆续加入酶标物50 μL/孔、抗试剂50 μL/孔，缓慢振荡，并用盖板膜覆盖，静置于25 ℃避光环境中反应30 min，而后小心揭开盖板膜，甩出孔内液体，各孔再加入洗涤液250 μL，充分洗涤4～5次（间隔10 s/次），洗涤完成后置于吸水纸上拍干[3]。

（3）加入底物液100 μL/孔，振荡均匀后覆盖盖板膜，置于25 ℃避光环境下反应15 min。

（4）每孔加入终止液50 μL，轻缓振荡、摇匀，设定酶标仪450 nm开始检测，得出各OD值，并进行准确记录。

3 结果与分析

检测结果显示，酶联免疫法正确度范围为90.0%～ 134.6%，平均为105.7%（见表1）。

由表1可知，作为传统的小麦呕吐毒素测定方法－酶联免疫分析法检测数据准确度较高（105.7%）。相较于高效液相色谱法，酶联免疫吸附法（ELISA）快速、灵敏、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯度要求低，特异性强，特别适用于大批量样品的检测，发展迅速，简化了样品预处理和纯化过程。但是由于免疫酶的活性非常不稳定，在应用过程中很容易受到操作条件的影响，反应试剂需低温保存。在实际操作过程中很难达到这一要求，使得免疫酶的活性大大降低，从而影响到检测结果的准确性。应用时还必须通过多次洗涤，才能使反应产物和游离底物进行分离，影响到结果的重复性，而且检测时间较长，无法满足现场快速检测的要求。相信随着相关研究工作的进一步深入，其适用性将进一步增强[4-5]。

表1 酶联免疫法正确度分析

4 结论

为满足日益提升的粮食质量安全快速检测标准，本文基于同一批次小麦试样进行高效液相色谱法与酶联免疫法检测结果的对比分析，发现相较于传统的高效液相色谱法检测结果，酶联免疫法的正确度范围在90.0%～134.6%，平均为105.7%，具备大范围推广应用的特质；相信随着研究力度的不断加大，会有越来越多的高效、便捷、快速的检测方法应用于粮食呕吐毒素检测中，为保障粮食质量安全检测提供便利。