A单抗原液深层过滤中间产物电荷异质性稳定性影响因素研究

苏贤德 谢一龙通讯作者 陆建胜 胡伟伟

正大天晴药业集团南京顺欣制药有限公司 江苏南京 210000

如表1所示，A单抗原液工艺验证第一批样品检测时，发现DF1-Int样品存放30h（DF0102）、40h（DF0103）后，离子交换色谱法检测时与0h（DF0101）相比，酸区含量分别上升4.2%、6.9%，而该批亲和层析五个循环中间产物间（AC0101~AC0105）电荷异质性差异不大，且与下罐质量（US3001）一致，表明在亲和层析五个循环上样过程中，收获罐内DF1-Int电荷异质性未产生明显变化[1]。因此，推测DF0102、DF0103样品电荷异质性检测结果异常为离线存放或检测过程中，样品冻存、样品与空气接触比表面积、光照等其他干扰因素影响导致。

表1 A单抗原液工艺验证第一批电荷异质性检测结果

1 试验方案

1.1 冻存对DF1-Int电荷异质性的影响

A单抗原液工艺验证第一批DF0102、DF0103样品为冻存后检测，为考察样品冻存对检测结果的影响，工艺验证第三批DF0101、DF0102、DF0103样品取样后立即检测[2]。

1.2 样品与空气接触的比表面积对DF1-Int电荷异质性的影响

A单抗原液工艺验证第一批DF0102、DF0103样品为在玻璃瓶中存放至规定时间后检测。由于取样量小，与收获罐中实际样品相比，玻璃瓶中样品在存放期间与空气接触的比表面积更大，可能导致样品电荷异质性变化情况远大于实际样品。在工艺验证第四批除检测DF0101、DF0102、DF0103样品外，另取60mlDF1-Int至玻璃容器中，玻璃瓶避光存放。在该批亲和层析进行至第二、三、四、五循环上样结束前，分别从收获罐和玻璃瓶中取样、捕获、检测电荷异质性。

1.3 光照对DF1-Int电荷异质性的影响

A单抗原液工艺验证第一批DF0102、DF0103样品在存放时未避光处理，而商业化规模实际生产过程中DF1-Int样品避光存放，第一批DF-Int存放样品电荷异质性检测检测结果异常可能由光照导致。

在工艺验证第五批深层过滤结束后，取等量DF1-Int至两个同样的玻璃瓶中，分别于避光和光照下存放10h、超过30h、超过40h。到达取样时间后，两个试验组样品同步取样、捕获、检测，并与0h样品的电荷异质性进行对比。

2 结果与分析

2.1 冻存对DF1-Int电荷异质性的影响

检测结果如表2所示。该批DF1-Int在玻璃瓶中存放超30h、40h后，酸区分别升高4.3%、7.2%，变化趋势基本与第一批一致。结果表明，样品冻存后检测并非导致DF0102、DF0103样品电荷异质性检测结果异常的主要原因。

表2 A单抗原液工艺验证第三批电荷异质性检测结果

2.2 样品与空气接触的比表面积对DF1-Int电荷异质性的影响

如表3所示，通过对比两种存放容器样品电荷异质性可知，在同一取样时间，玻璃瓶中样品酸区较收获罐中样品酸区差值均＜2%，收获罐与玻璃瓶样品电荷异质性无明显差异。

表3 A单抗原液工艺验证第四批电荷异质性检测结果

如表4所示，本批DF0101、DF0102、DF0103样品电荷异质性无明显差异，DF1-Int在玻璃瓶中存放超30h、40h后，酸区仅升高1.9%、2.9%，远低于第一批的4.2%、6.9%。

表4 A单抗原液工艺验证第四批DF0101~DF0103电荷异质性变化情况

本部分研究结果表明，相同的存放温度和存放时间下，收获罐和玻璃瓶中DF1-Int电荷异质性无明显差异，玻璃瓶中样品在18～25℃、避光存放时可较好地模拟收获罐中样品的电荷异质性变化趋势。

2.3 光照对DF1-Int电荷异质性的影响

工艺验证第5批DF-Int电荷异质性检测结果见表五。

表5 A单抗原液工艺验证第五批DF-Int存放0~40h电荷异质性变化情况

如图1所示，DF1-Int在玻璃瓶中18～25℃、避光存放时电荷异质性稳定性良好。与DF0101相比，存放40h后主峰仅降低0.9%、酸区升高0.8%、碱区升高0.1%。

图1 A单抗原液工艺验证第五批DF1-Int（避光存放）电荷异质性稳定性结果

如图2所示，DF1-Int在玻璃瓶中18～25℃、光照下存放时，样品电荷异质性显著变化。存放40h后主峰降低11.6%、酸区升高16.7%、碱区降低5.1%。

图2 A单抗原液工艺验证第五批DF1-Int（不避光存放）电荷异质性稳定性结果

由于A单抗工艺验证第一批存放于玻璃瓶中的DF0102、DF0103样品在实际存放于层析纳滤间缓冲液存储罐平台处的周转框中，样品光照强度弱于第五批光照处理组，且第二步深层过滤结束后层析纳滤间光源关闭，样品实际光照时间短于试验组，因此工艺验证第一批DF1-Int电荷异质性变化趋势弱于本研究中的光照实验组[3]。

3 结语

（1）本试验结果表明，样品冻存并非导致DF0102、DF0103样品电荷异质性检测结果异常的主要原因。A单抗原液DF1-Int样品在玻璃瓶18～25℃避光存放，基本能够模拟样品在收获罐中产品质量变化情况。

（2）通过本研究，可初步判断A单抗工艺验证第一批批次DF0102、DF0103样品电荷异质性检测结果异常，主要由样品离线存放过程中受光照影响导致。

（3）本次试验结果表明，DF1-Int在光照下存放后，样品酸区含量上升，主峰和碱区下降，建议A单抗原液后续批次生产过程中，DF1-Int在存放、上样和检测过程中尽量避光。