酶联免疫吸附法与RT-PCR法对血液标本内乙肝病毒的检验价值比较

张 刚

（商城县人民医院 检验科，河南 信阳 465350）

乙型肝炎属于常见传染病，其主要由乙肝病毒（HBV） 感染所致，临床表现为上腹部不适、肝区疼痛、乏力等，长期携带HBV 还可诱发肝硬化、肝衰竭等严重并发症，甚至进展为肝癌，威胁患者生命[1]。目前，临床对于该病多以早确诊早治疗为主，因而寻找高效准确的检测方法尤为重要。但随着临床抗病毒药物滥用等情况，使得HBV 出现变异，影响传统血清学检测准确性、敏感性[2]。而随着生物技术发展，实时荧光定量PCR法（RT-PCR） 逐渐用于临床检测，克服传统PCR定量缺陷，对于病毒DNA 定量更为精准[3]。鉴于此，本研究旨在分析酶联免疫吸附法与RT-PCR法应用于HBV 检测中的临床价值，现报告如下。

资料与方法一、一般资料 选取2017年12月-2019年12月我院收治的乙型肝炎患者78 例，其中男41 例，女37 例；年龄27～59 岁，平均年龄（37.55±4.83） 岁。纳入标准：均确诊为乙型肝炎；尚未进行抗病毒治疗；患者及家属知情同意。排除标准：甲型等其他类型肝炎；伴随肝部恶性肿瘤；存在心脑血管严重病变。

二、检测方法 所有患者均于清晨抽取静脉血5mL，置于4℃冰箱2h，离心取得血清后待检。通过酶联免疫吸附法定性检测乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e 抗原（HbeAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙肝核心抗体（HbcAb） 及乙肝E 抗体（HbeAb），严格按操作标准执行。RT-PCR 法定量检测：仪器选用达安DA7600，将450μL 的DNA提取液与200μL 血清样本混合，以100℃预热10min，冰冻离心机内离心5min，于PCR 管内置入20μL 上清液，严格按操作程序检测，之后设立阴性、弱阳性、阳性等对照组，反应结束后取Ct 值制作荧光曲线，依据Ct 值计算DNA 值。

三、观察指标 2 种方法检测结果：记录2种方法检测乙肝五项结果，对比HBV-DNA、大三阳、小三阳阳性率。大三阳：HBsAg、HbeAg 与HbcAb 三者检测均为阳性；小三阳：HBsAg、HbeAb 与HbcAb 三者均为阳性。HBV-DNA ＞103copies/mL 为阳性。

四、统计学方法 采用SPSS 22.0 分析数据，计数资料以百分数表示，用χ2检验；计量资料以（±s） 表示，用t检验；P＜0.05 为差异有统计学意义。

结 果酶联免疫吸附法检测：HbeAg 阳性33 例，阳性率42.31% （33/78）；HBsAg 阳性48例，阳性率61.54% （48/78）；HbcAb 阳性41 例，阳性率52.56% （41/78）；HbeAb 阳性阳性45 例，阳性率57.69%（45/78）；HbsAb 阳性50 例，阳性率64.10% （50/78）。大三阳例数33 例，阳性率42.31%，小三阳例数41 例，阳性率52.56%；RT-PCR 检测：HBV-DNA 阳性62 例，阳性率79.49%（62/78）。大三阳阳性率低于HBV-DNA 阳性率，差异有统计学意义（χ2=22.640，P＝0.000）。小三阳阳性率低于HBV-DNA 阳性率，差异有统计学意义（χ2=12.603，P＝0.000）。

讨 论乙肝传染性较强，HBV 侵入肝脏后可持续大量复制，促使机体出现抗原性物质，进而对免疫系统造成刺激，致使免疫损伤。若不及时控制病毒，可进一步恶化，导致机体内出现持续炎症反应，最终诱发肝硬化等疾病[4]。同时，随着乙肝进展，其体内乙肝病毒标志物可呈不同状况，如大三阳表示患者体内HBV DNA 处于高复制率、高传染性状态，而小三阳则代表机体处于恢复期，但仍存在HBV DNA 复制。而随着HBV 逐渐变异，传统血清检测准确性已无法满足临床诊疗需求。酶联免疫吸附法属于临床常用血清检测方式，可通过检测特异性抗体、抗原，判断是否存在HBV 感染，并直观反映HBV 侵入后机体免疫应答水平，从而为临床诊疗提供参考依据[5]。但该方法无法对HBV 传播程度、复制情况进行准确分析。本研究结果显示，HBV-DNA 阳性率高于大三阳、小三阳阳性率，表明RT-PCR 用于乙肝检测中临床价值优于酶联免疫吸附法，可准确反映HBV 复制情况，便于临床加强治疗。RT-PCR 属于病原学检测，其灵敏性、特异性较高，通过每毫升拷贝数定量发出检测报告，可更真实、准确、直接反映患者体内HBV DNA 状况，便于临床医师判断HBV 复制及传染状态[6]。同时，部分患者痊愈后，其体内仍可能存在少量HBV DNA 复制现象，但血清学检测已无法准确判断是否完全清除，而RT-PCR 则可通过定量检测，及时发现并予以干预，以免病情发展。

综上所述，RT-PCR 检测HBV 可准确反映其传染性及复制状况，利于临床早期诊断，监测疗效，及时采取防治措施，控制病情。