高效液相色谱-串联质谱法测定植物源性 食品中氯吡脲残留量

方亚莉，李 越

（山西省食品药品检验所，山西太原 030031）

氯吡脲，一般指氯吡苯脲，别称膨果龙，是一种有机化合物，用作植物生长调节剂[1]，具有细胞分裂素活性，能促进细胞分裂、分化、器官形成，蛋白质合成，提高光合作用等，其生物活性较6-苄氨基嘌呤高10～100倍，能够影响植物芽的发育、加速细胞有丝分裂、促进细胞增大和分化，防止果实和花的脱落，被广泛用于农业、园艺与果树，促进植物生长、早熟、延缓作物后期叶片的衰老、增加产量。然而，氯吡脲的使用有一定的技术要求，正常使用条件下，可以促进果实增大、早熟、提高产量，如果过量使用或使用时期不当，可以引起果实畸形、裂果、掉果等药害现象。目前，氯吡脲的检测方法有液相色谱法[2]、液相色谱-串联质谱法[3]，后者灵敏度高，检出限低[4]。本研究选取橙子为试验材料，采用随行回收试验，参照《食品安全国家标准 植物源性食品中氯吡脲残留量的测定 液相色谱-质谱联用法》 （GB 23200.110—2018）[5]，采用外标法定量，建立了橙子中氯吡脲残留量检测的高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

橙子（购自某超市）；氯吡脲（BePure，批号：C0008732， 含量：999.7 μg/mL）；乙腈为色谱纯；4 g无水硫酸镁和1 g氯化钠试剂包；50 mgPSA和150 mg无水硫酸镁试剂包；实验室一级超纯水。

1.2 仪器与设备

8050液相色谱－质谱串联仪（日本岛津）；电子天平（美国奥豪斯，精密度0.001 g）；粉碎机（德国莱驰）；涡旋混合器（德国ZKA）；离心机（安徽中科中佳科学仪器公司）等。

1.3 试样提取方法及净化

称取试样10 g（精确到0.01 g），置于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，涡旋振荡提取3 min，向离心管中加入 4 g无水硫酸镁和1 g氯化钠，涡旋1 min；然后4 000 r/min离心5 min，取1.5 mL上清液待净化。将1.5 mL试样上清液放入装有50 mg PSA和150 mg无水硫酸镁的2 mL离心管中，涡旋30 s，5 000 r/min离心5 min，取上清液过有机系滤膜，供液相色谱－串联质谱仪检测。

1.4 标准溶液及工作曲线配制

1.4.1 标准储备溶液

准确吸取1.0 mL氯吡脲标准溶液，用乙腈溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为99.97 μg/mL的氯吡脲标准储备液。

1.4.2 标准工作溶液

准确吸取0.1 mL氯吡脲标准储备液，用乙腈溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为0.999 7 μg/mL的氯吡脲标准工作中间液。

1.4.3 基质标准工作系列的制备

称取阴性空白基质样品约10 g，按照1.3操作步骤提取、净化制备。分别吸取氯吡脲标准工作中间液0 mL、0.01 mL、 0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL和0.40 mL，用空白样品基质溶液定容至1 mL，配制成系列标准溶液浓度分别为0 μg/mL、0.009 997 μg/mL、0.049 985 μg/mL、0.099 970 μg/mL、 0.199 940 μg/mL和0.399 880 μg/mL。

1.5 液相色谱-质谱条件

1.5.1 液相条件

色谱柱：YMC C18（1.9 μm，150 mm×2.1 mm）；柱温：45 ℃；流速：0.2 mL/min；进样量：10 μL；流动相：乙腈+0.2%甲酸溶液。梯度洗脱程序见表1。

表1 流动相梯度洗脱程序

1.5.2 质谱条件

离子源类型：ESI；离子源温度：300 ℃；雾化器流速：3.0 mL/min；干燥气流速：10 mL/min；扫描方式：正离子；扫描模式：MRM。质谱参数：Q1（m/z）：248；Q3（m/z）：129（定量）/93；碰撞能量CE（V）：16/34。

2 结果与分析

2.1 线性关系及检出限

将配制的基质标准工作系列在1.5的仪器条件下测定，以标准系列溶液浓度为横坐标，以目标物相应浓度点测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程y=1.285 81×107x+21 392.6，相关系数R2=0.999 8，线性关系良好。根据10倍信噪比的峰响应值为定量限，得该方法定量限为0.01 mg/kg，满足国家食品安全监督抽检植物源性食品中氯吡脲残留量的要求。

2.2 方法回收率与重复性

取阴性样品，添加定量限、限量值、10倍定量限3个浓度水平的氯吡脲标准溶液进行加标回收试验，其余处理过程同1.3操作步骤中供试品溶液制备，每个浓度平行测定6次，计算加标回收率和重复性RSD，结果见表2。

表2 橙子加标回收率及精密度试验结果

2.3 精密度与稳定性试验

选用浓度为0.049 985 μg/mL的橙子基质标准工作液连续进样6次，记录氯吡脲的峰面积，计算精密度得RSD为0.34%，符合《液相色谱-质谱联用仪校准规范》 （JJF 1317-2011）[6]规定精密度RSD＜10%的要求。选用浓度为0.099 97 μg/mL的橙子基质标准工作液连续24 h重复上机测定，每隔4 h选取一组数据记录峰面积，考察其稳定性，计算RSD为5.27%，表明该方法稳定性良好。

3 结论

本研究参照GB 23200.110—2018，建立了LC-MS/MS法测定橙子中氯吡脲残留量的方法，该方法线性关系良好，重复性、回收率、精密度、稳定性等符合相关标准要求，能够满足实验室对橙子中氯吡脲残留检测的需求，可为食品检验检测机构开展植物源性食品中氯吡脲残留检测提供参考。